薰衣草花茶水提物的抗氧化活性研究

李紫薇，张艺，张月梅，高翠

（伊犁师范学院化学与生物科学学院，新疆伊宁 835000）

薰衣草（Lavender），又名香草、灵香草，属于多年生半阴性亚灌木[1]，原产于地中海沿岸，是一种珍贵的香料作物[2]。薰衣草富含挥发油、香豆素、单宁、类黄酮[3]及多种对人体有重要保健作用的微量元素等[4]，可用于烹调、药用[5]、美容等[6]各方面，具有静心安神，镇定情绪，治疗失眠，减轻疲劳感，缓和神经痛等功效[7]。薰衣草花茶不加任何甜味物质就可产生甘甜的口感，还具有镇静、清凉、助消化、预防感冒等众多功效[8]。但目前关于温度对薰衣草花茶水提物抗氧化活性影响的研究未见文献报道。本试验以伊犁产薰衣草花茶水提物为研究对象，采用清除二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）、羟基自由基（OH·）、超氧阴离子自由基（O2-·）及抑制亚油酸过氧化等四种抗氧化能力的评价方法，对薰衣草花茶水提物的抗氧化活性进行初步研究，旨在为薰衣草花茶作为抗氧化、抗衰老保健食品的开发提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1，1－二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH·）：化成工业开发有限公司AR；亚油酸：天津大茂化学试剂厂，AR；芸香叶苷：上海国药集团化学试剂有限公司，AR；水杨酸：成都化学试剂厂，AR；焦性没食子酸：天津福晨化学试剂厂，AR；三羟甲基胺基甲烷：北京双环化学试剂厂，AR；抗坏血酸：天津光友精细化工研究所，AR；硫氰酸按：北京双环化学试剂厂，AR。本实验所用样品为伊犁产薰衣草。试验用水均为去离子水。

VOS-60A型真空干燥箱：上海施都凯仪器设备有限公司；FW-80型高速万能粉碎机：北京市永光明医疗仪器厂；KQ-250DB型数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；QYC系列全温培养摇床：上海新苗医疗器械制造有限公司；F2104N分析天平：上海仪器制造厂；723PC可见分光光度计：上海舜宇恒平科学仪

1.3.2 对亚油酸过氧化的抑制试验

在10 mL具比色管中分别加入1.50 mL 2.5%亚油酸，4.50 mL 40 mmol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0），0.75 mL无水乙醇，0.75 mL蒸馏水，0.50 mL样液（1.0 mg/mL），混合均匀，制得样液混合反应液，密封后于37℃恒温避光氧化。空白混合反应液以无水乙醇溶液代替样液，方法同上。每间隔24 h，在10 mL比色管中加入0.10 mL混合反应液、7.00 mL 75%乙醇、0.20 mL 30%硫氰酸胺、0.20 mL氯化亚铁溶液（20 mmol/L，以3.5%盐酸为溶剂），准确反应3 min后，以蒸馏水为空白，在484 nm测定吸光度At样品。在相同条件下用空白混合反应液代替样品混合反应液，测定吸光度值At空白，并按以下公式计算清除率：器有限公司；RE-52AA旋转蒸发仪、SHZ-Ⅲ型循环水真空泵：上海亚荣生化仪器厂。

1.2 薰衣草花茶水提物的制备

薰衣草花茶→干燥→粉碎→过筛（60目）→干花粉末→恒温浸提2 h（固液比1：15）→抽滤→旋转蒸发浓缩（45℃）→真空干燥（45℃）→粗提物。连续提取3次，合并提取物。浸提温度分别为 50、60、70、80、90 ℃。粗提物用蒸馏水稀释并定容，得样品供试液备用。

1.3 抗氧化性实验[9-10]

1.3.1 清除DPPH·的试验

精确吸取0.50 mL样品溶液（1.0 mg/mL）于10 mL比色管，加入3.5 mL 2×10-4mol/L的DPPH·溶液混合，摇匀后避光放置30min，以无水乙醇为参比，在517nm处的测吸光度值（Ax）。并测定0.50 mL样品溶液与3.50 mL乙醇的混合液的吸光值（Ax0）和3.50 mL 0.2 mmol/L DPPH·溶液与0.05 mL乙醇的吸光值（A0）。将以上数据代入下列公式计算其清除率。

式中：A0样品、A0空白分别为零时刻测定值。

1.3.3 清除OH·的试验

依次在10 mL比色管中加入1.00 mL 4.5 mmol/L FeSO4，加1.00 mL 4.5 mmol/L水杨酸-乙醇溶液，加1.00 mL样品溶液（1.0 mg/mL），最后加入1.00 mL 4.4 mmol/LH2O2。上述混合液在37℃水浴中反应0.5 h，在510 nm处测吸光度Ax；以蒸馏水代替样品溶液，同上述方法，测得A0。考虑到待测溶液本身的吸光值，以蒸馏水代替H2O2，测得溶液的本底吸收值Ax0；并按以下公式计算清除率：

1.3.4 清除O2-·的试验

在4.50 mLTris-HCl缓冲液（pH8.2）中，加入2.00 mL样品溶液，30℃恒温水浴30 min后。加入1.00 mL邻苯三酚（2 mmol/L），反应 5 min后，加入1.00 mL浓HCl。在420 nm处测定吸光度值，并按下式计算清除率。

式中：A0为4.50 mLTris-HCl+2.00 mL蒸馏水+1.00 mL邻苯三酚+1.00 mLHCl；Ax为 4.50 mLTris-HCl+2.00 mL不同浓度样品+1.00 mL邻苯三酚+1.00 mL HCl；Ax0为 4.50 mLTris-HCl+2.00 mL 不同浓度样品+1.00 mL蒸馏水+1.00 mLHCl。

2 结果与分析

2.1 薰衣草花茶水提物对DPPH·的清除作用

试液浓度为1.0 mg/mL时，试验考察了浸提温度（50、60、70、80、90 ℃）对薰衣草花茶水提物清除DPPH·作用的影响。按标“1.3.1”项，在517 nm处分别测定吸光度Ax、A0，计算清除率。结果如图1所示。

图1 浸提温度对清除DPPH·作用的影响Fig.1 The effects of extraction temperature on the DPPH·scavenging rate

由图1可见，在试验温度范围内，60℃提取物对DPPH·清除率最高，清除率为87.16%。

2.2 薰衣草花茶水提物抑制亚油酸过氧化作用

当试液浓度为10.0 mg/mL时，按标“1.3.2”项，在一周时间内，考察不同浸提温度薰衣草花茶水提物抑制亚油酸过氧化作用，结果见图2。

结果表明，薰衣草花茶水提物有较好的抗氧化活性。不同温度的水提物抑制亚油酸过氧化能力随时间的增加呈现下降趋势，在前三天变化幅度较大。低温下的提取物抑制亚油酸过氧化能力较高，其中70℃水提物抑制亚油酸过氧化作用最好。

图2 浸提温度对抑制亚油酸过氧化作用的影响Fig.2 The effects of extraction temperature on antioxidants of the linoleic acid

2.3 薰衣草花茶水提物对羟基自由基（OH·）的清除作用

当试液浓度为1.0 mg/mL时，试验考察不同浸提温度（50、60、70、80、90 ℃）对薰衣草花茶水提物清除OH·作用的影响。按标“1.3.3”项，在520 nm处分别测定吸光度Ax、Ax0、A0，计算清除率。结果如图3所示。

图3 浸提温度对清除OH·作用的影响Fig.3 The effects of extrected temperature on the OH·scavenging rate of the Lavender extracts

由图3可知，60℃水提物清除OH·作用最强。

2.4 薰衣草花茶水提物对超氧阴离子（O2-·）清除作用

当供试液浓度为1.0 mg/mL时，试验考察不同浸提温度（50、60、70、80、90 ℃）对薰衣草花茶水提物清除O2-·作用的影响。按标“1.3.4”项，在520 nm处分别测定吸光度Ax，A0，Ax0，依据公式计算清除率。结果如图4所示。

由图4可知，浸提温度越高，提取物对超氧阴离子清除能力越好，90℃的水体物效果最佳，清除率为35.519%。

3 结论

图4 浸提温度对清除O2-·作用的影响Fig.4 The effects of extrected temperature on the O2-·scavenging rate of the Lavender extracts

通过薰衣草花茶水提物清除DPPH·、超氧阴离子、羟基自由基作用的试验，并用亚油酸过氧化评价体系进一步验证，薰衣草花茶水提物具有良好的抗氧化活性。试验比较了不同浸提温度（50、60、70、80、90℃）对薰衣草花茶水提物抗氧化活性的影响。结果显示，60℃的水提物对DPPH·和OH·清除效果最好，70℃的水提物抑制亚油酸过氧化效果最佳。浸提温度越高，水提物对超氧阴离子的清除作用越强。抗氧化活性物质可以清除体内自由基，预防疾病，抵抗衰老，所以研究薰衣草花茶水提物抗氧化活性可为薰衣草作为抗氧化、抗衰老保健食品的开发提供理论参考。

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