关于储藏物螨类两种标本制作方法比较的研究

殷 凯 ，王慧勇

（淮北职业技术学院 医学系 ，安徽 淮北 235000）

储藏物螨类又叫仓储螨类，至今我国已发现大约100种左右。全世界已知蜱螨约5万种，估计以后将达到50万种以上［1～4］。制作出良好的螨虫玻片标本，对螨虫的鉴定以及新种的发现有极其重要的作用［5］。笔者在调查储藏食物螨类时，由于分离的螨虫较多，很多螨虫来不及制作玻片标本，而暂放入保存液中。经过不同保存液保存的螨虫制作的玻片标本可能在标本质量上发生改变。为此我们用70%乙醇和MA80液分别对螨虫进行保存，观察螨虫在保存液中变化以及对玻片标本制作的影响，探讨两种制作方法的应用价值，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

根据所采集的样本的形状和性质特性，采用振筛分离法和光照驱螨法从储藏食物（如：面粉，大米，玉米等）中分离出螨虫2000只。

面粉类粉末状样本采用光照驱螨法：选平底搪瓷盘上垫一张黑纸，将面粉平铺在黑纸上，厚度不超过1cm。将样本置于光照下3～5分钟，螨虫受光线刺激向黑纸板下爬，把样本轻轻地拍转到下方，用毛发针将螨挑出。

玉米类固体状样本采用振筛分离法：通常选用40～160目／寸的分样筛。在最上面的分样筛内放样本，盖上筛盖，放在电振动筛机上。如没有电振动筛机，也可手执分样筛分离螨。本试验主要用60目／寸的分样筛对螨虫进行分离。取筛网下的阻留物，置连续变倍显微镜下，用毛发针将螨虫挑出；或者对阻留物进行光照驱螨法分离螨虫。

1.2 保存方法

将分离出的2000只螨虫分别放入70%乙醇和MA80液（MA80＝醋酸︰甲醇︰蒸馏水＝2︰2︰1）保存。在保存8h、16h、24h时观察保存液中螨虫是否发生虫体萎缩和足弯曲现象。

1.3 玻片标本制作

用玻璃棒取一些封固剂滴加在载玻片中央2～3滴，将上述保存24h，且形态良好的螨虫各100只移至含有封固剂的玻片上，加盖玻片。封固剂要适量，以盖玻片正好铺满不外溢为宜。对背部隆起的螨虫，可在封固剂中放入3～4块碎盖玻片再加盖玻片，以免标本被压碎或变形。用酒精灯加热玻片标本，当封固剂出现气泡或开始沸腾时，停止加热，冷却即可。观察标本中螨虫的伸展情况。

2 结果

螨虫浸在70%乙醇中，很快就沉入液底，但浸在MA80液中螨虫大多浮在液体表面。同时浸在两种保存液的螨虫，短期内虫体不发生变化；超过24h，浸在70%乙醇中螨虫虫体萎缩且足明显向内弯曲，而在MA80液中的螨虫很少发生这种形态变化。详见表1。

用70%乙醇保存的螨虫制作的玻片标本，即使加热也很难使虫体和足伸展；而用 MA80液保存的标本，只有小部分的虫体和足不能完全伸展。详见表2。

表1 两种保存液中螨虫形态改变的比较

表2 两种保存液对玻片标本制作影响的比较

3 讨论

玻片标本能避免标本相关的信息的流失，确保标本的保存品质和寿命。尤其是避免了标本与其它物件的接触，延长标本的储藏年限。因此玻片标本被广泛应用在科研和教学上，是一种即传统而又十分实用的方法［6］。

本文用70%乙醇和MA80液对标本进行保存，发现螨虫在投入保存液的姿势不同。特别是在MA80液中，螨虫浮在液面上，这样在下次浸入螨虫时会对浮在液面上的螨虫进行积压，导致下层螨虫压损。同时长期浸渍在保存液中螨虫，随着保存液的蒸发留在玻璃管壁的螨虫会干燥破裂，因此螨虫在MA80液中不宜长期保存。而用70%乙醇保存的螨虫可避免此现象发生。

通过对两种保存液不同时间段螨虫形态改变的观察发现16小时内两者对螨虫形态改变差异无显著性（▲.＝2.68，P＞0.05）；16小时以后保存在70%的乙醇螨虫有53.3%的足明显地向内侧弯曲，在MA80液保存的螨虫只有5.4%有此种现象，两种差异显著性（▼.＝553.25，P＜0.01）；同时两者在24小时内对螨虫形态的改变差异也有显著性（★.＝548.38，P＜0.01），说明 MA80液能将储藏物螨虫以很好状态固定。

在相同的条件下，两种保存液保存的螨虫对以后玻片标本的制作也有影响。MA80液保存的螨虫制作的玻片标本明显地好于70%乙醇保存的螨虫，差异有显著性（.＝35.16，P＜0.01）。可能的原因：70%的乙醇能很快使螨虫脱水变形；MA80液保存的螨虫体内含有微气泡，使螨虫保持一定的柔软性。

本文结果表明70%乙醇和MA80液保存液对储藏物螨类的保存各有优缺点。要根据当时的情况选择适宜的保存液，例如：短期内的保存可单独用MA80液；但长期的保存可先用MA80液，过数周后用70%的乙醇置换或者直接用70%的乙醇进行保存。

［1］Cotter M，Siebers R，Pike A，et al.Storage mites in flour samples in Wellington，New Zealand［J］.J Investig Allergol Clin Immunol，2011，21（5）：410－411.

［2］Cevzc Bostan K，et al.A view of mites infestation on cheese and stored foods in terms of public health［J］.Turkiye Parazitol Derg，2010，34（3）：191－199.

［3］朱万春，诸葛洪祥.居室内粉螨孳生及分布情况［J］.环境与健康，2007，24（4）：210－212.

［4］王慧勇，沈静，宋富春，等.淮北地区仓储环境中粉螨的群落及季节消长［J］.环境与健康，2009，26（12）：1119－1120.

［5］王明春.昆虫标本的制作［J］.陕西林业科技，2000（3）：40－43.

［6］缪峰，刘永春，等.现场调查寄生虫标本的收集、固定和保存方法［J］.中国寄生虫学和寄生虫病，2002，20（6）：379.