HPLC法测定苦参阴道泡腾片中苦参总碱的含量

★ 付长华 杨琴 蔡华吉（江西施美制药有限公司 东乡 331800）

苦参阴道泡腾片是在苦参栓部颁中药01册（WS3-B-0094-89）的基础上改剂型而成的现代制剂。苦参阴道泡腾片为苦参总碱经加工制成的泡腾片。功能主治：抗菌消炎。用于宫颈糜烂，赤白带下，滴虫性阴道炎及阴道霉菌感染等妇科慢性炎症。由于栓剂基质常易因体温融化后连同药物流失而影响疗效，污染衣物，给患者带来不适和极大的不便，改剂型为阴道泡腾片后可提高治疗效果和患者的顺应性[1]。原苦参栓质量标准中苦参总碱的含量测定采用的是滴定法[2]，高效液相色谱法是中药质量控制研究中的常用方法，应用HPLC法测定心律宁片（苦参总碱片）中苦参碱和氧化苦参碱的含量已有报道[3]，本文采用HPLC法对苦参阴道泡腾片中苦参总碱的含量测定进行了研究，方法准确、灵敏、可靠，为保证本品的质量提供了质控方法。

1 仪器与试药

日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，包括LC-10ATVP泵、SPD-10AVP检测器、CLass-VP色谱工作站。乙腈、乙醇为色谱纯，磷酸为分析纯，试验用水为自制蒸馏水。

试验用的氧化苦参碱对照品由中国食品药品检定研究院提供。样品提供单位：江西施美制药有限公司，批号：20130409、20130410、20130411，规格：每片重1.2g（含苦参总碱以氧化苦参碱计为100mg）。空白辅料均符合药用标准。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：氨基键合硅胶为填充柱（5μm，200mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-乙醇-水（80：10：10），用磷酸调pH至2.0；检测波长为220 nm；流速为1.0mL/分；柱温为室温；进样量：20μL；理论板数按氧化苦参碱计算应不低于2 500；分离度应大于1.5。

图1 HPLC图谱(A为对照品；B为样品)

2.2 溶液的制备

供试品溶液的制备：取本品5片研细，精密称取适量（约相当于苦参总碱100mg），置100mL容量瓶中，加无水乙醇适量，超声处理（功率60W，频率40KHz）使溶解，用乙腈-乙醇（8：1）稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置50mL容量瓶中，用乙腈-乙醇（8：1）稀释至刻度，即得。

对照品溶液的制备：称取氧化苦参碱对照品约25mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加无水乙醇适量，超声处理（功率60W，频率40KHz）使溶解，并用乙腈-乙醇（8：1）稀释至刻度，摇匀，精密量取20mL，置50mL容量瓶中，用乙腈-乙醇（8：1）稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 标准曲线的测定

在避光操作下。精密称取氧化苦参碱对照品约25mg，置100mL量瓶中，加流动相适量超声溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取该储备液5mL，分别置100，50，25，10，5mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μL注入色谱仪中，记录色谱图，以浓度（C）为横坐标，所测峰面积为纵坐标进行回归，得回归方程：Y=1.5×107X+1.2×104，r=0.9996 ，表明在12.5-250μg/mL的浓度范围内线性关系良好。

2.4 空白辅料干扰实验

按处方组成，取除苦参总碱外的辅料，按制备工艺要求制成不含苦参总碱的阴性对照样品（缺味样品），然后按供试品制备下的方法制备阴性对照溶液，分别吸取阴性对照溶液与供试品20μL进行检测，结果表明，阴性对照品的图谱中，在与供试品的图谱中氧化苦参碱位置上无峰出现，表明阴性无干扰。

2.5 溶液稳定性试验

取“2.2”项下的供试品溶液（20130409）置室温下放置，于0，2，6，12，24小时候分别进样20μL进行检测，记录色谱图与峰面积，结果见表1。

表1 稳定性试验结果

结果表明：稳定性试验RSD为0.73%，样品在24小时内稳定性良好。

2.6 加样回收率试验

取已知含量（20130409）的6份，分别精密称定，再分别加入氧化苦参碱对照品，按正文含量测定方法供试品溶液制备项下的方法操作测定，记录色谱图，考察本方法的加样回收率，结果见表2。

表2 加样回收率试验结果

结果表明：本方法的加样回收率为98.13%，RSD为1.12%。

2.7 精密度试验

取浓度为0.1mg/mL的对照品溶液，在正文所述的色谱条件下，重复进样5次，每次20μL，记录氧化苦参碱色谱图与峰面积。

结果表明，精密度试验RSD为0.15%，表明仪器精密度良好。

2.8 重现性试验

按含量测定方法，对同一批样品（20130409）分别制备6份供试品溶液，精密吸取各供试品溶液20μL注入液相色谱仪进行检测，记录色谱图与峰面积。

结果表明：重现性试验RSD为0.81%，表明重现性良好。

2.9 含量测定

各批样品按“2.2”项下方法制备成供试品溶液、对照品溶液，精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，3批样品（20130409、20130410、20130411）的含量测定结果分别为99.6、98.8和98.6 mg/片。

3 讨论

苦参总碱原料的含量测定采用的是滴定法[4]，该方法操作步骤多，实验时间长，重现性差。笔者在本实验中采用HPLC法测定苦参阴道泡腾片中所含的苦参总碱的含量。从色谱图中可以看出氧化苦参碱的测定不受其他组分干扰。方法学的线性、精密度、稳定性、重复性、回收率结果都较满意。并且该方法能够确定苦参阴道泡腾片中苦参总碱的含量，为良好的质量控制打下了基础。

[1]吕金玲，顾德辉.栓剂的研究发展概况[J].黑龙江医药，2006，19（3）：194-195.

[2]部颁中药01册[S]，标准号：WS3-B-0094-89.

[3]庞树和，田葳，潘淑明.HPLC法测定心律宁片（苦参总碱片）中苦参碱和氧化苦参碱的含量[J].中医药信息，2002，19（1）：49-50.

[4]国家药品监督管理局国家药品标准[S].标准号：WS-10001-（HD-1106）-2002.