NEUT－X、NEUT－Y参数在细菌感染诊断中的价值探讨

崔 玲，刘 云，金立钢，柏晓松

(上海市杨浦区市东医院检验科，上海200438)

细菌感染是引起白细胞总数和中性粒细胞增多最常见的原因，及时准确的诊断对临床治疗和疾病预后具有重要意义。血培养是细菌感染的金标准，但其阳性率低、易受污染、且报告周期长[1-2]。其他指标如降钙素原、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)等也是细菌感染诊断重要的辅助指标，但需要额外化验检查。因此，找到一种快速方便的诊断指标十分必要。

机体发生感染时，病原微生物及相关炎症因子活化中性粒细胞，引起中性粒细胞胞浆内中毒性颗粒和细胞核核酸含量的增加，以合成抗菌活性成分抵抗微生物的侵袭。中性粒细胞中毒性颗粒是重度感染的重要指标，但其操作方法繁琐，半定量且具有一定的主观性。Sysmex XT-2000i全自动血液分析仪检测中性粒细胞时通过侧向散射光(SSC，以 NEUT-X表示)反映细胞的内容物(核、颗粒)，侧向荧光(SFL，以 NEUT-Y表示)反映细胞的DNA和RNA含量，上述2个指标与中性粒细胞的活化密切相关，已得到相关研究的验证[3]。我们对中性粒细胞参数NEUT-X和NEUTY的变化规律进行观察分析，以探讨其在感染性疾病诊断中的临床应用价值。

材料和方法

一、对象

1.感染组 收集2013年3月至5月上海市市东医院收治的发热病例，经血、痰或其他体液细菌培养阳性，确诊为细菌感染的患者114例，其中男61例，女53例，年龄18～90岁。

2.细菌培养阴性组 收集2013年3月至5月收治的发热、经标本细菌培养阴性的患者96例，其中男57例，女49例，年龄16～79岁。

3.正常对照组 选择上海市市东医院健康体检者142名，其中男68名，女74名，年龄20～75岁。

二、仪器与试剂

SYSMEX XT-2000i全自动血液分析仪及配套试剂、质控品、校正品由日本Sysmex公司提供。该血液分析仪每半年进行性能评价和正确性验证，配套室内质控中反映激光稳定性的参数是DIFF-X和DIFF-Y。这2个参数在实验期间的室内质控结果见图1。乙二胺四乙酸二钾(EDTAK2)真空抗凝管;瑞吉复合染液及pH值6.4～6.8磷酸盐缓冲液;Quikread蛋白免疫分析仪及配套试剂。

图1 DIFF-X、DIFF-Y室内质控结果图

三、方法

严格按照临检操作规程[4]采集患者静脉血2 mL，于EDTA-K2抗凝管轻摇混匀备用，样本分析在2 h内完成。血涂片经瑞吉染色后，人工显微镜下观察中毒颗粒占中性粒细胞(100个或200个)的百分率，计算中性粒细胞的毒性指数(TI)。使用QuikRead蛋白免疫分析仪测定血CRP水平，按仪器操作手册进行操作。

四、统计学方法

采用SPSS 16.0软件进行统计分析。对数据进行正态性检验，服从正态分布的数据以±s表示。2组间均数用独立样本t检验分析，多组间均数比较用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、各组中性粒细胞NEUT-X、NEUT-Y参数结果

感染组NEUT-X、NEUT-Y和NEUT-Z参数与细菌培养阴性组、正常对照组比较差异均有统计学意义(P ＜0.05)，见表1。

二、NEUT-X、NEUT-Y与CRP的相关性

NEUT-X、NEUT-Y与CRP的相关系数(r)分别为 0.518、0.491，均具有较好的相关性，见图 2。

表1 各组中性粒细胞NEUT-X、NEUT-Y、NEUT-Z参数的比较

图2 NEUT-X、NEUT-Y与CRP相关性分析

三、NEUT-X、NEUT-Y和CRP参数在细菌感染诊断中的应用

运用受试者工作特征(ROC)曲线分析NEUT-X、NEUT-Y和CRP参数的敏感性和特异性，其曲线下面积分别为 0.789、0.725、0.862，见图3。当NEUT-X、NEUT-Y和 CRP临界值(Cutoff值)取1 370.5、408.5、20.5 mg/L 时，敏感性分别为 71.1%、86.0%、94.7%，特异性分别为75.6%、50.0%、71.4%，见表 2。

四、NEUT-X在TI判断中的作用

TI常用于提示感染的严重程度，表示中毒颗粒占中性粒细胞的百分率。1为极重，0.75为重度，0.5为中度，＜0.25为轻度。图4显示NEUTX、NEUT-Y、CRP与TI均具有较好的相关性，r值分别为 0.764、0.593、0.716，P 均 ＜0.01。

图3 NEUT-X、NEUT-Y和CRP诊断细菌感染ROC曲线分析

表2 NEXT-X、NEUT-Y及CRP诊断细菌感染ROC曲线分析

图4 NEUT-X、NEUT-Y、CRP与TI的相关性分析

讨 论

SYSMEX XT-2000i全自动血液分析仪白细胞分类采用半导体激光流式细胞技术结合核酸荧光染色技术对白细胞进行检测。加入特殊的白细胞分类溶血剂和聚次甲基荧光染色液，获得白细胞分类散点图，侧向荧光反映每个细胞核酸含量，侧向散射光反映每个细胞内容物复杂程度，平均每个细胞的上述2项数值，由此得到中性粒细胞参数NEUT-X、NEUT-Y和淋巴细胞参数LYMPH-X、LYMPH-Y。

细菌感染时，机体进行应激反应，从骨髓中动员释放大量中性粒细胞，对病原微生物进行吞噬和杀灭，中性粒细胞数量增多、比例升高，出现中毒颗粒、空泡样变化、核左移、杆状核增多、Dole样小体等现象。中性粒细胞被激活后，细胞胞浆中出现细胞器增大变粗现象，引起侧向散射光增强而使NEUT-X参数增高;同样由于中性粒细胞被激活，细胞合成蛋白和核酸明显增加，聚次甲基荧光染色液对核酸进行染色引起侧向荧光增强，从而引起 NEUT-Y参数增高。因此 NEUT-X、NEUT-Y参数能很好地反映细菌感染时中性粒细胞在形态和生理上的变化[6]。

本研究结果显示感染组NEUT-X、NEUT-Y分别为1 391.4 ±42.3、450.9 ±40.9，明显高于细菌培养阴性组(1 344.5 ±37.0、422.7 ±45.9)和正常对照组(1 351.7 ± 33.7、415.8 ± 32.2)(P ＜0.01)。诊断细菌感染时NEUT-X和NEUT-Y的ROC曲线下面积分别为0.789和0.725。以上结果表明NEUT-X和NEUT-Y用于指示细菌感染具有很高的临床应用价值。另外，NEUT-X、NEUT-Y与CRP和TI的相关性均较高。

众所周知，白细胞计数和中性粒细胞百分率(NE%)异常升高是细菌感染的重要参考指标。但人体血液中正常状态下白细胞的基础值个体差异较大，参考区间较宽，又易受运动、精神等多种因素影响。当机体发生局限性轻度感染以及患者对外界感染因素反应性较差如老年人、恶病质及严重感染时，或某些药物、放疗或免疫功能不全等原因，可致使白细胞计数不升高甚至降低，此时再利用这2个指标来辅助诊断细菌感染就不是很准确[6-7]。实际上这时候中性粒细胞虽然在数量和比例上没有明显变化，但形态上已经发生了变化，若血涂片染色后人工显微镜下观察，可发现中性粒细胞的中毒颗粒并计算出TI。但该方法操作繁琐，半定量且具有一定的主观性。NEUT-X数值的大小可反映中性粒细胞的内容物(核、颗粒)的复杂程度。本研究显示NEUT-X、NEUT-Y和TI均具有较高的相关性，其中NEUT-X的相关性更高。CRP是细菌感染另一个重要的参考指标。本研究中CRP诊断细菌感染ROC曲线下面积为0.862，高于 NEUT-X 和 NEUT-Y，但其与 TI的 r值＜NEUT-X。另外，在诊治过程中，CRP结果的获取需要额外的检查和费用，一定程度上可能会增加患者的负担。

总体来说，SYSMEX XT-2000i全自动血液分析仪的NEUT-X、NEUT-Y参数能实际反映细菌感染时激活的中性粒细胞内在结构或生物物理病理性质的变化，而且操作简单快捷，不需额外处理和费用，因此可以作为一种新的辅助诊断细菌感染的实用指标。

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[4]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社，2006:137-143.

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