松花粉预防和延缓腮腺组织衰老IGF-1在导管细胞中的表达*

刘红艳，张 晗，孙秀娟，李艳杰，王春艳，颜 勇

(1.承德医学院附属医院，河北 承德 067000 2.河北省承德市中心医院，河北 承德 067000 3.承德医学院，河北 承德 067000)

我国已步入老龄化社会，60岁以上的老龄人今年 已达1.85亿，明年将突破2亿。延年益寿，抗衰老提高老年人的生活质量迫在眉睫。既往抗衰老的研究多集中在心、脑、血管方面，在眼、生殖系统方面也多见报道［1，2］。但有关松花粉预防和延缓腮腺衰老作用的研究国内甚少。本实验应用不同剂量松花粉，对D－半乳糖所致亚急性衰老大鼠腮腺组织IGF－1的表达进行研究，观察松花粉对衰老大鼠腮腺功能的影响，探讨松花粉预防和延缓腮腺组织衰老作用的机制，为筛选抗腮腺衰老中药提供实验依据。

1 资料和方法

1.1 实验动物及分组：选清洁级8周龄雄性SD大鼠90只(由北京大学医学实验动物科学部提供)。体重180－220g，随机分成9组，正常组(10只);松花粉预防组(中、低剂量组各10只);模型组(10只)，松花粉延缓衰老组(高、中、低剂量组各10只)，阴性对照组(10只)，VE阳性对照组(10只)。

1.2 方 法

1.2.1 药品与试剂：松花粉购于中国新时代集团，D－半乳糖购于北京化学试剂公司，IGF－1检测试剂盒购于北京中杉金桥生物有限公司。

1.2.2 模型建立：SD大鼠按200mg·kg－1·d－1腹腔注射D－半乳糖(用生理盐水配成5%的溶液)，除正常组外，其余各组均连续用药50d，每天1次，制备亚急性衰老动物模型。

1.2.3 用药方法：松花粉用1%羧甲基纤维素钠稀释，高、中、低剂量分别按1400、700、350 mg·kg－1·d－1灌胃，阳性对照组用维生素E按35 mg·kg－1·d－1灌胃给药。预防组在注射D－半乳糖的同时灌胃松花粉，连续50d，每日1次。延缓衰老组、阳性对照组、阴性对照组大鼠在造模成功后每天灌胃松花粉、维生素E和生理盐水，连续50d，每日1次。

1.2.4 IGF－1表达的检测：将正确取材常规固定、包埋的腮腺组织块连续切片，常规做免疫组织化学染色(SP法)，显微镜下观察。结果判定：细胞胞浆染成棕黄色粗颗粒或细颗粒弥散分布为阳性反应细胞。定量数据处理：用图像分析系统进行细胞计数，每个标本检查3张切片，每张切片检查10个高倍视野，随机选取组织结构保存较好的部位，每个视野计数阳性细胞数和阴性细胞数，计算免疫阳性细胞的百分比。

1.3 统计学处理：将IGF－1检测结果建立数据库，用SPSS统计软件进行统计学处理。用t检验和q检验进行分析。

2 结果

IGF－1的表达：模型组表达量明显减少，与正常组相比有显著性差异(P＜0.01)，与阴性对照组、松花粉延缓衰老高剂量组接近(P＞0.05)，而松花粉预防中剂量组和松花粉延缓衰老中、低剂量组IGF－1的表达均明显增高(P＜0.01)(图1，2，3)其中松花粉预防中剂量组表达效果最显著。松花粉延缓衰老中剂量组的效果又好于延缓衰老高、低剂量组、VE阳性对照组(P＜0.05)。见表1。

表1 实验组大鼠腮腺IGF-1在导管细胞中的表达(±s，n=10)

表1 实验组大鼠腮腺IGF-1在导管细胞中的表达(±s，n=10)

与模型组比较：1)P＜0.01，2)P＞0.05;与预防中剂量组比较：3)P＜0.01，与延缓衰老中剂量组比较4)P＜0.05

组别 IGF－1阳性细胞百分率(%)正常组 30.11±2.151)模型组 6.43±1.80预防低剂量组 28.61±3.121)3)预防中剂量组 58.39±2.721)3)延缓衰老低剂量组 26.52±1.871)3)4)延缓衰老中剂量组 40.34±2.241)3)4)延缓衰老高剂量组 15.85±3.182)4)阳性对照组 23.97±1.75 4)阴性对照组 12.19±1.362)

图1 预防中剂量组IGF－1的表达(200×)

图2 延缓衰老低剂量组IGF－1的表达(200×)

图3 延缓衰老中剂量组IGF－1的表达(200×)

图1－图4显示：在同一高倍镜(200×)下，松花粉预防中剂量组、松花粉延缓衰老组(低、中、高剂量)IGF－1在腮腺导管细胞中的表达情况。其中松花粉预防中剂量组IGF－1表达阳性率最高，其次是松花粉延缓衰老中剂量组、松花粉延缓衰老低剂量组、松花粉延缓衰老高剂量组。

图4 延缓衰老高剂量组IGF－1的表达(200×)

3 讨论

衰老模型的选择：本研究依照刘学丽［3］等报道对SD大鼠以腹腔注射方式给药，并应用D－半乳糖成功建立了D－半乳糖诱发的亚急性衰老动物模型［4］，使得各实验组同等起始，具有良好的可比性，实验结果更可靠。

松花粉的抗衰老作用：松花粉药名松黄，作为传统医药宝库中的传统药材，在古代文献中早有记载。松花粉含有20种氨基酸(8种人体必需氨基酸)，14种维生素，30种矿物质等，数量达200余种。有研究报道松花粉能够有效降低血脂，促进锌的吸收利用［5］;松花粉作用于人肺成纤维细胞能明显促进细胞群体倍增水平，降低细胞死亡数目［6］。此外Giovannini［7］等研究显示，增龄可使血液中IGF－1浓度降低。健康的老年人血液中IGF－1水平较年轻人低30%－40%。

本研究经观察各实验组大鼠腮腺IGF－1在导管细胞中的表达情况，用免疫组织化学方法(SP法)证实大鼠腮腺组织IGF－1广泛表达，阳性产物位于腮腺导管细胞的胞浆中。结果表明：松花粉预防用药的效果优势明显，其中预防中剂量组效果最佳;松花粉延缓衰老中剂量组的效果明显好于延缓衰老高、低剂量组、VE阳性对照组，其中松花粉延缓衰老高剂量组效果最差。本研究提示松花粉能提高腮腺导管细胞IGF－1的表达，证实松花粉能促进腮腺导管细胞分泌IGF－1，对预防和延缓腮腺组织衰老具有调节作用;针对松花粉抗衰老预防用药，临床我们提倡应用中剂量为佳。

［1］ 吴赛珠，谭家余，周忠江，等.性激素通过影响血脂、细胞免疫功能及氧化/抗氧化系统影响衰老［J］.岭南心血管病杂志，2004，10(1)：10－16.

［2］ 牛嗣云，庞晓静，陈龙，等.松花粉对亚急性衰老模型大鼠抗衰老作用的实验研究［J］.中国老年学杂志，2005，25(12)：1504－1506.

［3］ 刘学丽，朱延勤，潘伟娜，等.对大鼠半乳糖性白内障实验模型的探讨［J］.北京实验动物科学与管理，1994，11(2)：2－3.

［4］ 顾以芍.实验性D－半乳糖诱发动物白内障造膜的探讨［J］.徐州医学院学报，1987，(1)：12－16.

［5］ 赵霖，鲍善芬，U Eidelsbutg，等.松花粉对缺锌幼鼠营养作用的实验研究［J］.营养学报，2000，22(1)：14－17.

［6］ 赵立新，喻陆.松花粉对人肺成纤维细胞增殖活性影响的实验研究［J］.东南大学学报，2004，23(2)：79－81.

［7］ Giovannini S，Marzetti E，Borst SE，et al.Modulation of GH/IGF－1axis：Potential strategies to counteract sarcopenia in older adults［J］.Mech Ageing Dev，2008，129(10)：593.