腹泻仔兔微生物学诊断及药敏试验
2013-09-25田玉虎山东宝来利来生物工程股份有限公司山东泰安271000
田玉虎 王 静 (山东宝来利来生物工程股份有限公司 山东 泰安 271000)
腹胀腹泻是仔兔常见的一种病症,据统计,在正常饲养条件下,仔兔的死亡率在20%,其中死于腹泻腹胀的约占80%;养兔经验不足的养殖户,幼兔的死亡率为50%~70%,其中腹泻死亡的占死亡总数的80%以上。引起仔兔腹泻腹胀的病原体有:病毒(轮状病毒、细小病毒、腺病毒、冠状病毒等)、细菌(魏氏梭菌、大肠杆菌、沙门氏菌等)和球虫(新艾美耳球虫、穿孔艾美耳球虫、大型艾美耳球虫),制定一套快速有效的检测程序,在第一时间找出病因并加以控制,是养殖户普遍关心的问题。
1 病兔情况调查
(1)向养殖者询问送检病兔的产地、兔龄、数量、饲料情况(有无换料、营养搭配)和发病率、死亡率、出现的症状、治疗措施及有无改善。此外还应调查有无应激(断奶、惊吓、免疫)、卫生消毒措施以及附近养殖场的疫病情况。(2)2013年3月,泰安某兔场专业户饲养的50多只刚断奶10来天的仔兔突然发病,死亡了4只。观察该场饲养条件良好,饮水清洁,饲料未发生霉变。(3)病兔精神沉郁,食欲减退,饮水量增加,体重减轻,被毛粗乱,腹泻腹胀,水样粪便,肛门周围毛尤其脏乱,病兔迅速消瘦,并严重脱水。
2 病理解剖、取样
(1)处死病兔后沿腹白线切开腹壁,用镊子挑起腹肌防止刺破肠管。检查腹水的颜色、多少和清浊度。打开腹腔后,依次检查腹膜、肝、胆囊、胃、脾脏、肠道、胰、肠系膜、淋巴结、肾脏、膀胱和生殖器官。胸腔暴露后,依次检查心、肺、胸膜、气管的病变。必要时,打开口腔,鼻腔及颅腔作检查。(2)取出有病变的组织并拍照,同时取少许胃内容物、盲肠内容物4度备用,并测定各自的PH值。盲肠、回肠各取两段于10%福尔马林液保存。(3)解剖发现病兔肺部气肿,有肉变;盲肠胀气,内容物呈流体状,肝脏有白色小结节,其他尚无明显的病变。取肺脏、盲肠、回肠各一段保存备用。
3 致病菌分离
无菌取盲肠内容物接种在伊红美兰培养基(用于分离大肠杆菌)、胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂(用于分离魏氏梭菌)和MRS培养基(用于分离乳酸菌)中,同时将肺脏剪碎、研磨、稀释、震荡,无菌接种于伊红美兰培养基、多杀性巴氏杆菌培养基、葡萄球菌选择性琼脂。37℃恒温培养24h(魏氏梭菌厌氧培养),观察结果。
4 药敏试验
无菌取盲肠内容物接种在LB培养基中,凝固后打孔并加入抗生素(头孢噻肟(TB),头孢曲松(QS),庆大霉素(QD),阿米卡星(AM),阿奇霉素(AQ),新霉素(X),泰乐菌素(TL),氟苯尼考(FB),浓度为30ng/ml),37℃恒温培养24h后,在琼脂平板上观察抑菌效果(见附表)。
附表 药敏试验结果(抑菌圈直径) (mm)
试验结果说明培养24h,大肠杆菌及产期荚膜梭菌均较多,头孢噻肟、头孢曲松、阿米卡星和新霉素对盲肠内容物细菌具有较高的敏感性。
4 讨论
根据兔场发病的总体情况、临床症状和病理变化,参考以往对兔腹泻病的鉴别诊断经验,可以排除兔球虫、沙门氏菌病、巴氏杆菌感染和兔病毒性出血症的发病可能。经微生物学诊断,病兔的盲肠中存在大量的大肠杆菌和魏氏梭菌,结合临床症状和病理变化,初步诊断为魏氏梭菌既发大肠杆菌引起的腹泻腹胀,如需确诊还要进行多重PCR试验鉴定是何血清型引起。考虑到大肠杆菌和魏氏梭菌均为条件性致病菌,做好日常饲养管理可明显减少发病率。同时药敏试验显示,头孢噻肟、头孢曲松、阿米卡星和新霉素对该病兔的肠道菌抑菌效果均较好。结合现场问询结果,发现该场之前用过泰乐菌素,约有半年时间,之前未用过头孢曲松及头孢噻肟,因此可以考虑使用其进行治疗。
在此之前检测的鼻炎病兔药敏试验显示,现场常用的抗生素基本无效,仅泰乐菌素有低敏至中敏的效果,检测后现场使用有效。区域性药物使用的情况不一样,兔场药物耐药性问题各区域地区差异也较大,同一区域不同场区应用药物不同药敏结果也不同。规避耐药菌的出现,现场的合理用药尤为重要。