乳酸菌对仔犬犬瘟热和犬细小病毒抗体效价的影响试验

(公安部沈阳警犬技术学校，辽宁沈阳 110034)

犬瘟热(CDV)和犬细小病毒病(CPV)是危害犬类较为严重的两种传染病，发病率和死亡率较高。目前，这两种疾病的防控方法仍以疫苗免疫为主，结合抗菌素治疗的综合防控措施，但因部分疫苗的保护力不强、免疫保护期较短等原因，致使预防效果不甚理想。

近年来，研究资料表明，乳酸菌能促进动物生长，维持肠道生态菌群平衡，抵御外来病原菌的入侵，激活免疫反应，增强机体免疫力。乳酸菌作为犬体内的正常菌群，能使肠道pH值降低，抑止致病菌在肠道内的生长和繁殖，同时还可产生天然抗菌物质，对肠道致病菌具有明显的抑制和杀灭等作用[1]。

CDV和CPV危害,尤以对断乳仔犬最为严重，本试验旨在通过断乳仔犬饲喂乳酸菌后检测CDV和CPV抗体水平，观察抗体水平变化，以期揭示乳酸菌与犬体之间的相互关系，为兽医临床上寻求防控仔犬CDV和CPV及提高机体免疫应答和生长性能提供新的研究方向。

1 材料与方法

1.1试验动物 选择8只健康状况良好的德国牧羊母犬所产的30只仔犬，随机分为3组，每组10只，即试验1组，试验2组及对照组。

1.2试验药品 乳酸菌素片Lactobacillus acidophilus 133株，(黑龙江某药业有限公司生产)，生产批号为0711301，每片含乳酸菌素0.4 g，乳酸菌1×108efu/g。

1.3基础日粮 基础日粮选用由某食品(中国)有限公司出品的“某训养场特供幼犬粮”。配料为精选肉类(牛肉、鸡肉)及肉类副产品，精炼植物油及动物性油脂，全脂奶粉，加碘食盐，维生素(A、B、D、E)和矿物质(铜、铁、锌、硒等)，山梨酸钾，抗氧化剂。营养成分分析保证值：粗蛋白质≥28.0%、总脂肪≥14.0%、粗纤维≤5.0%、钙≥1.10%、矿物质≥1.5%、总磷≥0.9%、盐≤1.8%、灰分≤10.0%、水分≤10.0%。

1.4试验方法 仔犬出生后随母犬吮哺母乳，20日龄补喂奶粉，30日龄断奶，试验1组和试验2组饲喂基础日粮+乳酸菌片，对照组饲喂基础日粮，详见表1。

表1 试验仔犬分组情况

1.5抗体水平检测 犬瘟热/细小病毒抗体检测试剂盒(法国辛百克斯生产)。试剂盒成分：2×8孔包被CDV抗原的酶标板和2×8孔包被CPV抗原的酶标板；A瓶—阳性质控，1.0 mL；B瓶—阴性质控(样品稀释液)，3.0 mL；C瓶—酶标记物，2.0 mL；D瓶—发色底物，3.0 mL；E瓶—10×洗涤浓缩液，100 mL。根据ELISA原理，检测仔犬血清或血浆中CDV/CPV抗体水平。

1.6饲养管理 分栏饲养，按常规管理，免疫程序为：4-6周龄：接种小犬二联苗(PuPPy DP)；8-9周龄：接种犬六联苗(DHPPi+L)；12周龄：接种犬六联苗(DHPPi+L、或七联苗(DHPPi+RL)。

1.7数据分析 试验结束后，资料汇总，进行数据统计，分析各组仔幼犬血清中CPV与CDV抗体效价的动态变化。

1.8CDV、CPV抗体检测判断标准 CDV抗体检测阳性质控滴度为1∶16，CPV抗体检测阳性质控滴度为1∶80，颜色深于阳性质控样品抗体效价CDV>1∶16，CPV>1∶80。颜色浅于阳性质控样品抗体效价CDV<1∶16，CPV<1∶80。试验结果有效：阳性质控显示蓝色，阴性质控显示无色。

2 试验结果

2.1CDV抗体效价动态变化 详见表2。

表2 各组仔犬CDV、CPV抗体效价在不同时期的比较

由表2可知，CDV抗体效价变化20～35日龄，对照组均处阴性(CDV<1∶16)，但自首次免疫后，抗体效价均≥1∶16，说明免疫应答效果良好；试验组则从20～90日龄抗体水平均为阳性(CDV≥1∶16)，说明免疫应答效果良好。

从CPV、CDV抗体效价变化可知20日龄时，各组抗体效价较高，但到35日龄时，抗体效价有所降低，但在免疫后均表现出良好的免疫应答现象。

在整个试验中，试验组的抗体效价均明显高于对照组。CPV抗体效价，试验1组明显优于试验2组，尤以35～50日龄时段较为明显；而CDV的抗体效价，试验1组与试验2组差异不显著。

2.2CPV抗体效价动态变化 详见表2。

由表2可知，20日龄前各组CPV≥80，差异不明显；免疫接种后试验组CPV抗体效价明显高于对照组，且试验1组高于试验2组，对照组CPV抗体则呈阴性(CPV<1∶80)；50日龄时，各组抗体效价均有所下降。但试验组仍高于对照组；至75日龄后，试验组与对照组均高于1∶80，但从酶标板的颜色差异上看，试验组仍高于对照组。

3 分析与讨论

据本次试验结果，应用ELISA方法检测分析CDV、CPV血清抗体效价，表明乳酸菌可提高CDV、CPV抗体水平。以高剂量试验组效果最佳。因此，可初步认为口服高剂量的乳酸菌可明显提高CDV、CPV抗体效价。

3.1CDV与CPV抗体效价的动态变化规律 仔犬体内的CDV抗体，90%通过初乳获得，5%通过胎盘获得。可见乳汁传递是母源抗体传递的主要途径，抗体主要通过乳汁传递给仔犬。仔犬从初乳中获得高水平的母源抗体可阻止CPV传播及感染犬排毒。母源抗体在幼犬体中平均9.7 d左右可下降一半以上，最长可持续2个月左右，初乳对幼犬的保护力优于人工主动免疫及输入高免血清产生的被动免疫[2]。多数仔犬在6～8周龄(最长14周龄)时，母源抗体迅速减少或消失,CDV血清抗体滴度1∶100以下是免疫的临界滴度，降至1∶16以下时，则有可能感染CDV；故一般幼犬3周龄内很少感染CPV,3周龄后、幼犬母源抗体<1∶80，对CPV易感，1∶80是抵抗CPV的保护效价。所以，如能测定仔犬或母犬CDV和CPV抗体效价，就能确定仔犬进行免疫接种的确切时间。

3.2血清中CDV、CPV抗体水平含量与幼犬抵抗力的相关性 Banks等研究表明(1989)[3，4],免疫球蛋白的浓度与传染病的易感性成负相关，如果转移的是特异性抗体，对相应传染病的抵抗力增强，这种抵抗力可通过已建立的诊断来检测抗体含量。据Gorbam报道(1960)[5]，多数仔犬的母源抗体在8～12周龄开始减弱，15周龄消失。当血清中母源抗体下降到1∶20以下时较为易感。有资料曾报道(2004)[6]犬瘟热抗体的半衰期为8.4 d，母源抗体可通过初乳转移给仔犬，幼犬母源抗体中和滴度大于1∶20时，幼犬能免受CDV的攻击。一般幼犬在3周龄以内很少感染CPV,3周龄后、幼犬的母源抗体HI< 26.3(80×)，仅在26.3(80×)～24.3(20×)间，CPV最易感，而26.3(80×)是抵抗CPV的保护效价。因此，可根据测定转移的抗体消长情况，来推测抗体的效价变化，研究当抗体从峰值下降到一定水平时，既有抗病能力又可进行主动免疫，可以使幼犬从出生到接种疫苗的时期内都能得到足够的保护[7]。

3.3乳酸菌对抗体水平的影响 从犬传染病的预防角度，疫苗在进入犬体后会发生两种免疫应答,一种是抗体介导的,即B淋巴细胞反应；一种是由细胞介导的,即T淋巴细胞反应。

除了疫苗会引起免疫应答，乳酸菌也可促进免疫器官的发育,从而有更多的淋巴细胞分化为浆细胞产生抗体。微生态制剂中有许多细菌的细胞壁成分，如细胞壁的肽聚糖和脂多糖等对动物免疫系统，具有不同的免疫调节作用，其在体内是一种较强的B细胞和巨噬细胞激活剂，使B细胞分泌抗体的能力增强，微生态制剂中的有效成分作为抗原不断刺激机体免疫系统，使机体的免疫功能始终处在较高的活性状态，机体的B细胞分泌特异性抗体的功能也得到不断的刺激，从而使B细胞抗体分泌能力也得到延长，抗体滴度下降较慢[8]。

本试验中试验组乳酸菌在整个试验期内均能提高CPV与CDV效价，且高剂量组(3.2 g)显著优于低剂量组(2 g)，说明高剂量组和低剂量组均能提高CDV、CPV抗体水平，但高剂量组提升程度较低剂量组大。

CPV、CDV抗体的高低是反映犬免疫状态的指标，也是反映犬特异性体液免疫性能的指标。本试验中表明随注射疫苗时间的延长能延缓抗体水平的降低，且乳酸菌与疫苗可协同促进机体循环抗体的产生。

ELISA检测添加乳酸菌试验组和对照组的抗体结果显示，试验组要比对照组提前出现免疫应答，而且其抗体水平随着时间的推移比对照组明显提高，结果说明乳酸菌这种益生菌对体液免疫也有影响和促进作用。

[1]王世荣.益生素研究进展[J].中国微生态学杂志,1990(2):80-86.

[2]范泉水.新生幼犬的被动免疫研究进展[J].中国预防兽医学报,2000,1(1):77-79.

[3]BanksKL,MeGuire TC.Neonatal immunology[M].in:Halliwall REW,Gorman NT,and Eds.Veternary clinical immunology,Philadephia:WB Saucders Co,1989:45-46.

[4]贺普贤霄译.初乳对幼仔的作用[J].国外畜牧学畜禽疾病,1984(7):61-53.

[5]Gorham J R.Canine distemper[M].In:Brandley C A,Jungherr E L.Advances in Veternary Science[J].New York:Academic Press,1960:287-351.

[6]周 洁.犬瘟热[J].畜牧科技信息,2004(1):12-13.

[7]刘 明.犬外源lgG在新生幼犬的应用研究[D].四川农业大学,2008.

[8]马治宇.乳酸菌及其培养液对肉鸡生产性能、肠道菌群及肠道结构的影响[D].西北农林科技大学.2008,4.