高效液相色谱法测定蜂胶胶囊中吡啶甲酸铬的含量

2013-11-10广西桂林食品药品检验所541002黄海燕钟建理

首都食品与医药 2013年8期

广西桂林食品药品检验所（541002）黄海燕钟建理

蜂胶胶囊是以蜂胶、吡啶甲酸铬等为主要原料制成的保健食品，具有辅助降血糖的保健功能。本文参照保健食品检验与评价技术规范（2003年版）保健食品中吡啶甲酸铬的测定，采用HPLC法测定蜂胶胶囊中吡啶甲酸铬的含量并行方法学考察，据考察结果制定检验操作规程。

1 试药

吡啶甲酸铬（Ⅲ）（含量：98.0%；Lot.4SNMF-1M）：购于上海安谱科学仪器有限公司；乙腈为色谱纯，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾均为分析纯，水为高纯水。蜂胶胶囊：A：西安某保健品有限公司，批号：20110401；B：北京某保健食品厂，批号：20110301。

2 仪器

PE-200型高效液相色谱仪；XS205DU型电子分析天平；BRANSON BUT2030-40-06超声仪。

3 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：phenomenex®C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（磷酸氢二钾4.35g，磷酸二氢钾3.40g，加水1000mL溶解）（10∶90）；检测波长：254nm[1]；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；进样量10μL。

4 溶液的配制

4.1 对照品溶液精密称取吡啶甲酸铬对照品（含量98.0%）13mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2mL置5mL量瓶中，加甲醇0.5mL，加水至接近刻度，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

4.2 供试品溶液精密称取本品内容物0.8g，置20mL容量瓶中，加甲醇10mL，超声提取5min，加水至接近刻度，放冷，加水至刻度，摇匀，静置，上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

5 测试方法与结果

附图高效液相色谱图

5.1 线性关系考察精密称取吡啶甲酸铬对照品（含量98.0%）13.36mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1mL、2mL置5mL容量瓶中，加甲醇1.5mL、0.5mL，再加水至刻度，放冷，加水至刻度，摇匀，即得（52.3712μg/mL、104.7424μg/mL）；取上述（104.7424μg/mL）溶液0.2mL、0.5mL、1mL置10mL量瓶中，加甲醇-水（1∶1）至刻度，摇匀，即得（2.0948μg/mL、5.2371μg/mL、10.4742μg/mL）。按上述色谱条件进样10μL。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标并进行线性回归得：Y＝1.307×104x-2.512×103；r＝0.9999。表明吡啶甲酸铬在2.0948～104.7424μg/mL内线性关系良好。

5.2 重复性试验取同一样品（A厂）6份，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，按色谱条件测定。结果平均含量为250.0mg/100g。RSD为1.0%（n＝6）。色谱图见附图所示。

5.3 检出限（LOD）按信噪比（S/N）为3计算，对照品溶液稀释至0.1571μg/mL，进样10μL，本法检出限为0.1571μg/mL。

5.4 定量限（LOQ）按信噪比（S/N）为10计算，对照品溶液稀释至0.5237μg/mL，进样10μL，本法定量限为0.5237μg/mL。

5.5 回收率试验取已知含量的样品0.4g置20mL量瓶中，分三个水平分别加入0.2619mg/mL的吡啶甲酸铬对照品3mL、4mL、5 mL，加甲醇7mL、6mL、5mL，超声处理20min，加水至接近刻度，放冷，加水至刻度，摇匀，静置，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液。以上述色谱条件测定，按外标法计算。测得平均回收率98.68%，RSD为0.6%（n＝9）。见附表1。