不同植物生长调节物质对条叶榕组织培养的影响

周燕青，丁 兰，徐步青，夏国华，崔永一

(1.浙江农林大学 农业与食品科学学院，浙江 临安311300；2.临安成蹊农业科技开发有限公司，浙江临安311300；3.浙江省临安市农业技术推广中心，浙江 临安 311300；4.浙江农林大学 风景园林与建筑学院，浙江 临安311300；5.浙江农林大学 林业与生物技术学院，浙江 临安311300)

榕属Ficus植物资源丰富，药用植物有20种和3变种[1]，大多具有清热解毒、祛风化湿、舒筋活络、通利乳汁的功效。根、枝、叶、果实等均可入药[2]。榕属观赏植物组织培养报道较多[3－7]，但药用植物组培研究报道相对较少[8－10]。条叶榕Ficus pandurata var.angustifolia是一种重要的畲族习用药，味甘、淡，性温，具行气活血，祛风除湿健脾等功效，对治疗慢性肝炎、风湿痹痛、消化不良、乳腺炎等炎症有较好疗效[11]。当前，条叶榕以野生状态为主，人工栽培极少，随着开发利用的深入，现有野生资源储量远远满足不了生产上的需求，而对野生资源的过度利用，将给自然生态系统造成不可逆转的破坏，系统开展条叶榕组培快繁技术，对满足条叶榕种苗市场，提供优质种苗具有重要意义。本研究通过不同植物生长调节剂物质和不同质量浓度的组合对条叶榕愈合组织诱导、不定芽分化，增殖以及生根的研究，建立稳定、高效的条叶榕组培快繁体系。

1 材料与方法

1.1 材料

条叶榕无菌苗由浙江农林大学林学基础实验教学示范中心提供，经浙江农林大学李根有教授鉴定为条叶榕Ficus pandurata var.angustifolia。

1.2 实验设计方法

愈合组织诱导培养:以Murashige-Skoog(MS)为基本培养基，采用L9(34)正交实验设计研究植物生长调节物质2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)，6-苄基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)对叶片愈合组织诱导的影响，植物生长调节物质质量浓度设置为①2,4-D: 0.1，0.2，0.5 mg°L－1； ②6-BA: 0.5，1.0，2.0 mg°L－1；③NAA:0.1，0.5，1.0 mg°L－1。将条叶榕无菌苗叶片切成1.0 cm×1.0 cm大小接入愈合组织诱导培养基中进行培养，接种5瓶°处理－1，叶片接种6个°瓶－1，培养30 d后观测愈合组织诱导和不定芽分化情况，统计愈合组织诱导率(愈合组织诱导率=出愈苗数/接种数×100%)和不定芽分化率(不定芽分化率=分化苗数/接种数×100%)，重复 3 次°处理－1。

不定芽增殖培养:以MS为基本培养基，采用L9(34)正交实验设计研究植物生长调节物质NAA，6-BA和苯基噻二唑基脲 (TDZ)对带芽茎段不定芽增殖的影响，植物生长调节物质质量浓度设置为①NAA: 0.1，0.3，0.5 mg°L－1；②6-BA: 0.3，0.5，1.0 mg°L－1；③TDZ: 0.1，0.3，0.5 mg°L－1。将条叶榕无菌茎段作为外植体接入不定芽增殖培养基，接种5瓶°处理－1，接种茎段6个°瓶－1，培养30 d统计不定芽数量，计算增殖倍数(增殖倍数=不定芽数/接种数)，重复3次°处理－1。

生根培养:以MS为基本培养基，采用2因素3水平完全实验设计研究吲哚丁酸(IBA)和活性炭对不定芽生根的影响，IBA设置 3个水平(0.5，1.0，2.0 mg°L－1)，活性炭设置3个水平(1.0，2.0，3.0 g°L－1)。将不定芽增殖培养得到的不定芽分割，接入生根培养基中，接种5瓶°处理－1，接种不定芽6个°瓶－1，培养30 d统计生根数，计算生根率(生根率=生根苗数/接种数×100%)；测定每株叶片数、侧顶芽数、平均株高和生根率；同时采用Win-RHIZO根系扫描系统测定根系相关生长指标，包括平均每株根的总长度(L)，根总表面积(SA)，根总体积(V)和根尖数(R)。

以上培养基均附加30.0 g°L－1蔗糖，8.5 g°L－1琼脂，pH5.8～6.0。材料接种后，在平均照度为2 000 lx的光照下培养，光照时间为12 h°d－1；培养温度为(25±1)℃。练苗移栽:当生根苗生长30 d后，取生长健壮、根系形成良好且株高为6～7 cm的组培苗进行开瓶炼苗，放到全天自然光照，温度25℃的通风条件下练苗7～10 d。练苗结束后，取出组培苗用水清洗干净根部的培养基，移栽于泥炭和蛭石按1∶1均匀混合的栽培基质中，浇透水后在遮光度为70%的大棚中培养，40 d后统计成活率。

1.3 统计分析

数据采用(平均值±标准误差)表示，DPS v2.0进行Duncan多重比较。

2 结果与分析

2.1 愈合组织诱导和不定芽分化

将叶片剪成大小约1.0 cm×1.0 cm的外植体接入含有不同植物生长调节物质组合培养基中，30 d后统计叶片愈合组织诱导率和不定芽分化的情况(表1)。叶片在愈合组织诱导培养基中培养3～4 d，叶表面开始皱缩，培养基接触部位开始膨大，以叶片形态学下端中脉处尤为明显，培养5～7 d，产生大量愈合组织。接种15～20 d后，少量愈合组织表面有绿色芽点分化，芽点进一步分化形成芽。试验发现:条叶榕叶片极易诱导形成愈合组织，不同处理的愈合组织诱导率均达到100%，但愈合组织的生长状态及不定芽分化有明显差异；愈合组织进一步分化为不定芽较困难，以MS＋1.0 mg°L－16-BA＋0.2 mg°L－12,4-D＋ 0.1 mg°L－1NAA 分化率最高，为 6.67%。当 6-BA 质量浓度较低 (0.1～1.0 mg°L－1)时，愈合组织生长表现良好，有部分分化；当6-BA质量浓度较高(2.0 mg°L－1)时，愈合组织颜色加深，颗粒增大，未见不定芽分化。

表1 不同植物生长调节物质对条叶榕叶片愈合组织和不定芽诱导的影响Table 1 Effects of different growth regulators on induction of calli and adventitious buds in Ficus pandurata var.angustifolia

2.2 不定芽增殖培养

将带有3片叶、长约2.0 cm的茎段接种于增殖培养基上，培养3～5 d，切口基部开始膨大并形成愈合组织，8～10 d，开始有大量不定芽萌发，培养30 d后，统计条叶榕不定芽增殖情况(表2)。在应试的培养基条件下，条叶榕增殖倍数为4.91～8.93。3种植物生长调节物质对不定芽增殖的作用大小依次为6-BA＞TDZ＞NAA，6-BA是影响条叶榕不定芽增殖的主导因子。当NAA的质量浓度一定时，随着6-BA质量浓度的增加，增殖倍数略有增加，当6-BA质量浓度达到1.0 mg°L－1时，不定芽叶片畸形的概率提高，出现明显的皱缩现象。

考察了不定芽的增殖和生长情况，发现以 MS＋0.3 mg°L－1TDZ＋1.0 mg°L－16-BA＋0.3 mg°L－1NAA 增殖效果最佳，增殖倍数达到8.93，但增殖的不定芽生长较差，且有畸形现象；而MS＋0.1 mg°L－1TDZ＋1.0 mg°L－16-BA＋0.5 mg°L－1NAA增殖的不定芽生长良好，节间正常，叶舒展，且增殖率达到6.07±0.75(表2，图1)。因此，生产上为获取健壮不定芽直接用于生根以 MS＋0.1 mg°L－1TDZ＋1.0 mg°L－16-BA ＋0.5 mg°L－1NAA 为佳。

表2 不同植物生长调节物质对条叶榕不定芽增殖的影响Table 2 Effects of different growth regulators on propagation of cluster buds in Ficus pandurata var.angustifolia

图1 条叶榕在不同植物生长调节物质中的不定芽增殖Figure 1 Cluster buds multiplication of Ficus pandurata var.angustifolia in different growth regulators

2.3 生根培养

将长约4 cm，具4片叶的茎段接种于生根培养基上，30 d后，统计不同质量浓度IBA和活性炭组合的培养基下条叶榕生根情况(表3和表4)。条叶榕生根容易，所有处理的生根率均为100%。考察生根植株的平均叶片数、平均不定芽数和平均株高，发现以MS+1.0 mg°L－1IBA+3.0 g°L－1活性炭对植株平均叶片数最佳，达到 (7.65 ± 0.32)片°株－1，以 MS+1.0 mg°L－1IBA+2.0 g°L－1活性炭对植株不定芽数最好，为 (3.64±0.42 个)°株－1，以 MS+2.0 mg°L－1IBA+2.0 g°L－1活性炭对植株平均株高最为有利，达到(7.43±0.44)cm； 以MS+1.0 mg°L－1IBA+1.0 g°L－1活性炭对植株根系最为有利，平均每株根总长度、根总表面积、 根总体积和根尖数分别为(56.73±7.64)cm，(6.24±0.52)cm2，(0.09±0.01) cm3和(135±16.35)个。

表3 不同质量浓度IBA和活性炭对条叶榕生根苗生长势的影响Table 3 Effects of different concentrations of IBA and AC on growing seedling growth potential of Ficus pandurata var.angustifolia

表4 不同质量浓度IBA和活性炭对条叶榕根系的影响Table 4 Effects of different concentrations of IBA and AC on rooting of Ficus pandurata var.angustifolia

3 结论与讨论

以条叶榕叶片为外植体进行愈合组织诱导，愈合组织极易诱导，但愈合组织不定芽分化困难，低质量浓度的 6-BA 和 2,4-D 对不定芽分化较为有利，在 MS+1.0 mg°L-16-BA+0.2 mg°L－12,4-D+0.1 mg°L－1NAA中有少量不定芽分化，分化率为6.67%。且在茎段不定芽增殖培养中亦发现茎段基部形成大量愈合组织，并明显膨大。愈合组织不定芽诱导是组培常用的方式，也是今后作物遗传改良的重要途径，条叶榕愈合组织不定芽诱导仍有待进一步研究。

带芽茎段不定芽增殖是条叶榕比较理想的增殖方式。不同植物生长调节物质种类和质量浓度的正交试验表明:对不定芽增殖的作用大小依次为6-BA＞TDZ＞NAA，6-BA是影响条叶榕不定芽增殖的主导因子，这与姜傲芳等[11]对薜荔Ficus pumila茎段增殖培养的结果一致。本试验中，条叶榕最佳不定芽增殖培养基为 MS+0.3 mg°L－1TDZ+1.0 mg°L－16-BA+0.3 mg°L－1NAA，增殖倍数最高为 8.93，但幼叶略微出现畸形。6-BA促进了不定芽的增殖，与低质量浓度的NAA配合使用时，随着6-BA质量浓度的增加，不定芽增殖率增加，这与丁伟等[12]对水半夏Typhonium flagelliforme的研究结果类似。

生根培养中，IBA起到活化根系细胞，促进新根系的形成，活性炭能够为根系的生长提供适宜的暗环境[13]。榕属植物组培生根容易[2－10]，条叶榕极易生根，应试的IBA和活性炭质量浓度组合中，生根率均为100%，生根培养以MS+1.0 mg°L－1IBA+1.0 g°L－1活性炭最佳，表现为生根植株根系健壮，平均每株根总长度、根总表面积、根总体积和根尖数均最佳。参考文献:

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