RIPTO-1在肺腺癌组织中的表达及临床意义

陈 琛 李晓娟 李晟磊 张国俊

1.郑州大学基础医学院病理教研室 郑州大学第一附属医院病理科 河南省肿瘤病理重点实验室，河南郑州 450001；2.河南中医学院基础医学院，河南郑州 450008；3.郑州大学第一附属医院呼吸内科，河南郑州 450052

RIPTO-1在肺腺癌组织中的表达及临床意义

陈 琛1李晓娟2李晟磊1张国俊3▲

1.郑州大学基础医学院病理教研室 郑州大学第一附属医院病理科 河南省肿瘤病理重点实验室，河南郑州 450001；2.河南中医学院基础医学院，河南郑州 450008；3.郑州大学第一附属医院呼吸内科，河南郑州 450052

目的 检测组蛋白去CRIPTO-1在肺腺癌组织中的表达及其临床意义。 方法 采用免疫组织化学法检测60例肺腺癌及20例正常肺组织中CRIPTO-1蛋白表达的情况，并分析其表达与肺腺癌临床病理特征的关系。 结果 CRIPTO-1蛋白在肺腺癌组织中的阳性表达率（65.0%）显著高于正常肺组织（15.0%），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05)。其蛋白表达与肺腺癌组织的分化程度、临床分期、组织学分型及淋巴结转移均密切相关，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 CRIPTO-1的过表达可能与肺腺癌的发生、发展有关，并对判断肺腺癌患者的生物学行为具有一定的意义。

肺腺癌；CRIPTO-1；免疫组织化学；表达

人的CRIPTO-1基因最初在人畸胎癌cDNA的文库中鉴定出来，因此也被称为畸胎癌来源的生长因子-1（teratocarcinoma-derived growth factor 1，TDGF-1），其基因定位于染色体 3p21.3，是表皮生长因子（epidermalgrowthfactor，EGF）-cripto-1－FRL-1-cryptic（CFC）蛋白家族的成员[1]。 CRIPTO-1 mRNA和蛋白已经被证实在多种不同类型的肿瘤中高表达，包括乳腺癌、胃癌、卵巢癌及宫颈癌等[1-4]，提示其在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。本研究采用免疫组织化学染色法检测CRIPTO-1在正常肺组织及肺腺癌组织中的表达情况，并分析其表达与肺腺癌的分化程度、组织学分型、临床分期及淋巴结转移的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集郑州大学第二附属医院2010年1月～2013年3月肺腺癌切除标本60例，其中，男36例，女24例；年龄34～81 岁，平均（55.22±16.2）岁；其中，高-中分化 39 例，低分化21例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期27例；组织学分型：微乳头型5例，实体型11例，乳头型26例，腺泡型18例；有淋巴结转移者35例，无淋巴结转移者25例。另选取20例远端（10 cm以外）正常肺组织作对照。全部标本均用体积分数40 g/L多聚甲醛固定，脱水，石蜡包埋，连续切片，切片厚度4～6 μm，分别用于免疫组织化学及常规HE染色。所有患者术前均未接受化疗、放疗、免疫治疗及其他治疗。

1.2 主要试剂

兔抗人CRIPTO-1单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司公司，免疫组织化学试剂盒、3，3-二氨基联苯胺（digital audio broadcasting，DAB）显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 CRIPTO-1免疫组织化学染色

采用免疫组织化学SP法，常规脱蜡，PBS清洗，抗原修复，体积分数3%过氧化氢清除内源性过氧化物酶活性，PBS清洗，滴加正常山羊血清封闭，加Ⅰ抗（即用型），4℃冰箱过夜，PBS清洗，加Ⅱ抗，PBS清洗，加Ⅲ抗，PBS清洗，DAB显色。苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。用Novus Biologicals公司提供的切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定

CRIPTO-1蛋白阳性信号呈浅黄色至棕黄色颗粒，也位于细胞质内。高倍镜下随机选取5个视野（每个视野观察细胞数不少于200个），按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定。采用9分评分制：按照阳性细胞比例≤10%为1分，10%～50%为2分，＞50%为3分；按染色强弱：阴性为0分；淡黄色染色为1分；中度黄色染色为2分，棕黄色染色为3分。然后按照“阳性细胞得分×染色强弱得分”计总分，总分＜3为阴性，总分≥3为阳性[5]。

1.5 统计学方法

实验结果应用SPSS 17.0统计分析软件进行分析，采用χ2检验进行数据分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 CRIPTO-1在肺腺癌及正常肺组织中的表达

CRIPTO-1蛋白阳性显色为棕黄色颗粒，主要定位于细胞质，癌细胞中多呈强阳性表达（图1A），正常肺组织中多不表达或表达程度较弱（图1B）。CRIPTO-1在肺腺癌及正常肺组织中的表达结果见表1。

表1 CRIPTO-1在肺腺癌及正常肺组织中的表达（n）

2.2 CRIPTO-1的表达及其与肺腺癌临床病理特征的关系

肺腺癌组织中CRIPTO-1蛋白过表达与肺腺癌组织的分化程度、临床分期、组织学分型及淋巴结转移均密切相关，组间比较差异有统计学意义（χ2=9.217、5.862、11.334及 8.308，P<0.05）（表 2）。

表2 CRIPTO-1 mRNA的表达及其与临床病理学特征的关系（n）

3 讨论

CRIPTO-1与它的配体Nodal在早期胚胎发育中发挥关键的作用，并被发现与鼠和人的胚胎干细胞未分化的状态密切相关[6]。与其他胚胎基因一样，CRIPTO-1在多种类型肿瘤的形成和进展、刺激细胞的增殖、迁移以及肿瘤的血管生成中起重要作用。一些研究表明胚胎发育期间的细胞命运调控和肿瘤发生期间的细胞转化具有共同的信号调控途径，提示胚胎信号途径的未控制的激活可能在成人组织中驱动细胞转化和肿瘤的进展[7-9]。此外，CRIPTO-1在许多肿瘤中表达增加，其过表达与肿瘤的发生、发展密切相关[10-12]。

CRIPTO-1在小鼠EpH4乳腺上皮细胞中的过表达不仅促使细胞增殖加速和软琼脂锚锭非依赖性的生长，而且引起管样结构的形成，这一变化是在上皮细胞生长在Ⅰ型胶原基质的条件下引起的[13]。第一次研究CRIPTO-1在EpH4细胞中的效果表明CRIPTO-1可能在诱导乳腺上皮细胞向间叶细胞过渡中发挥重要作用。与此类似，过表达CRIPTO-1的人MCF-7乳腺癌细胞除了在无血清的培养基中获得高增殖能力，而且能增加软琼脂中的克隆形成和增加失巢凋亡抗性，同时也表明采用的Boyden小室浸润分析中浸润能力的增强[3]，进一步证实CRIPTO-1在上皮间质转化中发挥重要作用的是在乳腺不典型增生和MMTVCripto-1转基因小鼠的肿瘤中的研究[14]。

本研究利用免疫组织化学方法研究肺腺癌组织中CRIPTO-1蛋白的表达，结果提示CRIPTO-1蛋白高表达于肺腺癌组织中，而正常肺组织中CRIPTO-1蛋白表达的阳性率非常低，提示从正常肺组织到肺腺癌组织的发生、发展及其演进的过程中，CRIPTO-1可能起到了非常重要的作用。笔者进一步分析了CRIPTO-1蛋白的表达与临床病理学参数之间的关系，结果发现CRIPTO-1蛋白表达与肺腺癌的分化程度、临床分期、组织学分型和淋巴结转移均密切相关，提示该基因可能在肿瘤的浸润、转移过程中发挥关键性的作用，但具体的分子机制还有待进一步探讨。

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[2]Kuniyasu H，Yoshida K，Yokozaki H，et al.Expression of cripto，a novel gene of the epidermal growth factor family，in human gastrointestinal carcinomas[J].Jpn J Cancer Res，1991，82（9）：969-973.

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[9]Nagaoka T，Karasawa H，Castro NP，et al.An evolving web of signaling networks regulated by Cripto-1[J].Growth Factors，2012，30（1）：13-21.

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Expression and clinical significance of CRIPTO-1 in lung adenocarcinoma tissues

CHEN Chen1LI Xiao-juan2LI Sheng-lei1ZHANG Guo-jun3▲

1.Department of Pathology,the Medical college of Zhengzhou University;the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University;Henan key Laboratory of Tumor Pathology,Henan Province,Zhengzhou 450052,China;2.Basic Medicine College,Henan University of Traditional Chinese Medicine,Henan Province,Zhengzhou 450008,China;3.Department of Respiratory,the First Affiliated Hospital,Zhengzhou University,Henan Province,Zhengzhou 450052,China

ObjectiveTo investigate expression and clinical significance of CRIPTO-1 in lung adenocarcinoma.MethodsImmunohistochemical staining were used to detect CRIPTO-1 protein expression in 60 cases of lung adenocarcinoma and 20 cases of normal lung tissue and the relationship between CRIPTO-1 expression and clinicopathological features of lung adenocarcinoma was analyzed.ResultsThe positive expression rate of CRIPTO-1 protein in lung adenocarcinoma (65.0%)was significantly higher than that in normal lung tissue (15.0%),and there was a significant difference in group comparison(P＜0.05).The expression of CRIPTO-1 protein was closely correlated with the differentiation,clinical stage,histological type and lymphatic metastasis in lung adenocarcinoma and there was a significant dif ference in group comparison (P＜0.05).ConclusionThe overexpression of CRIPTO-1 may be associated with the carcinogenesis and development of lung adenocarcinoma and can be used for juduing its biological behavior.

Lung adenocarcinoma;CRIPTO-1;Iimmunohistochemistry;Expression

R734.2

A

1674-4721（2013）08（b）-0017-03

河南省教育厅基础与前沿技术研究项目（122300410363）▲

张国俊，主任医师，教授，研究方向：肺癌的病因及发病机制

2013-06-07 本文编辑：林利利）