WWOX和 P53在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

王凤玲,张广萍,张亚玲,孙云晖

(佳木斯大学附属第一医院,黑龙江 佳木斯 154003)

WWOX基因是由 Bednarek等在2000年发现的一个新的脆性位点(CFSs)基因。有研究指出,WWOX蛋白主要位于线粒体。WWOX受多种凋亡应激因素影响,其作用可造成线粒体通透性改变,WWOX蛋白合成增加,同时这些凋亡应激因素还能使得 WW结构域中的 Try33磷酸化,WWOX蛋白发生转位[2],上调 P53,下调 Bcl-2、Bcl-xl,增强 TRADD介导的细胞死亡及 TN F介导的细胞毒性。由此可知 WWOX基因可作为一种促凋亡蛋白发挥作用,它与 P53共同发挥作用,且在介导凋亡的过程中能产生协同作用,二者是介导细胞凋亡的配偶体。

国内外文献报道食管癌,鼻炎癌,卵巢癌,胃癌等的肿瘤中均有 WWOX及 P53的表达,但在肺癌组织中的表达报道较少,故本课题应用免疫组化方法检测 WWOX及 P53在非小细胞肺癌中的表达,通过探讨其在肺癌中的表达情况,为肺癌诊断、治疗、判断预后提供有意义的生物学指标。

1 材料与方法

1.1 标本来源

实验组:取佳大附属第一医院胸心外科手术切除并经病理证实为肺癌的病理标本40例,所有患者术前均未接受化疗、放疗和其他治疗。临床分期采用美国癌症分类委员会(AJCC)和国际抗癌联盟(UICC)2002年制定的 TNM分期。

对照组:取同组病例距癌组织边缘5cm以上的正常肺组织作为对照组。

1.2 试剂

①兔抗人 WWOX多克隆抗体;②兔抗人 P53单克隆抗体;③即用型 UltraSensitiveTM S-P试剂盒浓缩型;④ DAB试剂盒;⑤磷酸盐缓冲液 PBS(0.01mol/L,pH7.2～7.4)粉剂。试剂均购自美国美国 Santa Cruz公司。

1.3 实验方法

肺癌标本经固定、常规石蜡包埋后切片,供常规 HE染色和免疫组织化学染色。WWOX工作液配比浓度为1：150,P53工作液配比浓度为1：100。各步骤严格按照检测试剂盒说明进行。

1.4 结果判断标准

两种蛋白染色阳性均为黄色至棕黄色颗粒,WWOX阳性表达定位于细胞胞质 ,P53定位于细胞核。P53的判断标准:观察10个高倍视野(10×40)内细胞计数,视野内阳性细胞数占总细胞数在25%以下者为阴性,介于25%～50%为弱阳性,50%以上为强阳性。WWOX的判断标准:①按染色强度计分:无着色为0分,淡黄色为1分 ,棕黄色为 2分。②按阳性细胞百分比计分:着色细胞 ＜10%为 0分,10%～39%为 1分,40%～69%为 2分,＞70%为3分。③将两者相加总计分:0分为阴性,1～ 3分为弱阳性,4分以上为强阳性。

1.5 统计学处理

应用 SPSS 18.0统计软件,采用i2检验,等级分析采用Mann-Whitney非参数检验,P ＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 WWOX蛋白在 NSCLC组织和正常肺组织中的表达

WWOX在实验组中失表达者为 30例 ,失表达率为75%,在对照组中失表达者为20例,失表达率为 50%,WWOX在实验组中的失表达率显著高于对照组 (P＜0.05)。

2.2 P53蛋白在 N SCLC组织和正常肺组织中的表达情况

P53在实验组中阳性表达为23例 ,阳性表达率 57.5%,在对照组中阳性表达为8例,阳性表达率为 20%,P53在实验组中的阳性表达率显著高于对照组 (P＜0.01)。

表1 WWOX基因的表达与各临床病理因素的关系

表2 P53的表达与各临床病理因素的关系

2.3 WWOX蛋白和 P53蛋白在 NSCLC组织中的表达与NSCLC各临床病理因素的关系

WWOX的表达与病理类型、细胞分化、淋巴结转移相关(P ＜0.05)。P53的表达与组织分化、淋巴结转移、临床分期相关 (P ＜ 0.05)。 (见表 1～2)

2.4 WWOX及 P53在 N SCLC中表达的相关性分析

WWOX与 P53表达负相关,两组相关系数为-0.49。(见表 3,图 1)

表3 WWOX及 P53在 N SCLC中表达的相关性分析

图1 WWOX阳性表达、阴性表达与 P53阳性表达的关系

3 讨论

通过我们的实验发现 WWOX的表达缺失与非小细胞肺癌有关,癌旁正常组织中 WWOX的失表达率明显低于NSCLC中 WWOX蛋白的失表达率,因此我们认为 WWOX蛋白有可能参与调控肺癌的发生发展。

近年来人们对 P53的结构及功能进行了更深入的探讨,随着越来越多的实验研究及临床研究,人们对这种基因有了更深刻的了解,突变型的 P53[3]具有抑制细胞凋亡的特性,且其性质稳定,易被免疫组化方法检出,故常被应用于各种实验研究。本实验也选用了突变型 P53作为检测指标,实验证明在 40例 NSCLC组织中,23例癌细胞 P53呈阳性表达 ,此外本实验还发现,P53的表达与组织分化、临床分期、淋巴结转移密切相关。

WWOX对 P53的作用可表现为结合稳定性 P53,WWOX作用于 P53可以控制 P53的活性、结构的变化、核转录等,抑制凋亡的发生,我们的实验的结果显示 WWOX、P53均与组织分化及淋巴结转移有关,也进一步证实了这一点,因此本次实验结果显示了 WWOX蛋白与 P53蛋白可作为肺癌的诊断和判断预后的重要依据。但以上二种基因之间相互作用的具体机制有待于进一步研究。

[1]Bednarek AK,Laflin KJ,Daniel RL,et al.WWOX,a nov el WW domain-containing protein mapping to human chromosome16q23.3-24.1,aregion frequently affected in breast cancer[J].Cancer Res,2000,60:2140-2145

[2]Ludes-Meyers JH,Bednarek AK,Popescu NC,et al.WWOX,the common chromosomal fra-gile site,FRA16D,Cancer Gene[J].Cytogenetic Genome Res,2003,100(1-4):101-110

[3]Tokino T,Nakamura Y.The role of p53-target genes in human cancer[J].Oncology/Hematology,2000,33(1):1-6