梅毒患者氧化应激反应的研究

魏 娟， 程 江， 马雅静， 曹文疆， 张丽翠

(新疆石河子大学第一附属医院检验科，新疆石河子832008)

梅毒是一种由苍白密螺旋体引起的浸润多组织和慢性感染的性传播疾病。目前已成为我国发病率最高的性传播疾病，是我国重点防治的性传播疾病之一。近年来越来越多的研究表明人体疾病的发生、发展与机体的氧化应激状态密切相关［1-2］。梅毒是一个多阶段累及各系统的疾病，所有的临床表现都是长期慢性炎症反应的一个过程，处于慢性氧化应激状态［3］。氧化应激对梅毒患者造成的病理损害可能有多方面的影响，包括免疫功能丧失、氧化应激破坏各种生物分子诱导细胞凋亡等。目前科学家在病毒性感染疾病的控制上已有尝试应用抗氧化剂作为治疗手段［2］。因此，通过氧化应激指标反映梅毒感染患者体内的疾病发展过程，对梅毒的诊断和治疗有着十分重要的价值。为深入了解梅毒患者氧化应激状态，我们检测了血浆超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、隐性氧化蛋白产物(AOPP)、硫氧还原蛋白(TRX)水平，探讨氧化应激指标在梅毒病程中的变化情况，为梅毒的诊断和治疗提供更加有力的证据。

材料和方法

一、研究对象

选取2011年8月至2012年9月期间来新疆石河子大学第一附属医院就诊的经过相关实验室检查结合临床表现诊断［4-5］为梅毒的住院患者100例，男56例，女44例，年龄(37±12)岁，排除人类免疫缺陷病毒(HIV)、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒感染和各种慢性病(如糖尿病、高血压等)。选择同期来新疆石河子大学第一附属医院以皮肤和黏膜病变为症状就诊但梅毒血清学检测均为阴性反应的50例患者作为非梅毒组，男26例，女24例，年龄(37±15)岁。选取同期来新疆石河子大学第一附属医院进行健康体检的正常人100名作为正常对照组，男47名，女53名，年龄(40±11)岁。

二、标本采集与处理

所有研究对象均空腹采静脉血3 mL，肝素钠抗凝，离心后收集血浆500μL，－80℃冰箱保存直至检测。所有梅毒患者的血浆经酶联免疫吸附试验(ELISA)初步筛选后，采用美国疾病预防控制中心2002年推荐的梅毒确证试验——明胶颗粒凝集试验(TPPA，日本富士公司)进一步确诊。

三、检测指标

采用分光光度法测定SOD，采用硫代巴比妥酸比色法检测MDA，试剂盒的各项质量指标及质控参数均在允许范围内，试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。TRX、AOPP采用ELISA试剂盒由上海西唐生物科技有限公司和上海索莱宝生物科技有限公司提供，严格按照说明书进行操作。

四、统计学方法

结 果

一、梅毒组、正常对照组、非梅毒组一般资料比较

梅毒组、正常对照组、非梅毒组经过严格筛选后进行均衡性比较，其中年龄、性别构成比经统计学分析，各组之间差异均无统计学意义(P＞0.05)。

二、梅毒组、正常对照组、非梅毒组血浆氧化应激水平比较

梅毒组SOD活性及AOPP、TRX水平与非梅毒组、正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);梅毒组MDA水平明显高于正常对照组(P＜0.05);梅毒不同病程的各项氧化应激指标之间差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 梅毒组、正常对照组、非梅毒组血浆氧化应激指标比较(±s)

表1 梅毒组、正常对照组、非梅毒组血浆氧化应激指标比较(±s)

注:与梅毒组比较，*P＜0.05、＊＊P＜0.01

隐性梅毒 14 76.86±7.39 37.93±8.61 4.46±0.90 74.36±11.63非梅毒组 50 39.30±11.00* 21.74±3.71＊＊ 4.13±0.73 131.30±30.98＊＊正常对照组 100 29.74±7.79＊＊ 19.93±4.79＊＊ 4.03±0.79* 142.13±48.50＊＊

讨 论

正常的细胞结构和功能需要通过重要的氧化还原途径来维持调节，氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用，持续的氧化应激破坏了细胞结构和功能。近年来研究发现，氧化应激对细胞和组织的破坏与多种疾病的病理密切相关［6］。此外，冯新青等［7］发现二期梅毒患者的细胞免疫功能存在缺陷，这与氧化应激是否有关?随着梅毒患者体内的氧化应激反应逐步为人们所揭示，本研究即从氧化应激方面来探讨梅毒螺旋体对机体可能的损伤作用。

梅毒引起的临床症状是由于梅毒螺旋体诱导产生的持久的慢性炎症反应。本研究发现不同病程的梅毒患者检测氧化应激的水平并无差异。梅毒螺旋体虽然缺乏典型的外膜脂多糖结构，但其拥有丰富的脂蛋白类物质。这些脂蛋白通过单核细胞吞噬溶酶体的释放从而介导炎症反应，产生大量的活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)。通过ROS的连锁反应，可使其产生部位及远离产生部位的其他部位攻击包括DNA、蛋白质等在内的几乎所有的生物分子，这种破坏可引起机体死亡。此外，梅毒螺旋体缺乏大部分的铁结合蛋白［8］，梅毒螺旋体还是一种微需氧微生物，这些特点使得其必须具有氧化结构来抗氧化和炎症增值反应［3］。

AOPP是氧化应激的标志物，可激发中性粒细胞和单核细胞的呼吸爆发［9-10］，刺激合成及其释放大量促炎性细胞因子，引起全身微炎症反应，作为氧化应激蛋白质氧化的产物，可进一步促进氧化应激的发生，引起脂质过氧化。MDA则是脂质过氧化反应主要代谢产物。TRX则是测定抗氧化能力的标志，是体内抗氧化系统最重要的成员之一，对氧化应激起关键作用。TRX通过其特有的二硫化物活性中心，可逆的催化多种氧化还原反应，是近年来新兴发展的检测梅毒螺旋体的方法［11-12］。本研究发现梅毒螺旋体感染后机体TRX表达增强。氧化应激产生大量的ROS，进一步促进脂质过氧化。本研究发现梅毒组AOPP、TRX均高于正常对照组和非梅毒组(P＜0.01)，而SOD水平明显低于正常对照组和非梅毒组(P＜0.01)。但对于MDA来说，二期梅毒组和正常对照组有差异(P＜0.05)，可能是机体短期的氧化反应造成的。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，正常人体内含有足量的SOD等抗氧化物质，以对抗体内不断产生的MDA等自由基产物。当梅毒患者体内脂质过氧化作用增强的同时抗氧化酶SOD作用也增强，从而使脂质过氧化产物MDA减少以维护机体氧化和抗氧化系统的平衡。

综上所述，不同病程的梅毒患者体内均存在明显的氧化应激反应，对氧化应激指标的检测对其疾病的诊断和治疗有着十分重要的价值和参考意义。在梅毒诊断、治疗及定期随访中应用氧化应激指标的监测，有利于患者病情的控制和观察，有待于进一步研究。

［1］Halliwell B，Gutteridge JM .Free radicals in biology and medicine［M］.3rd edition.London:Oxford Science Publications，2007:8-14.

［2］Ngondi JL，Oben J，Forkah DM，etal.The effect of different combination therapies on oxidative stress markers in HIV infected patients in Cameroon［J］.AIDSRes Ther，2006，3:19.

［3］Hébert-Schuster M，Borderie D，Grange PA，etal.Oxidative stress markers are increased since early stages of infection in syphilitic patients［J］.Arch Dermatol Res，2012，304(9):689-697.

［4］Murray PR.Manual of clinical microbiology［M］.8th edition.Washington DC:As M Press，2003:955-971.

［5］Brown DL，Frank JE.Diagnosis and management of syphilis［J］.Am Fam Physician，2003，68(2):283-290.

［6］Mandas A，Iorio EL，Congiu MG，etal.Oxidative imbalance in HIV-1 infected patients treated with antiretroviral therapy［J］. J Biomed Biotechnol，2009，2009:749575.

［7］冯新青，曹士德.二期梅毒患者外周血细胞免疫水平的相关性研究［J］.检验医学，2009，24(12):889-890.

［8］Jovanovic＇T，Ascenso C，Hazlett KR，etal.Neelaredoxin，an iron-binding protein from the syphilis spirochete，Treponema pallidum，is a superoxide reductase［J］.J Biol Chem，2000，275(37):28439-28448.

［9］Witko-Sarsat V，Friedlander M ，Nguyen Khoa T，etal.Advanced oxidation protein products as novel mediators of inflammation and monocyte activation in chronic renal failure［J］.J Immunol，1998，161(5):2524-2532.

［10］田 梅，吴雄飞.晚期氧化蛋白产物的研究进展［J］.吉林医学，2010，31(15):2295-2296.

［11］Libby P.Inflamatory mechanisms the molecular basis of inflammation and disease［J］.Nutr Rev，2007，65(12 Pt 2):S140-S146.

［12］林勇平，俞 辉，刘忠民.梅毒螺旋体硫氧还原蛋白TP0100的原核表达和鉴定［J］.检验医学与临床，2012，9(8):904-906.