银杏叶提取物对小鼠脑缺氧保护作用的实验研究

赵新超 马 飞 朴莲荀

延边大学药学院，吉林 延吉 133002

缺氧对机体是一种劣性刺激，可以影响机体各种代谢，特别是机体的氧化供能，最终导致机体的心、脑等主要器官由于能量供应不足而死亡[1]。银杏叶提取物含有丰富的黄酮类和萜内酯等活性成分，具有扩张血管、改善血管机能、促进血液循环和代谢、保护机体组织和抗氧化等作用[2]。通过采用常压密闭缺氧造成小鼠脑缺氧模型，研究银杏叶提取物对脑缺氧保护作用机制，为其临床应用提供理论依据。

1 材料

1.1 动物 清洁级昆明 (KM)种小鼠，雌雄兼用，体重(20±2)g，由延边大学实验动物中心提供 (许可证号SCXK吉2011－007)。

1.2 药品及试剂 银杏叶提取物由延边大学医药研究中心提供批号:20110702。丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO)测定试剂盒 (南京建成生物工程研究所批号分别为:20120401;20120327)。其余试剂均为分析纯。

1.3 仪器设备 Backman高速冷冻离心机 (德国);SUNRISE酶标仪 (上海金鸳医疗器械有限公司)。

2 方法

2.1 常压耐缺氧实验 小鼠24只，随机分为3组:生理盐水组、银杏提取物大、小剂量组，每组8只，连续灌胃14天，每日1次。每组于末次给药后1h，将小鼠置于放入10g钠石灰的125ml广口瓶中密闭，造成小鼠脑缺氧模型，观察各组小鼠存活时间。

2.2 生化指标的测定 另取32只小鼠随机分为4组，空白对照组，生理盐水组，银杏提取物大 (100mg/kg)、小(50mg/kg)剂量组，每组8只。除了空白组外，灌胃给药或同体积生理盐水，连续灌胃14天，每天1次。于末次给药后1h后，小鼠置于盛有10g钠石灰的125ml广口瓶中，密闭缺氧10min后，取出小鼠立即取血处死，分离血清备用。按试剂盒说明书方法测定血清中的MDA、NO水平。

2.3 统计学处理 以SPSS17.0软件系统进行数据统计分析，所有实验数据用表示，采用t检验进行两组间差异比较。P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 对小鼠常压密闭缺氧存活时间的影响 由表1可知，不同剂量的银杏叶提取物均能显著延长小鼠在密闭缺氧条件下的存活时间，与生理盐水组比较具有显著性差异 (P＜0.05;P ＜0.01)。

表1 银杏叶提取物对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响(n=8，±s)

表1 银杏叶提取物对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响(n=8，±s)

注:与生理盐水组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

组别 剂量 (mg/kg) 存活时间 (min)延长率 (%)25.78±3.15 －银杏提取物组 50 29.63±3.85* 14.93 100 32.25±4.17＊＊生理盐水组 －25.10

3.2 对小鼠脑组织中MDA、NO水平的影响 由表2可知，与正常空白对照组相比，生理盐水组MDA、NO的水平显著增加 (P＜0.01)。不同剂量的银杏叶提取物与生理盐水组相比，均能抑制密闭缺氧小鼠血清中MDA、NO水平，差异有统计学意义 (P＜0.05)。±s)

表2 银杏提取物对小鼠血清中MDA、NO水平的影响(n﹦8，

4 讨论

常压耐缺氧实验为抗整体小鼠缺氧实验，是筛选治疗心脑组织因缺血缺氧引起功能障碍的常用方法之一。常压密闭缺氧最终导致小鼠心脏和脑缺氧而死亡实验结果显示:银杏叶提取物能显著提高小鼠的常压耐缺氧存活时间，说明银杏叶提取物对脑缺氧有很好的改善作用。

自由基作用于脂质发生过氧化反应，MDA是过氧化脂质代谢产物，生物体内MDA含量越高，表明氧自由基损伤越重，对脏器、组织细胞的毒性越大[3]。实验结果显示，小鼠常压密闭缺氧条件下血清中MDA含量与正常空白对照组比较差异显著，说明小鼠常压密闭缺氧条件下体内脂质过氧化物的形成明显增加。而给予银杏叶提取物后能够明显降低血清中MDA水平，表明银杏叶可显著降低机体中脂质过氧化反应。

另外，NO作为一种神经递质在缺氧缺血性脑损伤中日益受到重视。NO既是体内一种不可缺少的信息分子，又具有细胞毒作用，可以通过毒性作用、自由基损伤而加重脑缺氧缺血性脑损伤[4]。实验结果显示，小鼠常压密闭缺氧条件下小鼠血清中NO含量显著高于空白对照组，说明小鼠常压密闭缺氧条件下体内NO合成明显增加，而银杏叶提取物后能够明显降低血清中NO水平，说明银杏叶能有效的抑制小鼠体内NO合成，减轻对脏器、组织细胞的毒性，从而发挥对脑缺氧的保护作用。

[1]程玉芳，柳巨雄，栾新红，等.中药复方制剂对大鼠耐缺氧能力的影响及其作用机制的研究[J].中兽医医药杂志，2003，22(6):3－5.

[2]陈仕奇，陈龙浩，蒋琳兰.银杏叶提取物和茶多酚联用对缺氧环境中内皮细胞的影响[J].安徽农业科学，2012，40(23):11549－11550.

[3]Dillioglugil MO，Kira HM，Demira C，et al.Effect of pentylenetetrazole and sound stimulation induced single and repeated convulsive seizures on the MDA，GSH and NO levels，and SOD activities in rat liver and kidney tissues [J].Brain Research Bulletin，2010，83(2):356－359.

[4]王建平，苏怡凡，陈虹.一氧化氮、一氧化氮合酶、丙二醛在新生儿缺氧缺血性脑病中的作用[J].实用儿科临床杂志，2003，18(8):627－628.