来氟米特对阿霉素肾病大鼠尿、肾脏 VEGF表达的影响

邹艳红,迟瑛娇,赵塔娜,聂 磊,王 禹,王李鸣,赵冬梅,李春玉

(佳木斯大学附属第一医院儿科,黑龙江 佳木斯 154003)

来氟米特(lefunomide,LEF)是一种新型免疫抑制剂 ,已广泛应用于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等其他自身免疫性病、肾小球疾病及移植后排异反应等的治疗[1～2],并取得了良好的疗效。部分临床用药证实来氟米特确有能降低NS患者大量蛋白尿的作用。可以减轻肾脏病变程度及延缓NS向终末期进展[3],但其具体作用机制尚不明确。故本实验制备阿霉素肾病大鼠模型,观察肾病大鼠尿蛋白量和 VEGF的表达的关系,以及来氟米特对其可能的保护机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物和分组

健康雄性 Wistar大鼠 56只,体重160～180g,两次尿蛋白定性试验阴性,随机分为正常组对照 A组(8只),肾病模型组(48只),(1)正常组:大鼠一次性尾静脉注射 5mg/kg生理盐水;(2)肾病模型组:大鼠一次性尾静脉注射5mg/kg阿霉素;注射后分笼喂养,自由进食、进水。两周末肾病组大鼠出现周身浮肿,大量蛋白尿,低蛋白血症,伴高胆固醇血症 ,光镜下肾小球基本正常。成功制作了微小病变型肾病模型。阿霉素注射后两周末,将模型组大鼠随机分为非治疗组(B组)和治疗组(C组 )。C组大鼠第 3周末起给予来氟米特10mg˙kg-1˙ d-1灌胃给药,B组同时给予等量蒸馏水。所有大鼠均饲养在代谢笼中,给予标准饲料和水,所有模型组大鼠处死前均无死亡。分别于阿霉素注射后第2周、4周、6周处死模型治疗组、模型非治疗组及对照组大鼠,留取大鼠尿、肾脏。

1.2 实验方法

采用酶免(ELISA)方法测定阿霉素肾病大鼠尿、肾脏VEGF的水平,并做相关分析。试剂盒购自于武汉博士德生物工程有限公司,考马斯亮兰法测定24h尿蛋白量。

1.3 统计学处理

采用 SPSS11.0进行统计学处理,组间比较采用方差分析,方差不齐时采用秩和检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况观察

正常对照组大鼠基本情况良好。肾病组注射阿霉素3d,大部分大鼠出现轻度腹泻,活动减少,卷缩弓背,至第7天腹泻停止。注射阿霉素2周后:肾病组大鼠精神烦躁 ,具有攻击性。背毛蓬松,失去光泽,颜面及阴囊水肿,体重较正常组有所减轻,进食量及饮水量略减少。注射阿霉素 4周后:肾病组大鼠精神不振,活动迟缓,进食及饮水量明显减少,体重减轻,被毛竖乱无光泽,尿量减少 ,颜面及足部 ,阴囊明显水肿,腹部膨胧明显,软组织水肿。部分出现腹水。

2.2 24h尿蛋白检测结果

见表1。

表1 实验大鼠24h尿蛋白定量 (±s,mg/24h,n=8)

表1 实验大鼠24h尿蛋白定量 (±s,mg/24h,n=8)

与 A组比较,*P ＜0.01;与 B组比较,●P＜0.01。

组别 2周 4周 6周A组 5.82± 1.16 5.97± 1.18 5.93± 1.27 B组 148.17± 9.89* 248.01± 15.92* 440.10± 62.10*C组 151.10±9.95*● 188.01±18.12*● 320.07±66.11* ●

表2 各组两周末大鼠血清胆固醇、白蛋白的变化 (±s,n=8)

表2 各组两周末大鼠血清胆固醇、白蛋白的变化 (±s,n=8)

与 A组比较,*P ＜ 0.01;与 B组比较,●P ＜ 0.01。

组别 白蛋白(g/L) 胆固醇(mmol/L)A组 33.16± 2.31 1.63± 0.14 B组 29.94± 2.16* 2.92± 0.15*C组 28.09±1.69*● 2.84±0.39*●

表3 各组大鼠尿液 VEGF的含量(±s,pg/mL,n=8)

表3 各组大鼠尿液 VEGF的含量(±s,pg/mL,n=8)

与 A组比较,*P ＜0.01;与 B组比较,●P ＜0.01。

组别 2周 4周 6周A组 4.23± 0.66 4.47± 0.59 4.38± 0.41 B组 15.88± 3.21* 27.26± 5.24* 39.22± 1.32*C组 16.21+2.10● 18.18+3.09● 21.26+ 2.17●

表4 各组大鼠肾脏组织中 VEGF的含量 (±s,pg/mL,n=8)

表4 各组大鼠肾脏组织中 VEGF的含量 (±s,pg/mL,n=8)

组别 2周 4周 6周A组 3.34± 0.40 3.30± 0.50 3.35± 0.99 B组 12.17± 3.51* 21.05± 4.16* 31.05± 4.18*C组 11.21±2.10● 13.18± 1.73● 14.26± 2.78●

2.3 相关分析

阿霉素肾病大鼠尿液、肾脏 VEGF的含量与24h尿蛋白呈正相关 (r= 0.81;0.63;P＜0.01)。

3 讨论

肾病综合征(NS)是儿童常见的肾脏疾病。它的治疗首选糖皮质激素,据统计大约85%患儿可有复发,若反复复发最终将进展为终末期肾脏病[4]。大量蛋白尿是促进肾小球硬化、加速肾功能损害的主要原因之一,故对于 NS治疗上宜以降低蛋白尿、减缓肾功能恶化为主。VEGF是调节血管通透性的重要因子[5],近年研究发现,VEGF的异常表达与某些肾脏疾病密切相关 ,且与24h蛋白尿量呈正相关[6]。可能是VEGF减少肾小球基底膜(GBM)阴离子数目,还可诱导内皮细胞小窗的形成及细胞间连接打开来调节肾小球的通透性[7],从而出现蛋白尿。本实验也证实 VEGF与尿蛋白呈正相关。说明 VEGF在 N S发生发展过程中可能起到一定的致病作用。来氟米特是一个具有抗增殖活性的异恶唑类新型免疫抑制剂,近年来在免疫性疾病领域应用范围不断拓展,在难治性肾病综合征的治疗中取得了良好的疗效。本研究发现C组比 B组的大鼠 24 h尿蛋白排泄减少,提示 LEF可以减少尿蛋白排泄,减轻肾脏改变,延缓 NS进展的作用。总之,VEGF在 NS的发生及发展中起到一定的致病作用。本研究结果表明来氟米特对 N S模型的 VEGF表达具有一定的调节作用,可以减轻肾脏病变程度及延缓 NS发展成肾功能衰竭,但其具体作用机制有待于进一步研究。

[1]Pinto P,Dougados M.Leflunomide in clinical practice[J].Acta Reumatol Port,2006,31(3):215-224

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[3]杨绍基,任红.传染病学[M].第7版.北京:人民卫生出版社,2008

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[5]刘莉,张鹏霞,魏晓东.VEGF与白血病关系的研究进展 [J].黑龙江医药科学,2007,30(2):77-78

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