感毒清颗粒祛痰止咳解热作用研究*

熊 敏，胡 勇，徐世军△，巨少华，张荫杰，代 勇，王 飞，张廷模

(1.四川省中药资源系统研究与开发利用国家重点实验室培育基地，成都 611137;2.成都中医药大学药学院，成都 611137)

感毒清颗粒由黄芪和射干2味中药组成，具有清热解表、益气解毒功效，用于治疗上呼吸道感染(热毒壅肺，卫气不足)症见易感冒、体倦乏力、发热头痛、咳嗽痰多、咽干咽痛、舌红苔黄、脉浮而数等症。课题组前期研究结果表明，感毒清颗粒具有良好的拮抗急性期炎症和镇痛作用［1］。本研究采用酚红气管排泌法、浓氨水致咳法和2，4-二硝基苯酚致大鼠发热模型及内毒素致家兔发热模型，评价其祛痰、止咳和解热作用，为其临床治疗上呼吸道感染提供药效学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物 感毒清颗粒(1.5g原生药/g)由成都中医药大学中药炮制与制剂系提供(批号20120314);盐酸氨溴索口服液由黑龙江中桂制药有限公司生产(批号120336);复方磷酸可待因溶液由南昌立健药业有限公司生产(批号K2120713);对乙酰氨基酚片由哈药集团制药六厂生产(批号120102);大肠杆菌内毒素为Sigma Adrich公司产品。

1.1.2 动物 SPF级KM小鼠雌雄各半，体质量20±2g;SPF级SD雄性大鼠，体质量200±20g(合格证号SCXK(川)2008-24);家兔1.8～2.0kg，均购自四川省医学科学院实验动物研究所(合格证号SCXK(川)2008-14)。

1.1.3 主要仪器 3001全自动酶标仪，Thermo Scientific;电子天平，北京赛多利斯天平有限公司，BS200S;MC-246型肛温计，欧姆龙(大连)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 感毒清颗粒祛痰作用研究－对酚红排泌量的影响 表1显示，取KM小鼠50只随机分为5组，每组10只。ig给药，给药体积为10ml/kg·d，连续5d，空白对照组ig等体积生理盐水。于末次给药后1h，ip0.5%酚红溶液(每只0.5 ml)，30 min后处死动物，仰位固定，颈部拉直，解剖分离气管，在气管下穿一丝线以固定气管插管用。将气管插管(头部磨平的7号针头代替)从口腔处伸入，通过甲状软骨处插入气管内约0.3cm结扎固定。1ml注射器吸取5%NaHCO3溶液0.5 mL，通过针头来回灌气管3次，如此反复3次，即来回9次，收集并混合3次灌洗液，静置离心，取上清液于546 nm波长处测定吸光度。

1.2.2 感毒清颗粒止咳作用研究-对浓氨水引咳所致咳嗽次数的影响 表2显示，将禁食不禁水12 h的小鼠置于500ml玻璃钟罩内，内放一棉球，向棉球中注入200μL氨水刺激小鼠引发咳嗽，以小鼠腹肌强烈收缩，同时张嘴呼气为准。以1 min内咳嗽次数大于或等于3次判定为咳嗽模型初步筛选成功。将筛选合格的小鼠随机分为5组，每组12只(给药同1.2.1)。末次给药1h后，在棉球上滴加200μL浓氨水，立即盖紧钟罩盖，观察记录小鼠的咳嗽潜伏期和2min内咳嗽次数，2min后打开盖再观察小鼠在外界环境1min内的咳嗽次数，3min内的咳嗽次数相加作为咳嗽反应总数。

1.2.3 感毒清颗粒对2，4-二硝基苯酚致大鼠发热的影响 表3显示，每天测大鼠体温2次，连续3d，取体温差异不高于0.3℃者用于实验。将筛选合格的50只大鼠随机分为5组，每组10只(给药同1.2.1)。实验当日每小时测体温1次共2次，取均数作为基础体温。末次给药后1h，每只大鼠背部皮下注射 2，4-二硝基苯酚 1ml/100g(15mg/kg)，每20min测定体温1次，连续测定3h，记录体温数据并计算体温增加值。

1.2.4 感毒清颗粒对内毒素致家兔发热的影响 表4显示，选取基础肛温在38.5～39.6的家兔30只，雌雄各半，适应性喂养3d随机分为5组，每组6只。给药同1.2.1。实验当日每隔30min测体温1次共3次，取均数作为基础体温。用无热原的生理盐水将内毒素配制成600ng/ml，现用现配。末次给药后1h，按600ng/kg剂量每只家兔耳缘静脉注射内毒素，每1h测定体温1次，连续测定6h，记录体温数据并计算体温增加值。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 感毒清颗粒祛痰作用

表1显示，与空白对照组比较，感毒清颗粒中剂量组OD值明显高于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表1 感毒清颗粒对小鼠气管酚红排泌量的影响(±s)

表1 感毒清颗粒对小鼠气管酚红排泌量的影响(±s)

注:与空白对照组比较:*P＜0.05

组别 例数(只) 剂量g/kg OD值空白对照组10 0.14±0.03盐酸氨溴索组 10 13.5mg 0.21±0.07＊＊感毒清颗粒 10 8.1 0.14±0.02 10 4.05 0.19±0.04*10 2.025 0.14±0.03

2.2 感毒清颗粒止咳作用

表2显示，与空白组比较，感毒清颗粒高、中、低剂量组咳嗽潜伏期显著延长，有统计学意义(P＜0.05)，尤其低剂量组结果极显著(P＜0.001);高、中、低剂量组的咳嗽次数与空白组比较显著减少，有统计学意义(P＜0.001)。

表2 感毒清颗粒对小鼠咳嗽的影响(±s)

表2 感毒清颗粒对小鼠咳嗽的影响(±s)

注:与空白对照组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别例数(只)剂量(g/kg)咳嗽潜伏期(s)咳嗽次数空白对照组12 15.17±14.46 19.25±8.02磷酸可待因组 12 4.05mg 101.83±74.44＊＊ 4.50±6.05＊＊感 毒 清 颗 粒 12 8.1 74.25±67.54* 4.00±3.74＊＊12 4.05 66.00 ±43.36* 5.17 ±4.63＊＊12 2.025 106.00 ±69.37＊＊＊ 3.42±4.58＊＊

2.3 感毒清颗粒对发热大鼠体温的作用

表3显示，与空白对照组比较，感毒清颗粒高、中、低剂量组在 2，4-二硝基苯酚皮下注射后140min、160min体温增加值显著低于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05);180min时仅感毒清高剂量组较空白对照组显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。其余各时间点感毒清颗粒各剂量组与空白对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

表3 感毒清颗粒对2，4-二硝基苯酚致大鼠发热的影响(±s)

表3 感毒清颗粒对2，4-二硝基苯酚致大鼠发热的影响(±s)

注:与空白对照组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001

组不同时间点体温增加值(℃)60min 180min空 白 对 照 组 10 — 37.28±0.33 0.82±0.47 1.13±0.26 0.88±0.16 1.14±0.28 0.97±0.18 1.22±0.22 1.14±0.32 1.18±别例数(只)剂量g/kg正常体温(℃)20min 40min 60min 80min 100min 120min 140min 1 0.26 1.08±0.29对乙酰氨基酚组 10 0.210 37.52±0.18 0.06±0.28＊＊＊ 0.10±0.39＊＊＊ 0.52±0.44* 0.23±0.39＊＊＊ 0.50±0.49＊＊ 0.60±0.23＊＊ 0.44±0.30＊＊＊ 0.53±0.25＊＊＊ 0.24±0.43＊＊＊感 毒 清 颗 粒 10 6.300 37.54±0.37 0.44±0.65 0.80±0.49 0.74±0.42 0.87±0.57 0.71±0.41 0.93±0.50 0.59±0.45＊＊ 0.74±0.41＊＊ 0.58±0.36＊＊10 3.150 37.31±0.28 0.55±0.31 0.78±0.53 1.03±0.34 0.97±0.34 0.91±0.36 0.96±0.49 0.81±0.24* 0.67±0.42＊＊ 0.91±0.22 10 1.575 37.52±0.30 0.79±0.37 1.15±0.37 0.95±0.22 1.10±0.25 0.77±0.21 0.94±0.36 0.75±0.32* 0.84±0.29*0.99±0.34

2.4 感毒清颗粒对发热家兔体温的作用

表4显示，感毒清颗粒中剂量组与空白对照组比较，在家兔耳缘静脉注射内毒素4h时间点体温显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，在5h时间点高、中剂量组差异有统计学意义(P＜0.05)，到6h时间点仅高剂量组较空白组有明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。其余各时间点感毒清颗粒各剂量组与空白对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

咳嗽、咯痰和发热是上呼吸道感染最常见的伴随症状。目前认为快适应感受器 (rapidn adaption receptor，RAR)纤维是引起咳嗽反射主要的迷走传入神经亚型［2］，痰液是由于呼吸道发生炎症病变时呼吸道液体成分改变而形成，包含黏液、异物、病原微生物、各种炎症细胞及坏死脱落的黏膜上皮细胞等成分。痰液刺激呼吸道黏膜则引起咯痰;发热则是外热源刺激产生内热原，引起体温调定点上移，产热和散热平衡被打破后的结果。中医认为，上呼吸道感染是由外邪侵袭所致，外邪束肺，肺失宣肃，一则导致“水之上源”功能失调，水聚成痰;二则痰液阻塞呼吸道，肺气上逆而咳嗽;外邪侵袭，正邪相争则发热。感毒清颗粒具有清热解表、益气解毒的功效，适用于上呼吸道感染之热毒壅肺、卫气不足证。黄芪具有抗病毒、提高机体免疫功能等药理作用［3～5］，射干具有抗炎、抗病毒、抗过敏、止咳等作用［6］。本次研究结果表明，感毒清颗粒中剂量能够促进呼吸道酚红的分泌量，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，高、中、低剂量组咳嗽潜伏期较空白对照组显著延长，但3min内咳嗽总数显著减少(P＜0.001)，提示感毒清颗粒具有一定的止咳、祛痰作用;感毒清颗粒高、中、低剂量组在2，4-二硝基苯酚皮下注射后140min、160min体温增加值显著低于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05);180min时仅感毒清高剂量组较空白对照组显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。在家兔耳缘静脉注射内毒素后，与空白对照组比较，感毒清颗粒中剂量组在4h时间点体温升高值明显低于空白组，差异有统计学意义(P＜0.05)，在5h时间点高、中剂量组有统计学意义(P＜0.05)，到6h时间点时高剂量组较空白组有明显降低，其结果有统计学意义(P＜0.05)，提示感毒清具有一定解热作用，推测其解热作用可能不是直接效应，可能与提高机体免疫功能有关。

表4 感毒清颗粒对内毒素致家兔发热的影响(±s)

表4 感毒清颗粒对内毒素致家兔发热的影响(±s)

注:与空白对照组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001

组别例数(只)剂量1h 2h 3h 4h 5h 6h空 白 对 照 组 6 39.17±0.19 1.18±0.23 1.23±0.19 1.68±0.43 2 g/kg 基础体温 体温增加值℃.05±0.16 1.70±0.18 1.12±0.15对乙酰氨基酚组 6 0.15 39.37±0.11 0.91±0.07 1.16±0.15 1.48±0.28 1.44±0.23* 1.09±0.32＊＊ 0.48±0.38*感 毒 清 颗 粒 6 4.5 39.13±0.17 1.05±0.32 1.23±0.37 1.63±0.45 1.77±0.37 1.23±0.34* 0.60±0.39*6 2.25 39.22±0.34 1.28±0.36 1.13±0.81 1.63±0.98 1.50±0.87* 1.27±0.49* 0.70±0.64 6 1.125 39.23±0.11 1.11±0.28 1.31±0.16 1.79±0.20 1.79±0.15 1.41±0.22 0.64±0.46

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