HPLC测定整肠正气丸中和厚朴酚及厚朴酚的含量

陈玉秀

(湖南食品药品职业学院，湖南 长沙 410014)

HPLC测定整肠正气丸中和厚朴酚及厚朴酚的含量

陈玉秀

(湖南食品药品职业学院，湖南 长沙 410014)

目的：建立整肠正气丸中和厚朴酚及厚朴酚的检测方法。方法：色谱条件为C18色谱柱；柱温为室温；流动相：甲醇-水(75∶25)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：294 nm。结果：和厚朴酚及厚朴酚线性范围分别为12.15～121.50 μg·mL-1和22.25～222.50 μg·mL-1，r分别为0.999 8，0.999 5；和厚朴酚加样回收率为98.47%(RSD=0.72%，n=6)；厚朴酚加样回收率为98.30%(为RSD=0.88%，n=6)。结论：该方法简便，准确度高，可有效控制整肠正气丸的质量。

整肠正气丸；和厚朴酚；厚朴酚；高效液相色谱法

整肠正气丸是依据清代王勋所撰的温病著作《慈航集三元普济方》中的正气丸研制成的中成药[1]，是由广藿香、厚朴、紫苏叶、枳壳等16味中药制成的水蜜丸。具有解表化湿，理气和中功能，适用于外感风寒，内伤湿滞，呕吐泄泻，恶寒发热，头痛脘腹疼痛，舌苔白腻，脉浮弦等症。以厚朴作为君药的中成药丸剂多以厚朴酚与和厚朴酚作为含量测定指标，经文献检索可知[2-6]，这些丸剂多为水丸或者大蜜丸，目前尚未有水蜜丸中和厚朴酚及厚朴酚含量测定方法学研究的公开报道；另外，《中国药典》2010年版一部中对厚朴酚与和厚朴酚含量测定做出了规定[7]，但其供试品溶液的制备是采用浸渍法，冷浸24 h后再进行过滤处理，耗时长，给企业的检验工作带来较大不便。本文对整肠正气丸中和厚朴酚及厚朴酚含量测定的方法进行研究，拟定的测试方法干扰少，灵敏可靠，可有效控制产品质量，为生产企业提供质量控制的便捷途径。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱系统：美国铂金-埃尔默公司，包括Series 200 LC 四元低压梯度泵；Model 785A二极管阵列紫外检测器；NELSON 200 Series色谱工作站；200 Series自动进样器(100 μL)。岛津分析天平(1/10 000)(日本岛津公司)。KQ250-DB超声波清洗仪(昆山超声仪器设备厂，工作频率50 Hz，功率300 W)。

1.2 试药

和厚朴酚、厚朴酚对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为：110730-201112，和厚朴酚含量>99.8%；110729-200411)；整肠正气丸(自制)，规格：每包4 g，(批号：1111261，1111262，1111263)；阴性对照样品(处方中除去厚朴，并按制法工艺制成)。分析用甲醇为色谱纯，水为三重蒸馏水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 分别精密称取和厚朴酚、厚朴酚对照品2.43，4.45 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL含和厚朴酚24.30 μg、厚朴酚44.50 μg的混合溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 取样品适量研细、混匀。取约2.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇约45 mL，超声处理30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm的滤膜过滤，取滤液，即得。

2.1.3 阴性样品溶液的制备 除厚朴外，将其他药按处方中药味的比例，自配阴性样品。再按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。

2.2 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：AgilentC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：室温；流动相：甲醇-水(75∶25)；流速：1 mL·min-1；检测波长：294 nm；进样量10 μL；在此色谱条件下，和厚朴酚、厚朴酚对照品与样品中其他组分分离度不低于1.5；理论塔板数按和厚朴酚、厚朴酚算均不低于3 800。

对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液色谱图见图1，结果表明在此色谱条件下阴性样品溶液中其他成分对和厚朴酚与厚朴酚的测定无干扰。

A.对照品；B.整肠正气丸供试品；C.阴性对照；1.和厚朴酚；2.厚朴酚图1 整肠正气丸及其对照品HPLC图

2.3 线性关系考察

精密吸取和厚朴酚、厚朴酚对照品混合溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，5.0 mL，分别置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别获得和厚朴酚浓度为12.15，24.30,36.45,48.60,60.75，121.50 μg·mL-1以及厚朴酚浓度为22.25，44.50,66.75,89.00,111.25，222.50 μg·mL-1的系列混合溶液。分别精密吸取上述对照品溶液10 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，分别计算回归方程为Y=13 577X-19 263，r=0.999 8；Y=12 024X-26 852，r=0.999 5。表明和厚朴酚、厚朴酚对照品分别在12.15～121.50 μg·mL-1和22.25～222.50 μg·mL-1内具有良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密吸取2.1.1项下对照品溶液10 μL，按2.2项下色谱条件，重复进样6次，测定，记录和厚朴酚与厚朴酚的峰面积，求得RSD分别为1.14%与1.75%，说明精密度良好。

2.5 稳定性试验

精密吸取供试品溶液，在室温下，分别于配制后0,2,4,6,8 h进行和厚朴酚、厚朴酚峰面积测定，每次进样10 μL，测得供试品溶液于8 h内的峰面积 RSD分别为0.93%，0.69%，结果表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.6 重复性试验

称取样品6份(批号1111261)，每份2 g，精密称定，按供试品溶液制备方法操作，依法进样测定，计算含量，求得和厚朴酚RSD=0.55%，厚朴酚RSD=0.94%。结果表明，本法测定具有良好的重现性。

2.7 回收率试验

采用加样回收法，称取已知含量的同一批整肠正气丸(批号：1111261；和厚朴酚、厚朴酚含量分别为2.77，2.58 mg·g-1)1.0 g，精密称定，置50 mL量瓶中，分别精密加入对照品溶液(和厚朴酚浓度为2.83 mg·mL-1，厚朴酚浓度为2.74 mg·mL-1) 1 mL，照供试品溶液制备方法制备。按正文方法，进样，测定，计算和厚朴酚、厚朴酚平均回收率，结果见表1。

表1 回收率试验

2.8 样品测定

精密称取整肠正气丸样品(批号：1111261，1111262，1111263)，按2.1.2项下方法制备，分别精密吸取供试品溶液10 μL，按上述色谱条件测定，计算样品中和厚朴酚与厚朴酚的含量。结果本品含和厚朴酚及厚朴酚合计分别为5.38,5.34,5.31 mg·g-1。

3 讨论

3.1 流动相的选择

实验在选择流动相时，参考相应文献[2-7]，分别选用了甲醇-水，甲醇-水-冰醋酸，乙腈-水等，通过试验发现甲醇-水可以使峰得到较好的分离。并进一步对甲醇-水(75∶25)、(78∶22)、(59∶41)3种不同比例进行了比较，结果，在甲醇-水(75∶25)比例下的色谱峰分离较好且峰形较佳。

3.2 检测波长的选择

通过对供试品及和厚朴酚、厚朴酚对照品溶液的紫外光谱扫描，结合检测峰的分离效果，认为294 nm为最佳检测波长，与《中国药典》2010版一部中厚朴的检测方法一致[7]。

3.3 提取方法的选择

参照文献[2-7]，分别选用了冷浸法、超声法、回流法进行了提取测定，结果表明超声法的提取较为完全，且省时方便、简单易行。

[1] 清·王勋.慈航集三元普济方[M]. 合肥：安徽科技出版社，1990：55.

[2] 魏蓉,项菲.高效液相色谱法测定舒肝快胃丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量[J]. 中南药学，2011,9(11)：847-850.

[3] 马俊,冯端浩,曹红.HPLC法测定儿童清热导滞丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量[J].中国药师，2010,13(4)：524-526.

[4] 李卫民,牛志强,王治平，等.超声强化超临界提取厚朴酚与和厚朴酚工艺的研究[J].中草药，2011,42(4)：681-683.

[5] 魏刚.高效液相色谱法测定藿香正气丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量[J].湖北中医杂志，2011,133(2)：70-71.

[6] 郑新元,张茉,王杰，等.RP-HPLC法测定香苏正胃丸中厚朴酚及和厚朴酚的含量[J].湖北中医杂志，2011,133(2)：70-71.

[7] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：235.

DeterminationofHonokiolandMagnololinZhengChangZhengQiPillsbyHPLC

CHEN Yu-xiu

(HunanFoodandDrugVocationalCollege,Changsha410014China)

Objective：To establish a HPLC method for determining the honokiol and magnolol content in Zheng Chang Zheng Qi Pills.Methods:HPLC was used to detect the honokiol and magnolol content in Zheng Chang Zheng Qi Pills with C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm).The mobile phase consisted of methanol-Water(75∶25).The flow rate was 1.0 mL·min-1and column temperature was room temperature.The detected wavelength was 294 nm.Results:The method were linear at the range of 12.15～121.50 μg·mL-1for honokiol(r=0.9998)and 22.25～222.50 μg·mL-1for magnolol(r=0.999 5).The average recovery rate were 98.47%,RSD=0.72% and 98.30%,RSD=0.88% respectively(n=6).Conclusion:The method is convenient and accurate,which can be applied to the content determination of honokiol and magnolol for Zheng Chang Zheng Qi Pills.

Zheng Chang Zheng Qi Pills;Honokiol;Magnolol;HPLC

2012-10-09)

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陈玉秀，E-mail：cyxxl127@sina.cn