慈菇消脂丸对酒精性脂肪肝大鼠脂代谢及肝脏形态学的影响

古宁艳，杨少军，王 欢

（1.甘肃中医学院，甘肃兰州730000； 2.甘肃省中医学院附属医院，甘肃兰州730000； 3.山西中医学院，山西太原030024）

酒精性脂肪肝是酒精性肝病的早期阶段，其发展为肝硬化的危险性比单纯脂肪肝高［1］。目前其发病机理尚不完全清楚，缺乏有效的临床治疗药物。本研究旨在观察“慈菇消脂丸”对酒精性脂肪肝大鼠肝脏形态学、血脂及肝功能的影响，以进一步探讨“慈菇消脂丸”调节脂质代谢的作用机理。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 健康成年SD雄性大鼠72只，体重为（200±20）g，由甘肃中医学院实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK2004-006。

1.1.2 药品与试剂 慈菇消脂丸（浓缩型），主要由山慈菇、泽泻、山楂、丹参、土鳖虫、柴胡、黄芩、法半夏、决明子等15味药物组成（甘肃中医学院附属医院制剂中心提供，生产批号：071217）。罗格列酮片：成都恒瑞制药有限公司（批准文号：国药准号H20041399，批号：20090422）。MA-100A型酶标仪（杭州博特仪器设备有限公司），TG、TC、ALT、AST、碱性磷酸酶测定为厦门惠嘉生物科技公司ELISA试剂盒。

1.2 实验方法

1.2.1 造模及分组 按文献方法，取SD雄性大鼠62 只，体重（200±20）g，每日给予大鼠标准食物和饮用水各2次，保持光照和避光循环饲养各12 h。将所有大鼠以随机数字表法抽取10只为正常组，每日灌胃生理盐水4 mL。其余52只采用乙醇灌胃法建立酒精性脂肪肝大鼠模型：给予大鼠40%乙醇8 g/（kg·d）灌胃，每日2次，间隔8 h，至第4周末。第5周开始，将乙醇浓度增至50%乙醇10 g/（kg·d），至第8周末随机处死造模大鼠2只，取出肝脏做病理切片，检测证实模型复制成功。造模成功后，正常组继续每日灌胃生理盐水4 mL，造模的50只大鼠按体重大小排列，通过随机数字法分为模型组、阳性对照组、慈菇消脂丸组（包括高剂量、中剂量、低剂量组）5组，继续酒精灌胃4 w，并分别灌服相应药物。实验期间观察体重、饮食。

1.2.2 给药 造模完成后，按人与大鼠体表面积比折算成等效剂量。慈菇消脂丸高剂量组按10倍量即3.75 g/100 g体重，慈菇消脂丸中剂量组按5倍量即1.88 g/100 g体重，慈菇消脂丸低剂量组按2倍量即0.75 g/100 g体重，阳性对照组：0.1 g/100 g体重。慈菇治疗组（高、中、低组）及阳性对照组均灌胃给药4 w，每天1次。灌胃体积为1 mL/100 g。正常组每日灌胃等剂量的生理盐水。

1.2.3 处理方法 末次给药后，大鼠禁食12 h，饮水不限，称大鼠体重。大鼠处死后，股主动脉采血制备血清；作腹部正中切口打开腹腔，迅速取出肝脏，称重，观察大体外观后，取肝左叶相同部位0.5 g放入10%多聚甲醛中，供HE染色以及做免疫组化用。保存在-80℃冰箱中。

1.2.4 观察指标 血脂TG、TC、肝功能ALT、AST、碱性磷酸酶等指标均采用酶联免疫法（ELISA），严格按说明书操作。光镜下评估肝脂肪变性程度，判断标准按照脂变细胞占肝细胞的百分比进行程度分级。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS11.0进行统计学分析，所有指标以（s）表示，组间比较采用两样本均数的t检验。

2 结果

2.1 慈菇消脂丸对酒精性脂肪肝大鼠血清AST、ALT水平的影响

结果见表1。

表1 各组大鼠血清AST、ALT水平比较 （s）

表1 各组大鼠血清AST、ALT水平比较 （s）

注：与正常组比较，1）P＜0.05）；与模型组比较，2）P＜0.05

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从表1可知，模型组大鼠的血清AST、ALT水平明显增高，与模型组比较，阳性对照组、慈菇消脂丸中、高剂量组大鼠血清AST、ALT水平显著降低，低剂量组大鼠血清AST明显降低（P＜0.05）。慈姑化脂丸各剂量组与阳性对照组比较，差异无统计学意义，说明二者降脂作用相当。

2.2 慈菇消脂丸对酒精性脂肪肝大鼠血脂水平的影响

结果见表2。

表2 各组大鼠血清TC、TG水平的影响 （s）

表2 各组大鼠血清TC、TG水平的影响 （s）

注：与正常组比较，1）P＜0.05；与模型组比较，2）P＜0.05

组别 n 剂量（g/kg）TC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL-C（mmol/L）

从表2可知，酒精性脂肪肝大鼠的血脂TC、TG、LDL-C水平明显增高，慈菇消脂丸对于调节模型大鼠的血脂水平具有显著疗效。与阳性对照组比较，差异无统计学意义。

2.3 各组大鼠肝脏病理学变化

2.3.1 大体观察 肉眼观察正常组大鼠肝脏形态正常。模型组大鼠肝脏外观呈弥漫性肿大，表面色泽苍白或带灰黄色，包膜紧张，边缘钝而厚，质如面团，压迫时出现凹陷，切面油腻状。与模型组相比，各剂量组大鼠肝脂肪变性程度均有不同程度的改善。

2.3.2 HE染色光镜观察 正常组：肝小叶内无脂肪变性炎症和坏死。模型组：肝小叶内出现大量脂肪变性，汇管区伴有炎细胞浸润以及部分点状肝细胞坏死。慈菇消脂丸各剂量组，肝脏脂肪变性和炎症均有不同程度的减轻。与正常组比较，模型组大鼠肝脏脂肪变性程度明显增高（P＜0.01）。与模型组相比，慈菇消脂丸低、中剂量组脂肪变性程度有所降低（P＜0.05），慈菇消脂丸高剂量组和阳性对照组脂肪变性程度明显降低（P＜0.01）。结果见图1、表 3。

3 讨论

慈菇消脂丸（浓缩型）主要由山慈菇、泽泻、决明子、何首乌、丹参等15味药物组成，有化痰解毒、消脂散结、逐瘀通络功效。方中君药山慈菇主要起化痰降脂作用。药理研究证实，丹参有改善微循环、抗氧化、抗自由基、促进肝脾回缩的作用；泽泻可抑制外源性TG、TC的吸收，影响内源性TC及抑制肝内TG的合成；决明子可升高HDL，降低TC，抗血小板聚集，软化血管，抗脂肪肝。何首乌对大鼠实验性脂肪肝过氧化脂质含量上升有显著对抗作用，能使血清游离脂肪酸（FFA）及肝脏过氧化脂质显著下降；其所含的蒽醌类化合物还能促进肠蠕动，抑制胆固醇在肠道再吸收，并促进胆固醇代谢［2］。

图1 各组肝组织病理学变化（HE×40）

表3 各组大鼠肝脏脂肪变性程度

ALT和AST是反映肝细胞损害的常用的酶学检查指标。ALT主要分布于细胞质，而AST主要分布于细胞质和线粒体，是一种线粒体酶，极易受到酒精的影响［3］。这可能与乙醇易造成线粒体肿胀、损伤，使大量存在于线粒体中的AST进入周围循环系统有关，因此酒精性脂肪肝引起AST升高往往比较明显。转氨酶是肝细胞损害的敏感标志，也是乙醇所致肝损害最敏感的指标，反映肝细胞坏死的程度，其严重程度直接关系到酒精性肝病的发展与转归［4］。

本研究结果显示，酒精性脂肪肝大鼠模型血脂、肝功能肝脏脂肪变性指标在慈姑消脂丸治疗后显著改善，对TC、TG、HDL-C及LDL-C均有不同程度的改善，能够减轻肝细胞脂肪变性，从而起到对酒精性脂肪肝的防治作用。

［1］Hoek J B，Pastorino J.Cellular signaling mechanisms inalcoho-l induced liver damage［J］.Semin Liver Dis，2004，24（3）：257-272.

［2］孟陆亮，杨少军，白洲霞，等.慈菇消脂丸对脂肪肝大鼠脂代谢和超氧化物歧化酶的影响［J］.中医药学报，2009，37（5）：23.

［3］French S W.Mechanisms of alcoholic liver injury［J］.Can J Gastroenterol，2000，14（4）：327-332.

［4］于学美，韩涛，崔西泉，等.补益肝气方药对酒精性脂肪肝模型大鼠TNF-α 含量的影响［J］.泰山医学院学报，2007，28（11）：841-843.