祛风止痛丸药效学实验研究

万宏

（湖北中医药大学附属襄阳医院，湖北 襄阳 441000）

祛风止痛丸为我院协定处方制剂，具有疏风通络、清热利湿、消肿止痛之功效，临床应用具有作用快速、疗效肯定的特点。本文对其药效学进行实验研究，现将结果报告如下。

1 材料与仪器

1.1 药品与试剂

祛风止痛丸，襄阳市中医院制剂室生产，批准文号：鄂药制字 Z20112330，批号：20110212；痛风定胶囊，成都中汇制药有限公司生产，国药准字Z10970025，批号：030101；次黄嘌呤，上海试剂二厂生产，批号：851226；尿酸，Lancaster公司生产，批号：10057758；尿酸试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司生产，规格 5 mL×10支，批准文号：（95）卫药准字 D-19（1）号，批号：330091。

1.2 动物

昆明种小鼠、Wistar大鼠、新西兰大白兔均由新疆医学院实验动物中心提供，合格证号分别为：SCXK（新）090001，SCXK（新）090014，SCXK（新）090003。

1.3 仪器设备

SABA-18型血生化自动分析仪（意大利）；OLYMPUS 显微镜（日本），型号：379330；电子恒温干燥箱，上海跃进医疗器械一厂，型号：GZXDH30X35。

2 方法

2.1 微晶尿酸钠（MSU）的制备

取8 g尿酸置1 600 mL沸水中，调节pH至7.4，再加热至95℃，室温冷却并轻轻搅拌，过滤，得MSU，高温（200℃）灭菌。用前以无菌生理盐水配成100 mg/mL的混悬液。

2.2 观察祛风止痛丸对MSU诱导的大鼠足跖肿胀的影响[1-2]

取 Wistar大鼠 50只，雄性，体质量（163.0±33.0）g，随机分为 5组，每组 10只，即模型组、阳性对照药组及祛风止痛丸3个剂量组。祛风止痛丸剂量分别为：1.0，2.0，4.0 g/kg，分别用生理盐水配制成浓度为 10%，20%，40%的溶液，按 1 mL/100 g灌胃，每日1次，连续10 d。给药最后一天，无菌操作，于大鼠右后足跖皮下注射0.1 mL MSU混悬液（100 mg/mL）致炎。通过测量大鼠左后足跖周径测定致炎前后左右后足跖周径的变化，致炎前及致炎后 0.5，1，2，4，6 h 检测足跖周径，以致炎前后足跖周径之差作为肿胀度。观察祛风止痛丸对MSU致大鼠足跖肿胀的影响。计算各组大鼠足跖肿胀度均值与标准差、各用药组抑制率，并作t检验。

2.3 观察祛风止痛丸对MSU诱导的兔急性关节炎模型的影响[3-4]

取家兔48只，随机分组，每组8只，体质量（2.64± 0.48）kg，雄性。设生理盐水对照组、模型组、痛风定胶囊组和祛风止痛丸3个剂量组（分别为 0.5，1.0，2.0 g/kg），灌胃给药，每天 1 次，连续10 d，末次给药1 h后致炎。致炎时无菌操作，膝关节内注射 0.3 mL MSU（100 mg/mL）混悬液致炎。致炎后5 h处死家兔，收集关节积液，进行白细胞计数，并取滑液膜进行组织学检查。主要观察滑膜组织、滑膜细胞肿胀、坏死、白细胞和淋巴细胞浸润等炎症反应的程度。比较用药组和模型组关节液中白细胞和病理组织检查的差异，并进行显著性检验。

2.4 观察祛风止痛丸对小鼠的镇痛作用[5-6]

取昆明种小鼠50只，雌雄兼用，体质量（20.3±1.5）g。随机分成5组。设生理盐水对照组、痛风定胶囊组及祛风止痛丸3个剂量组 （1.5，3.0，4.5 g/kg），小鼠依体质量灌胃给药，每天1次，连续3 d。末次给药后1.0 h，腹腔注射HAc，观察各组小鼠每15 min内扭体次数。作组间均数t检验，计算抑制率。

2.5 观察祛风止痛丸对小鼠高尿酸血症的影响[7-8]

采用尿酸生成的前体物质次黄嘌呤来建立高尿酸血症动物模型，并通过血中尿酸的含量来评价祛风止痛丸的药效。

2.5.1 建立高尿酸血症动物模型 取小鼠15只，单次腹腔注射次黄嘌呤1 000 mg/kg，形成高尿酸血症模型，分别在造模前、造模后 0.5，1，2，4 h各处死3只，取血清测定尿酸浓度作曲线，观察各时段模型小鼠血清尿酸值。

2.5.2 实验方法 取昆明种小鼠144只，体质量（20.3± 1.5）g，雌雄兼用。依体质量随机分为6组，每组24只，设生理盐水对照组、模型组、痛风定组和祛风止痛丸 3个剂量组（1.5，3.0，4.5 g/kg），灌胃给药，每天1次，连续6 d。末次给药后60 min造模，给小鼠腹腔注射次黄嘌呤1 000 mg/kg，造模后 0.5，1，2 h，分别处死小鼠，取血制备血清，依尿酸试剂盒方法测定各组血清尿酸值。作组间均数t检验，评定祛风止痛丸有无降低血清尿酸作用。

3 结果

3.1 祛风止痛丸对MSU诱导的大鼠足跖肿胀的影响

痛风定胶囊在致炎后2～6 h内对大鼠MSU诱导的足跖肿胀有抑制作用，祛风止痛丸3个剂量均有明显抑制作用，中、大剂量可持续作用6 h以上。祛风止痛丸对大鼠MSU诱导的足跖肿胀的抑制率为12.3% ～ 68.5%，结果见表1，2。

表1 祛风止痛丸对MSU诱导的大鼠足跖肿胀的影响（n=10，±s）

表1 祛风止痛丸对MSU诱导的大鼠足跖肿胀的影响（n=10，±s）

注：与模型组比较，**P＜0.05，***P＜0.01

组别 剂量（g/kg） 正常值（cm） MSU致炎后足跖肿胀度（cm）0.5 h 1 h 2 h 4 h 6 h模型组 - 2.99±0.09 0.34±0.12 0.15±0.08 0.63±0.07 0.71±0.08 0.91±0.15痛风定胶囊组 0.5 2.93±0.09 0.24±0.10** 0.35±0.08** 0.45±0.10*** 0.81±0.18 1.00±0.16祛风止痛丸组 1.0 2.94±0.14 0.22±0.12** 0.39±0.16** 0.49±0.16** 0.62±0.15 0.72±0.18**2.0 2.95±0.08 0.18±0.08** 0.29±0.10** 0.39±0.12*** 0.56±0.14*** 0.74±0.15**4.0 2.91±0.06 0.11±0.08** 0.18±0.11*** 0.24±0.13*** 0.35±0.14*** 0.40±0.14***

表2 祛风止痛丸对MSU诱导的大鼠足跖肿胀的抑制率（n=10）

3.2 祛风止痛丸对MSU诱导的兔急性关节炎模型的影响[3-4]

模型组与生理盐水对照组比较WBC显著增加，提示模型成立。祛风止痛丸各剂量组与模型组比较WBC显著减少，并呈现剂量依赖性（见表3）。病理检查显示祛风止痛组炎症表现明显减轻。

表3 祛风止痛丸对MSU诱导的兔急性关节炎关节液中WBC的影响（n=8，±s）

表3 祛风止痛丸对MSU诱导的兔急性关节炎关节液中WBC的影响（n=8，±s）

注：***与模型组比较P＜0.01；+++与对照组比较P＜0.01

组别 剂量（g/kg） WBC（×109/L）生理盐水对照组 2.0 0.5±0.2模型组 - 15.7±2.2+++痛风定胶囊组 0.2 4.9±1.6***祛风止痛丸组 0.5 13.2±1.4***1.0 8.5±3.3***2.0 2.6±1.0***

3.3 祛风止痛丸对小鼠的镇痛作用[5-6]

祛风止痛丸组与对照组比较，扭体次数明显减少（见表 4）。

3.4 祛风止痛丸对小鼠高尿酸血症的影响[7-8]

3.4.1 观察各时段模型小鼠血清尿酸值 见图1。

由图1可见，造模后血中尿酸含量在0.5 h达到高峰值，而后随时间延长而降低。

表4 祛风止痛丸对HAc引起的小鼠扭体反应的影响（n=10，±s）

表4 祛风止痛丸对HAc引起的小鼠扭体反应的影响（n=10，±s）

注：***与生理盐水对照组比较，P＜0.01。

组别 剂量（g/kg） 扭体（次/15min） 抑制率（%）生理盐水对照组 2.0 47.9±12.4 -痛风定胶囊组 0.7 18.0± 9.9*** 62.4祛风止痛丸组 1.5 18.7±14.1*** 61.0 3.0 19.1±12.4*** 60.1 4.5 7.6± 8.6*** 84.1

图1 不同时间段模型组小鼠血清中尿酸值变化

3.4.2 依尿酸试剂盒方法测定各组鼠血清尿酸值模型组与对照组比较各时段血清尿酸值均显著升高，表明模型成立。各给药组与模型组比较，血清尿酸值随着剂量增加而降低，见表5。

表5 祛风止痛丸对各时段血清尿酸含量的影响（n=24，±s）

表5 祛风止痛丸对各时段血清尿酸含量的影响（n=24，±s）

注：***与模型组比较，P＜0.01；+++与对照组比较，P＜0.01

不同时间段尿酸值的变化（u g/d L，×1 0 4）0.5 h 1 h 2 h生理盐水对照组 2.0 0.3 2±0.0 9 0.2 9±0.0 4 0.3 1±0.0 6模型组 - 2.9 7±0.9 6+++ 3.6 0±0.8 9+++ 2.3 0±1.1 8+++痛风定胶囊组 0.7 0.7 9±0.2 2*** 0.9 0±0.1 6*** 0.5 9±0.1 5***祛风止痛丸组 1.5 0.9 5±0.0 5*** 0.9 0±0.1 3*** 0.3 3±0.0 8***3.0 0.7 8±0.1 5*** 0.6 9±0.1 6*** 0.3 8±0.1 4***4.5 0.5 3±0.1 6*** 0.5 0±0.2 0*** 0.2 3±0.1 1***组别 剂量（g/k g）

3 小结

痛风又称“高尿酸血症”，中医认为属于“热痹”的范畴，是一种常见的疾病，发病率在0.35%左右[10]，相近于癌症的发病率。本研究发现祛风止痛丸对MSU诱导的大鼠足跖肿胀、兔急性关节炎模型有明显的抑制作用；使腹腔注射HAc引起的小鼠扭体反应明显减少。祛风止痛丸能明显降低由次黄嘌呤引起的小鼠高尿酸血症模型中血尿酸含量，对实验性痛风模型有明显的防治作用，且有剂量依赖性，为其用于临床治疗痛风提供了药理学依据。

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