北沙参多糖对甲亢型阴虚小鼠的免疫调节作用

荣立新，鲁 爽，刘咏梅

(中国中医科学院广安门医院，北京 100053)

北沙参为伞形科植物珊瑚菜(Glehnia littoralis Fr.Schmidt exMiq.)的干燥根，有养阴清肺、益胃生津的功效。研究表明，多糖是其中主要成分，可增强机体免疫功能［1，2］。本实验观察了北沙参粗多糖(GLP)［1］对阴虚小鼠的免疫调节现象，以揭示其滋阴作用的免疫调节机制，并进一步探讨中药的阴阳平衡理论。

1 材料

小牛血清(杭州四季青生物材料公司)，甲状腺素(莱阳生物化学制药厂)，利血平(上海医科大学红旗制药厂)，PRMI 1640培养液(美国 Gibco公司)，所用试剂均为分析纯。J2-MC BECKMAN高速冷冻离心机(Bechman公司)，S22PC分光光度计(上海棱光技术有限公司)，HHS型电热恒温水浴锅(江苏金坛市宏凯仪器厂)。昆明种雄性小鼠，6～8周龄，体质量20±2g(潍坊医学院实验动物中心，动物合格证号鲁动环字200007001号)。

2 方法与结果

2.1 GLP的提取

称取加工后的北沙参根250 g，加蒸馏水1500 ml，浸泡30 min，回流提取5 h，抽滤、滤液加95%乙醇至含醇量达50%，静置过夜，倾出上清液，离心5 min，用50%乙醇洗涤(100 ml×3)，50℃烘箱烘干，过30目筛，得乳白色GLP粗制品［3］。

将制得的GLP粗品加水溶解用三氯乙酸法去游离蛋白质，然后置透析袋透析2 d，换水2次去小分子杂质，将沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤、离心，置50℃烘箱烘干，过30目筛，得白色GLP。

2.2 GLP的含量测定

用硫酸-蒽酮法测得GLP含量为63.88%。

2.3 动物分组及给药

小鼠40只随机分为5组，每组8只，分别为正常对照组［生理盐水20 ml/(kg·d)］、模型对照组、GLP高剂量组［800 mg/(kg·d)］、GLP 中剂量组［600mg/(kg·d)］、GLP 低剂量组［400 mg/(kg·d)］。每日上午除正常对照组灌服生理盐水外，其余各组均灌胃给予甲状腺片150 mg/kg和利血平1 mg/kg，下午GLP各剂量组分别灌胃给予受试药物，连续6d，各组动物实验前后各称体质量以计算体质量增加值并观察其外观变化。

2.4 统计学方法

统计学方法采取两均数比较t检验。

2.5 GLP滋阴作用的整体效应观察

小鼠给予甲状腺素和利血平造模4d后，开始出现体质量减轻、身体瘦长、躁动不安，有的出现两眼不张、行动迟缓甚至死亡。GLP各剂量组动物各种虚象较轻;正常对照组动物外观和行为均正常。

表1显示，模型组动物体质量增加值明显低于正常对照组，GLP各剂量组的体质量增加显著高于模型组(P＜0.01，P＜0.05)，表明阴虚动物体质量降低，而GLP能显著增加其体质量且呈剂量关系，其中GLP高剂量组接近正常水平。

2.6 GLP对模型小鼠脾脏NK杀伤活力影响

2.7 GLP对模型小鼠T淋巴细胞转化的影响

表1显示，将各组小鼠给药后第7天处死，取脾脏组织制备脾细胞悬液，参照文献［4］采用MTT比色方法检测各组小鼠刺激指数(SI)。结果小鼠造模后，其刺激指数明显降低(P＜0.01)，GLP高、中剂量组对阴虚小鼠的脾脏T细胞转化功能均有显著增强作用(P＜0.01，P＜0.05)，接近正常水平。

2.8 GLP对模型小鼠血清抗绵阳红细胞抗体IgM，IgG含量的影响

将各组小鼠给药后第7天处死，取小鼠血清，参照文献［4］采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测抗绵羊红细胞抗体IgM、IgG的含量。

表1显示，阴虚模型小鼠血清IgM，IgG抗体水平与正常组比较明显降低(P＜0.05)，北沙参多糖的中剂量和低剂量组对IgM抗体的生成有显著增强作用(P＜0.05)，北沙参多糖高剂量组和低剂量组则对IgG抗体的产生有显著增强作用(P＜0.05)。

表1显示，将各组实验动物于给药后第7天处死，取脾脏组织制备脾细胞悬液，参照文献［4］采用MTT比色法检测各组小鼠NK细胞对靶细胞的杀伤率(%)。结果模型小鼠脾脏NK细胞杀伤活力明显低于正常对照组(P＜0.01)，GLP高剂量组可显著提高阴虚小鼠的NK杀伤率(P＜0.05)，接近正常值。

表1GLP干预对各组小鼠体质量变化和各项免疫功能指标的影响(±s)

表1GLP干预对各组小鼠体质量变化和各项免疫功能指标的影响(±s)

注:与模型组比较:＊＊P ＜0.01，*P＜0.05

组别 例数 给药剂量/(mg/kg)体质量增加值/g NK细胞杀伤率(%)T细胞转化指数 IgM(lgR) IgG(lgR)正 常 对 照 组 8 5.25±1.04＊＊ 30.01±0.05＊＊ 2.30±0.58＊＊ 4.10±0.02* 2.20±0.02*阴 虚 模 型 组 8 2.57±1.07 18.73±0.03 1.08±0.15 3.60±0.04 1.80±0.02模型 +GLP高剂量组 7 800 4.71±1.11＊＊ 27.52±0.44＊＊ 1.67±0.36＊＊ 4.05±0.03 2.20±0.3*模型 +GLP中剂量组 8 600 3.75±0.89* 22.10±0.09 1.46±0.32＊＊ 3.35±0.05* 1.95±0.05模型 +GLP低剂量组 7 400 3.43±1.40 20.47±0.17 1.03±0.18 3.15±0.03* 2.00±0.04*

3 讨论

北沙参属常用补阴药，多用于阴虚肺热等症，具有补虚扶正祛邪的功效。文献记载北沙参可增强细胞免疫、体液免疫［6～8］。采用甲状腺素和利血平诱导建立小鼠甲亢阴虚证模型，具有方法简便、成功率高、死亡率低、稳定性强、重复性好等优点，是深入研究阴虚病因机理的常用动物模型制作方法［9，10］。本实验对小鼠造模后，发现其出现体质量减轻、身体瘦长、躁动不安等现象，符合中医阴虚证的临床表现，说明本实验塑造的阴虚动物模型是成功的。同时发现，动物处于阴虚状态时，体内非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能指标均有不同程度的降低，表明由甲状腺素和利血平所诱发引起的小鼠阴虚症的发病机制，与机体免疫功能有着内在、直接的联系，由阴虚引起的各项病理变化，有可能是通过降低机体的免疫功能而引发的。本研究结果显示，GLP可显著提高阴虚小鼠的NK杀伤率(P＜0.05)和血清IgM和IgG含量，对脾脏T淋巴细胞转化功能均有显著促进作用(P＜0.01或P＜0.05)。表明GLP对阴虚小鼠的非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能均有显著增强作用。提示北沙参对阴虚症的治疗作用，可能与其中的多糖成分参与调节机体的免疫状态，从而使失调的功能恢复至正常生理平衡状态有关。其具体调节作用机制及其他成分对免疫功能是否也有调节作用，尚有待进一步研究［11］。

［1］石俊英，李宝国，牟彩萍.山东地产药材北沙参多糖含量测定［J］.山东中医药大学学报，2002，26(2):139-142.

［2］谭允育，康娟娟，王娟娟.沙参对正常小鼠免疫功能影响的实验研究［J］.北京中医药大学学报，1999，22(6):39-44.

［3］屠鹏飞，徐国钧，徐珞珊，等.沙参类的研究Ⅲ.多糖的含量测定［J］.中草药，1992，23(7):355-366.

［4］司传平.医学免疫学实验［M］.北京:人民卫生出版社，1999:7-53.

［5］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海:上海科学技术出版社，1991:272.

［6］李仪奎，姜名瑛.中药药理学［M］.北京:中国中医药出版社，1992:180.

［7］吕方军，叶国华，许一平，等.北沙参茎叶提取液对免疫抑制小鼠免疫功能的影响［J］.时珍国医国药，2012，23(4):936-937.

［8］冯蕾，杨宪勇，冀海伟，等.北沙参超临界二氧化碳萃取物对免疫抑制小鼠免疫功能的影响及成分分析［J］.中国医院药学杂志，2010，30(20):1740-1742.

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［10］王祎媛，侯连兵，蔡鸿福，等.甲状腺素和利血平诱导小鼠甲亢阴虚证模型的制备［J］.药物研究，2010，19(23):19-20.

［11］刘咏梅，刘波，王金凤，等.北沙参粗多糖的提取及对阴虚小鼠的免疫调节作用［J］.中国生化药物杂志，2005，7:224-225.