解毒通脉胶囊质量标准的研究＊

2013-12-23邓国健尹小娥陕西中医学院附属医院咸阳712000

陕西中医 2013年2期

张丽邓国健尹小娥陕西中医学院附属医院（咸阳712000）

解毒通脉胶囊处方来源于临床经验方，由黄连、三七、莲子心、全瓜蒌、半夏、莱菔子、丹参和赤芍八味中药组成，具清热解毒、化痰祛瘀、宣痹通脉之功效，临床用于治疗热毒痰瘀型冠心病不稳定型心绞痛。制剂中成分复杂，为有效控制本品的质量，对其质量标准进行了定性和定量研究，制定了三七、赤芍、丹参的薄层鉴别［1］，并采用高效液相色谱法对其所含有效成分盐酸小檗碱［2，3］进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1仪器 ZB－1D智能药物崩解仪（上海）；D101型电热鼓风干燥箱（北京科伟永鑫实验设备厂）；水分测定仪（上海）；梅特勒电子天平（万分子一）；L－2130高效液相色谱仪（日本日立L－2400检测器，EZStart 工作站），Diamonsil C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱。

GB204型万分之一天平（瑞士），KH－400KED 型超声波清洗机（昆山禾创超声仪器有限公司）。

1.2 试药本品项下所用样品为由陕西中医学院附属医院自制（批号：101220、101225、101230）；所用化学试剂均为分析纯；硅胶G（青岛海洋化工厂生产）；盐酸小檗碱对照品、芍药苷对照品、三七对照药材、丹参对照药材（批号依次为：110713－200208、0736－200414、120941－200405、120923－200408中国药品生物制品检定所）。样品乙腈（美国Fisher公司）为色谱纯，水为二次重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 定性鉴别

2.1 三七定性鉴别取本品内容物5g，研细，加甲醇30mL，超声40min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10mL使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取3次（20mL、10mL、10mL），合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2 次（10mL、10mL），弃去水溶液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，得供试品溶液。阴性供试品溶液的制备：以处方中药味比例和制备工艺制成不含三七的空白样品，再按供试品制备方法处理，制成阴性对照溶液。取三七对照药材0.5g，加70%乙醇约20mL，加热提取1h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.2mL使溶解，得对照药材溶液。照薄层色谱法［1］试验吸取上述三种溶液各10μl分别点于硅胶G 薄层板上，各点10uL，以氯仿—甲醇—正丁醇—水（2∶1∶4∶2）10℃以下放置12h以上的下层溶液为展开剂，预饱和20min，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸溶液，加热使斑点清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上有相同颜色的主斑点。

2.2 赤芍定性鉴别取本品内容物5g，加乙醇25mL，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL 使溶解，得供试品溶液。以处方中药味比例和制备工艺制成不含赤芍的空白样品，再按供试品制备方法处理，制成阴性对照溶液。取芍药苷对照品，加甲醇制成lmL 含lmg的溶液，得对照品溶液。照薄层色谱法［6］试验吸取上述三种溶液各10μL分别点于硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，凉干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

2.3 丹参定性鉴别取本品内容物5g，研细加乙醚30mL，超声20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL 使溶解，得供试品溶液。以处方中药味比例和制备工艺制成不含丹参的空白样品，再按供试品制备方法处理，制成阴性对照溶液。取丹参对照药材1g，同供试品法制备，得丹参对照药材溶液。照薄层色谱法［6］试验吸取上述三种溶液各10μL分别点于硅胶G 薄层板上，以苯－甲醇（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，阴性无干扰。

3 含量测定研究

黄连为方中君药，现代药理研究表明，黄连改善微循环、抗心律失常，其含有的盐酸小檗碱能抑制血清游离脂肪酸的增高，降低梗死后病理性Q 波的发生率，对缺血性心肌具有保护作用；具有抗血小板聚集、降压、降血脂作用。因此本研究以其主要成分盐酸小檗碱为指标成分进行含量测定。

3.1 色谱条件与系统适用性试验流动相∶乙腈－0.05mmol／L磷酸二氢钾溶液（50∶50）（每100mL 中加十二烷基磺酸钠0.4g，再以磷酸调节pH 值为4.0）；检测波长345nm，流速1.0mL／min柱温：室温。在此条件下，理论板数以盐酸小檗碱峰计算为5000（附图1），样品中盐酸小檗碱得到良好分离（附图2），缺黄连空白样品盐酸小檗碱在峰处无吸收（附图3），不影响本品的测定。质量标准附图

图1 盐酸小檗碱对照品HPLC色谱图

图2 解毒通脉胶囊样品HPLC色谱图

图3 解毒通脉胶囊缺黄连阴性HPLC色谱图

3.2 对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品10mg，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液制备取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，超声处理30min（功率250W，频率40kHz），放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1mL，置10mL 量瓶中，加甲醇到刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

3.4 标准曲线及线性范围分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（C＝0.01mg／mL）3、5、10、15、20μL，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，测定。以面积对进样量（μg）回归，得回归方程，A＝15775904.6653C＋82297.1055，相关系数R2＝0.9991，表明盐酸小檗碱在0.03～0.20μg之间线性范围良好。

3.5 精密度实验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（浓度0.01mg／mL）5μl，重复进样5次，计算出RSD%＝0.21%，表明该方法精密度良好。

3.6 稳定性试验精密称取本品（批号：101220）内容物适量，按供试品溶液制备项下的方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液5μl，每隔2h测定1次（0、2、4、6、8、10h），分别进行测定，结果表明供试品溶液稳定性良好，RSD%＝0.43%（n＝6）。

3.7 重复性试验取本品（批号：101220）6 份，按供试品溶液制备方法，制备样品溶液，并依据上述色谱条件，精密吸取各样品溶液5ul，进样，测定计算含量，测得盐酸小檗碱的平均含量为7.3166mg／粒，RSD%＝0.50%，表明本品重复性良好。

3.8 加样回收试验取已知含量的样品（批号：101220，C＝7.3166mg／粒，即C＝18.2915mg／g）6份，分别精密加入盐酸小檗碱对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备加样回收供试品溶液，测定盐酸小檗碱的含量，计算回收率结果见表1。