肝细胞癌中Survivin、Livin蛋白的表达及其临床意义

王康康 肖兴国

郑州大学附属郑州中心医院消化内科，河南郑州 450052

原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤，严重危害着人类的健康。 IAPs（inhibitors of apoptosis proteins）是一组以抑制caspase为主要作用机制的凋亡调控因子。其中Survivin和Livin是IAPs家族中最具有表达特异性的两种凋亡抑制蛋白，在人类多种肿瘤组织中异常表达[1]。故一部分学者认为检测Livin、Survivin可以帮助肿瘤疾病的诊断，为肿瘤的治疗提供新的治疗途径。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集郑州大学第一附属医院普外科2006年5月～2008年5月手术切除并经病理学证实的HCC标本60例，男39例，女 21 例，年龄 18～78 岁，平均（50.00±10.60）岁。 所有患者在术中、术前均未经放、化疗及免疫治疗。将HCC分为3级，其中，高分化13例，中分化36例，低分化11例；肿瘤直径≥3 cm 42例，＜3 cm 18例；有转移47例，无转移13例（转移包括肝内转移、淋巴结转移和肝外转移）。另随机抽取上述60例HCC患者的癌旁肝组织40例作为对照。

1.2 方法

兔抗人Livin、survivin多克隆抗体、即用型SP试剂盒、DAB显色剂试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。标本均经10%甲醛溶液常规固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。采用免疫组化二步法，具体步骤参照试剂盒说明。用PBS代替一抗做阴性对照。以胞浆、胞核内出现棕黄色颗粒为Survivin、Livin免疫组化染色阳性。将染色强度和阳性细胞百分率相结合判断Survivin、Livin免疫组化染色结果。先按染色强度评分：0分为无色，1分为浅黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色，染色强度需与背景色相对比；再按阳性细胞所占百分比评分：0分为阳性细胞<5%，1分为5%～25%，2分为 26%～50%，3分为 51%～75%，4分为>75%，染色强度分值与阳性细胞百分比分值的乘积为0～1分为阴性，2～3 分为+，4～5 分为++，>6 分为+++。 本实验将+～+++均视为阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计学处理，阳性率比较用χ2检验，相关性分析采用Sperman等级相关性分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Survivin及Livin在肝细胞癌组织及癌旁组织中的表达

肝细胞癌中Survivin及Livin染色阳性物质呈棕黄色颗粒状，表达主要位于癌细胞的胞浆和胞核，在部分癌旁组织中可见Survivin及Livin染色阳性。肝癌组Survivin及Livin 阳性率分别为 68.3%（41/60）、58.3%（35/60）， 癌旁组分别为 10.0%（4/40）、5.0%（2/40）。 两组 Survivin 及 Livin阳性率比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。

2.2 Survivin及Livin的表达与肝细胞癌临床及病理学特征之间的关系

具体见表1。

表1 肝癌组织Survivin及Livin阳性表达与肿瘤临床病理特征的比较（n）

2.3 肝癌组织Survivin与Livin表达的相关性分析

本实验结果显示，其中22例HCC标本中Survivin蛋白及Livin蛋白均为阳性，有6例HCC标本中两者的表达均为阴性；Survivin阳性表达而Livin阴性表达的有19例，Livin阳性表达而Survivin阴性表达的13例。肝癌组织中Survivin和Livin的表达无相关性（P＞0.05）。

3 讨论

IAP 家族包括 8 个成员：NAIP、XIAP、cIAP-1、cIAP-2、survivin、apollon、ILP-2和 livin。Survivin和 Livin是 IAP 家族中新发现的两种蛋白，两者都可以直接或间接抑caspase凋亡信号转导过程中的起始分子caspase-9的活化、活性以及效应分子caspase-3/-7的活性而阻断凋亡的发生过程[2-3]。研究发现，Survivin在胃癌、胰腺癌、结肠癌、乳腺癌等多种肿瘤中表达增加，并可促进肿瘤的发生发展或远处转移[4]。Survivin在肿瘤组织中高表达、在癌旁组织中低表达，使其在HCC的诊断及评估预后中具有重要的参考价值。Livin是一种新发现的、特异性表达于人的胚胎组织、胎盘组织以及大多数人类实体瘤细胞的蛋白。在正常成人组织亦有所表达，如心脏、脾、卵巢、肺、脑、骨骼肌和淋巴细胞，但含量很低。近年来研究发现，Livin蛋白在肺癌、膀胱癌、黑色素瘤等多种肿瘤中表达增加，同时该蛋白的高表达与肿瘤的分化程度、侵袭、转移过程相关[5]。本实验结果显示，肝癌组织Survivin蛋白、Livin蛋白表达均高于相应癌旁肝组织，并在不同的组织分级及有无转移组间表达均有明显差异。提示Survivin蛋白、Livin蛋白的高表达与肝癌的侵袭和转移密切相关。有实验表明，用siRNA技术沉默Survivin与Livin基因表达，能够抑制肿瘤的增殖并取得了一定的成效[6-7]。提示Survivin基因、Livin基因可做为候选癌基因在多种肿瘤的发生、发展中发挥作用，并与肿瘤的侵袭、转移过程密切相关。

本研究表明，Survivin与Livin表达无相关性，考虑两者的上调机制有一定的差异，还需更深入、更具体的研究。或者，我们可以认为Survivin和Livin两种基因在肝癌的诊断和治疗中有单独的作用。

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