解毒通脉胶囊抗心肌缺血效应的工艺筛选研究*

张 丽 雷亚贤 陕西中医学院附属医院 （咸阳 712000）

不稳定型心绞痛（UAP）属于中医“胸痹、心痛”范畴。依其证候表现，属于热毒、痰浊、瘀血互相交阻，痹阻心脉，“不通则痛”，此为标急之证。按“急则治其标”之原则，当以清热解毒，化痰祛瘀，宣痹通脉为主。解毒通脉胶囊具有清热解毒、化痰祛瘀、宣痹通脉之功效，尤适于热毒痰瘀型冠心病不稳定型心绞痛。故本实验采用现代化学提取方法结合药理学效应，对比观察不同提取工艺的解毒通脉胶囊对心肌缺血的保护作用，以期筛选出解毒通脉胶囊抗心肌缺血的最佳工艺。

1 材料与仪器 1.1 实验动物 健康SPF级SD大鼠，体质量（245±15）g，合格证号：陕医动字第08－25号；ICR小鼠，体质量18～22g，合格证号：陕医动字第07－002号，均由陕西省西安市长安区斗门实验动物养殖场提供。

1.2 药物与试剂 所有药材均由西安盛兴中药饮片有限公司提供；阳性对照药血塞通胶囊为云南省玉溪市维和制药有限公司生产（批号：20100201）；心得安为西安利君制药有限责任公司生产（批号20100305）；垂体后叶素为上海第一生化药业有限公司（批号：100904）；乌拉坦，中国医药集团上海化学试剂公司分装（批号：20100412），0.9%氯化钠注射液，中国医药集团上海化学试剂公司分装（批号：20100412）。盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110766－200011），乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。

1.3 仪器日立L－2000型高效液相色谱仪，L－2400型紫外检测器，L－2130型泵，EZStart工作站。METTLER AE240电子分析天平（上海梅特勒－托利多仪器有限公司）。KQ 3200E型超声波清洗器。

2 方 法 2.1 三种提取工艺样品的制备 工艺样1制备：取5倍处方量，三七烘干，粉碎成细粉，备用；丹参、黄连、莲子心、瓜蒌、半夏、莱菔子、赤芍七味药材加水煎煮提取2次，每次2h，加8倍量的水，滤过，合并滤液，加入三七细粉，浓缩至360mL（每1mL含1g原药材），备用。

工艺样2制备：取5倍处方量，三七烘干，粉碎成细粉，备用；取丹参，黄连、赤芍三味加8倍量的50%乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过，得滤液①，备用。莲子心、瓜蒌、半夏、莱菔子四味药材加水煎煮提取2次，每次2h，加8倍量的水，滤过，与滤液①合并，加入三七粉，浓缩至360mL（每1mL含1g原药材），备用。

工艺样3制备：取3倍处方量，三七烘干，粉碎成细粉，备用；取丹参加8倍量的95%乙醇回流提取1.5h，滤过，得滤液①，药渣与黄连、赤芍二味加8倍量的50%乙醇回流提取1次，每次1.5h，滤过，得滤液②，备用。药渣再与莲子心、瓜蒌、半夏、莱菔子四味药材加水煎煮提取2次，每次2h，加8倍量的水，滤过，与滤液①、②合并，加入三七粉，浓缩至360mL（每1mL含1g原药材），备用。

2.2 对垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的影响 取健康SD大鼠，体重180～220g，乌拉坦腹腔注射麻醉，仰卧固定于手术台，将4个针形电极按规定位置分别插于大鼠四肢皮下（红－右前肢，黄－左前肢，蓝－左后肢，黑－右后肢），II联导描记正常心电图，选取心电图正常的大鼠60只，随机均分为模型对照组、样品1、2、3组（9.6g／kg）、血塞通组（0.3g／kg）。样品1、2、3组及血塞通组、按设定的剂量给大鼠灌胃，模型对照组给水，连续5d，从第6d开始，每组大鼠给药后30min，然后腹腔注射垂体后叶素（0.6U／kg）造成心肌缺血，描记缺血后1、5、15、30S、1、3、5、10min各时间点心电图，以给药后心电图ST段变化的毫米数的标准，表示心肌缺血程度。

2.3 解毒通脉胶囊对正常小鼠耐缺氧时间的影响 取ICR小鼠72只，体质重18～22g，雌雄各半，随机分为空白对照组（给予等容量水溶液）、不同工艺1～3组（12g／kg），心得安组（20mg／kg）、血塞通组（37mg／kg）。不同工艺1～3组按设定的剂量给小鼠灌胃，连续5d，第6d给药后30min，测小鼠耐缺氧生存时间，试验用磨口瓶，容积125mL，每瓶内加入钠石灰70g，用凡士林瓶口密封，以小鼠呼吸停止为指标，记录小鼠生存时间（min）。

3 结 果 3.1 工艺样品指标性成分的测定对3种工艺样品中盐酸小檗碱、芍药苷、丹参酮ⅡA三个指标性成分，分别按《中国药典》的相应色谱条件及方法进行测定，计算转移率，综合上述评价结果，故选择工艺3的提取方法，较为理想。结果如下。

表1 指标成分测定结果（n＝2）

3.2 对垂体后叶素致心肌缺血大鼠第Ⅱ导联心电图ST段变化的影响 结果如表2、3所示，在与模型组比较，各给药组在垂体后叶素舌下注射后不同时段均有显著差异（P＜0.05或P＜0.01），其中解毒通脉胶囊工艺1在注射后1S、3S、5S、30S、1min、3min有显著差异（P＜0.05）；工艺2在注射后10S、15S、30S有显著差异（P＜0.05或P＜0.01）；工艺3在注射后1S、3S、30S、1min、3min有显著差异（P＜0.05）；血塞通在注射后1S、3S、5S、30S、1min、3min有显著差异（P＜0.05或P＜0.01）。结果提示，解毒通脉胶囊工艺1、2、3组有一定程度改善Ⅱ导联心电图ST段异常变化作用。

表2 对垂体后叶素致急性心肌缺血心电图的影响（，n＝10－12）

表2 对垂体后叶素致急性心肌缺血心电图的影响（，n＝10－12）

注：与对照组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01

表3 对垂体后叶素致急性心肌缺血心电图的影响（，n＝10－12）

表3 对垂体后叶素致急性心肌缺血心电图的影响（，n＝10－12）

注：与对照组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01

组 别给药后不同时间点ST抬高的变化值／（mV）30s 1min 3min 5min 10min模型组 0.039±0.049 0.064±0.046 0.044±0.048 0.031±0.046 0.031±0.046工艺1 0.112±0.138△ 0.039±0.055△ 0.045±0.052△ 0.052±0.066 0.009±0.030工艺2 0.036±0.048△ 0.031±0.058 0.008±0.029 0.042±0.045 0.025±0.045工艺3 0.036±0.048△ 0.044±0.056 0.036±0.044 0.050±0.052 0.039±0.049血塞通 0.039±0.049△ 0.064±0.046▲ 0.044±0.048△0.031±0.046 0.031±0.046

3.3 对正常小鼠耐缺氧时间的影响 结果如表4所示，解毒通脉胶囊工艺2、3组，心得安及血塞通组小鼠耐缺氧时间显著延长，与对照组比较有显著差异（P＜0.05或P＜0.01），解毒通脉胶囊工艺1与对照组比较无显著性变化。结果提示，解毒通脉胶囊工艺2、3组有一定抗小鼠缺氧的作用。

表4 对正常小鼠耐缺氧能力的影响（，n＝10－12）

表4 对正常小鼠耐缺氧能力的影响（，n＝10－12）

注：与对照组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01

工艺1 工艺2 工艺3心得安组 血塞通组生存时间／min 13.80±1.61 15.97±3.5116.98±3.71△ 17.60±3.23▲ 19.34±2.83▲ 23.60±3.47▲

4 讨 论 解毒通脉胶囊由黄连、三七、莲子心、全瓜蒌、半夏、莱菔子、丹参和赤芍八味中药组成。该处方是由我院张翠英教授在《伤寒论》“小陷胸汤”基础上加味而成。小陷胸汤方由黄连、半夏、瓜蒌三味中药组成，具有清热涤痰开结之功。在此基础上加味形成的解毒通脉胶囊组方，以黄连、三七为主药，黄连清热解毒祛痰，三七活血化瘀止痛；莲子心辅黄连清心热、解郁毒，瓜萎、半夏、莱菔子宽胸散结化痰，丹参、赤芍活血化瘀，均为辅药。全方虽主辅二类，但味少力专，具有清热解毒、化痰祛瘀、宣痹通脉之功效，尤适于热毒痰瘀型冠心病不稳定型心绞痛。本实验采用现代化学提取方法结合药理学效应，筛选出解毒通脉胶囊抗心肌缺血的最佳工艺，对该处方的成药性进行研究。

结果表明解毒通脉胶囊工艺2、3中黄连、丹参、赤芍醇提中盐酸小檗碱转移率（%），芍药苷转移率（%）和丹参酮ⅡA转移率（%）均较工艺1（水提）高，药理学结果发现工艺2、3具有改善ST段异常升高（或降低）作用，显著延长小鼠耐缺氧时间。因此，我们推测黄连、丹参、赤芍酯溶性成分可能是其防治心肌血的物质基础。经文献研究，盐酸小檗碱具有对快速型室性心律失常具有良好的对抗作用；芍药苷明显降低垂体后叶素致心肌缺血大鼠T波变化的绝对值；明显缩小冠脉结扎致急性心肌梗死犬心肌梗具有抗心肌缺血作用［3，4］；丹参酮ⅡA对大鼠急性心肌缺血具有显著的保护作用，其机制与增加冠脉流量，抑制脂质过氧化和改善心肌能量代谢有关。丹参酮ⅡA及混合物对急性心肌缺血的作用优于丹酚酸B，尤其是对垂体后叶素所致的一过性心肌缺血［6］。故此，我们认为解毒通脉胶囊的工艺2、3具有保护心肌缺血作用，可能的物质基础是盐酸小檗碱，芍药苷和丹参酮ⅡA。下一步将通过实验研究解毒通脉胶囊防治心肌缺血的作用机制，为其开发利用提供具体参考。

［1］王燕凌，苗智慧，牛丽静，等.不同剂量黄连素对心肌缺血大鼠的抗氧化损伤作用［J］.河北中医，2010（02）：267－9.

［2］白彩艳.盐酸小檗碱对大鼠急慢性心肌缺血的保护作用［D］.吉林大学，2011：25.

［3］冯巧巧.中药单体化合物—芍药苷抗心肌缺血的作用及机制探讨［D］.山东大学，2006：28.

［4］冯巧巧，刘玉娥，周亚伟，等.芍药苷对冠脉结扎致实验性心肌梗死犬的保护作用［A］.中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集，2007.

［5］王守涛，史国兵，周 娟，等.丹参酮ⅡA静脉乳剂对大鼠急性心肌缺血的保护作用［J］.中国医院药学杂志，2007，（12）：1699－701.

［6］黄凯文，祝维峰，苏 宁，等.丹参酮ⅡA和丹酚酸B抗心脑缺血的比较研究［J］.中国医院用药评价与分析，2009，（06）：449－52.