不同方法检测正常人群血清甲胎蛋白比较

陈卫文 刘雪辉 吴丽美 朱演葵

甲胎蛋白（A-fetoprotein，AFP）是原发性肝癌（PHC） 实验室诊断和判断肝病预后的重要指标，准确测定患者血清中AFP含量非常重要。临床上测定AFP的常规方法有放射免疫法（RIA），酶免疫法（EIA）和胶体金法。近年来，化学发光免疫检测技术（CLIA）因其具有反应快、灵敏度高、准确度高，标记物稳定、对人体无放射性或毒性危害且特异性强等特点，是目前为止公认最好的微量定量检测方法[1]。

笔者所在医院的健康监护科常年以正常健康体检人群为调查对象，大批量筛查甲胎蛋白阳性的标本，酶联免疫吸附试验法（ELISA）试剂成本低，敏感度高，适于大批量普查。本文旨在探讨酶联免疫吸附试验法（ELISA）和化学发光免疫检测法（CLIA）检测AFP敏感度和特异度，评价两种方法的适用性。

1 材料与方法

1.1 标本 2012年6月到笔者所在医院体检的某单位正常公务员血清标本共2000份，其中男性1500例，女性500例。年龄28～56岁。

1.2 仪器与试剂 深圳爱康Uranus AE150全自动酶免仪，西门子Centuar化学发光仪。酶联免疫吸附试验法（ELISA）试剂由郑州安图绿科生物工程有限公司提供。西门子Centuar化学发光免疫检测法（CLIA）试剂均为原装配套西门子Centuar校准物、质控物和试剂。

1.3 方法 分别用酶联免疫吸附试验法，化学发光免疫检测法测定某单位正常公务员血清标本共2000份，其中男性1500例，女性500例。

1.4 统计学处理 本实验采用SPSS 11.0软件。计数资料行 χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2000份正常公务员健康体检的血清标本中，用酶联免疫吸附试验法和化学发光免疫检测法检测2000份正常公务员健康体检的血清标本的甲胎蛋白，其中男性1500例，女性500例。年龄28～56岁。用酶联免疫吸附试验法检出17例阳性，阳性率0.85%，敏感性为80.9%，1例经确证为阴性，特异性为95%。假阳性率为5%[2]。用化学发光法检测甲胎蛋白21例高于正常范围，化学发光法检出AFP高于正常范围的21例中，阳性率1.05%，经确证AFP高于正常范围的21例均为阳性，敏感性为100%。化学发光法和酶联免疫吸附试验法的敏感性比较差异有统计学意义（P<0.05），化学发光法和酶联免疫吸附试验法的特异性比较差异有（P<0.05）。酶联方法的精密度测定：批内精密度测定用质控血清在同一反应板内测定20个孔，测得（OD/CO值）X=2.30，S=0.2，CV=12.17%；批间精密度测定用同一批号质控血清在每一反应板测定一孔，连续测定20 d，测得（OD/CO值）X=2.21，S=0.30，CV=13.57%（OD为吸光度，CO为cut off值，X为均值，CV为变异系数）[3]。见表1。

表1 ELISA法和化学发光免疫检测法检测结果比较

3 讨论

甲胎蛋白（α-fetoprotein，αFP或AFP）主要在胎儿肝中合成，分子量6.9万，在胎儿13周AFP占血浆蛋白总量的1/3。在成人，AFP可以在大约80%的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现AFP阳性率为50%[4]。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患者亦可出现不同程度的升高。但当肝细胞发生癌变时，却又恢复了产生这种蛋白质的功能，而且随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加，甲胎蛋白就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标。过去一直认为是诊断原发性肝癌的特异性肿瘤标志物，具有确立诊断、早期诊断、鉴别诊断的作用[5]。近年大量的临床却发现，部分肝硬化患者会长期出现AFP达到上千，但多年都没有肝癌的迹象；同时发现约20%的晚期肝癌患者，直至病故前，AFP仍不超过10。甲胎蛋白是肝癌的特异性标志，但血清甲胎蛋白阳性未必都是肝癌。在临床中发现，血清谷丙转氨酶（ALT）升高的患者同时有血清甲胎蛋白升高[6-7]。

酶联免疫法是1971年瑞典学者Engvail和Perlmann，荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）[8]。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法。它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质（发光剂）在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。由于方法学原理的不同，化学发光法较之酶联免疫法敏感度和特异度高[9-10]。

本实验运用酶联免疫法和化学发光法分别测定2000份健康人血清甲胎蛋白含量，除有1例经用酶联免疫法测不出，1例假阳性外，其余都相符。化学发光法敏感度和特异度高，但试剂成本较高。酶联免疫法的敏感度虽无化学发光法高，且受其他因素干扰会产生假阳性，但其试剂成本较低，适合于大批量健康人群体检筛查用。为节约成本，可先采用酶联免疫法筛查，血清甲胎蛋白阳性的标本用化学发光法定量测定，保证排除假阳性。对影像学肝脏异常的人用酶联免疫法测不出甲胎蛋白阳性的标本用化学发光法定量测定，保证不漏检1例。

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