白术药材中白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ含量的测定

李红英，龙 澜，程新华，李亚杰，黄建民，帅超群

(1. 湖北省农业科学创新中心鄂西综合试验站，湖北 恩施 445000； 2.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000)

白术药材中白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ含量的测定

李红英1，2，龙 澜1,2，程新华1，李亚杰1，黄建民1，帅超群2

(1. 湖北省农业科学创新中心鄂西综合试验站，湖北 恩施 445000； 2.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000)

建立HPLC法同时测定白术药材中白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的含量.采用依利特 ODS2 C18(200 mm×4.6 mm，5 um)色谱柱，以甲醇∶水=70∶30(V/V)为流动相，检测波长222 nm，流速：1.0 ml/min，柱温25℃.结果得出：白术内酯Ⅰ的平均回收率为98.98%，RSD=0.64%，白术内酯Ⅲ的平均回收率为100.18%，RSD=1.41%.该方法简单、快速、线性关系良好、精密度高、重复性好，为白术药材品质评价、GDP的建立及深加工提供了科学依据.

白术药材;HPLC;白术内酯Ⅰ;白术内酯Ⅲ

白术为菊科植物白术(AtractylodesmacrocephalaKoidz.)的干燥根茎，主要产于浙江、安徽、湖北、湖南等省.其味甘、苦，性温，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎的功效[1]，现代药理研究表明白术有调节胃肠运动、利尿、安胎、降血糖、增强免疫等作用[2]，白术根茎主要含有苍术酮、白术内酯、挥发油、多糖等成分[3].从白术中分离得到的内酯类白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ为白术中的主要有效成分，该类物质具有抗炎、抗肿瘤作用[4-6].此外该类成分还具有调节胃肠道功能和促进因营养物质吸引的功能[7]，尤以白术内酯Ⅰ作用显著[8-11]，是白术质量控制的主要指标之一.为了提高白术药材的质量，笔者采用反相高效液相色谱法同时测定白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的含量，该方法简单、方便、快速，可作为白术药材的质量控制和品质评价的科学依据.还为白术药材GDP的建立及深加工提供了有力的依据.

1 试剂、试药和仪器

1.1 试剂与试药

甲醇由(天津市科密欧化学试剂有限公司，色普纯)提供，去离子水，白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ对照品(上海源叶生物科技有限公司)，

1.2 仪器

美国戴安Ultimate3000高效液相色谱仪(Ultimate3000泵，Ultimate3000紫外检测器，四元低压混合系统，Ultimate3000自动进样器，ChromeLeon工作站，Ultimate3000色谱柱恒温箱)；KQ-250D型超声波清洗器；Al204电子天平；溶剂过滤器等常用仪器.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：依利特ODS2 C18柱 (200 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇∶水=70∶30(V/V) 检测波长：222 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃.

2.2 对照品溶液的制备

精确称取对照品白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ分别为5.12 mg、7.46 mg置于50 mL容量瓶中，分别加入适量甲醇(色谱纯)，超声溶解，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度.振荡摇匀后，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得对照品溶液.

2.3 供试品的制备

精确称取白术药材(粉碎过4号筛)1 g，置于50 mL容量瓶中，分别精密加入甲醇40 mL、超声波提取45 min，冷却至室温，加甲醇定容至刻度，振荡摇匀后，用0.45 μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液.

2.4 线性关系的考察

取对照品溶液,按照2.1的色谱条件,分别进样2.0、5.0、10.0、20.0、40.0 μL，以峰面积(A)对浓度(C)回归分析，得白术内酯Ⅲ标准曲线回归方程：A=15.83x+27.58,相关系数r=0.999 93；白术内酯Ⅰ标准曲线回归方程：A=36.32x+8.97,相关系数r=0.999 90；结果表明,白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ在此条件下呈良好的线性关系.

表1 添加回收率实验

2.5 精密度试验

按照2.1的色谱条件连续进同一供试品溶液5次，测定白术内酯Ⅲ峰面积的RSD为1.69%，白术内酯Ⅰ峰面积的RSD为1.81%.

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，按每2 h测定一次，供试品中白术内酯Ⅲ峰面积的RSD为1.48%(n=7) ，白术内酯Ⅰ峰面积的RSD为1.20%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定.

2.7重复性试验

取白术药材5份，按照2.3的方法平行制备5份供试品，依法测定，计算白术内酯Ⅲ保留时间和峰面积的RSD分别为0.72%，0.94%；白术内酯Ⅰ保留时间和峰面积的RSD分别为1.23%，1.62%，表明该方法的重复性较好.

2.8添加回收率试验

取已知含量的白术药材样品约1.0 g，精密称取3份，分别加入等量的对照品，按照2.3的方法进行处理，计算回收率，结果见表1.

2.9样品的测定

按2.3项下方法操作制得的样品溶液,进样20 μL,在222 nm处检测,白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ对照品图1和白术样品图2的HPLC色谱图.结果5种不同产地白术中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ的含量如下表2.

图1 白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ对照品 图2 白术样品

表2 各地白术中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ的含量Tab.2 Content around in Rhizoma Atractylodis Macrocephalae atractylenolide Ⅲ,atractylenolide Ⅰ

产地白术内酯Ⅲ/%白术内酯Ⅰ/%恩施咸丰0．0620．084安徽亳州0．0690．055浙江磐安0．0620．52湖南洪江岔头乡0．0630．80四川川北0．0540．21

3 讨论

1)在对白术提取溶剂的考察过程中，比较甲醇、丙酮、乙酸乙酯的提取效果，实验发现甲醇的提取效果是最好的；并对超声波提取时间进行考察，结果采用超声提取45 min为最佳方法.

2)通过对白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ的三维扫描，在222 nm处，白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ的吸收较高，杂质少，分离度良好.

3)本实验所建立的测定白术药材中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ含量的方法，准确度高，操作简便、准确、快速、重复性好、灵敏度高，能准确检测白术药材中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ的含量.

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DeterminationofAtractylenolideⅠandAtractylenolideⅢinAtractylodesMedicinalMaterial

LI Hong-ying1,2,LONG Lan1,2,CHENG Xin-hua1,LI Ya-jie1,HUANG Jian-min1，SHUAI Chao-qun2

(1.West Comprehensive Experiment Station of Hubei Provincial Agriculture s&t Innovation Center Enshi 445000,China; 2.Enshi Qingjiang Bio-engineering co.,Ltd.,Enshi 445000,China)

HPLC method was used for simultaneous determination ofAtractylodesmacrocephalaKoidz medicinal material of AtractylenolideⅠand Atractylenolide Ⅲcontent of sesquiterpene lactones.Using the Hypersil C18: ODS2 (200 mm×4.6 mm,5 um) chromatographic column, Methanol∶water ( V/V=70∶30) as the mobile phase,detection wavelength at 222nm, flow rate: 1.0 ml/min, column temperature was 25 ℃. The results were as follows: For AtractylenolideⅠ,the average recovery was 98.98%,RSD=0.64%,for Atractylenolide Ⅲ,the average recovery was 100.18%,RSD=1.41%.The method is simple and rapid and has good linearity, high precision and good repeatability, which provides a scientific basic for quality evaluation of Atractylodes,establishment of GDP and deep processing.

AtractylodesmacrocephalaKoidz;HPLC;AtractylenolideⅠ; AtractylenolideⅢ

2012-12-05.

湖北省科技计划研究与开发项目(2009BHB001).

李红英(1982- )，女，农艺师，主要从事天然产物研究和药物分析.

R284.2

A

1008-8423(2013)02-0142-03