不同佐剂对鸡新城疫疫苗免疫调节作用的试验

2013-08-16邢艳艳河南省汤阴县畜牧兽医总站456150

山东畜牧兽医 2013年4期

邢艳艳（河南省汤阴县畜牧兽医总站 456150）

鸡新城疫是我国家禽的头号疫病。从80年代随着生物学的兴起，在传统的灭活苗和弱毒苗的基础上又研究开发出各种各样的基因工程疫苗，如亚单位疫苗、核酸疫苗、肽疫苗，这些疫苗在一定程度上克服了灭活疫苗免疫力弱和弱毒苗具有感染的危险[1,2]。世界上有些国家和我国部分省市坚持只用弱毒疫苗和油乳剂灭活苗，主要的理由是怕散毒，协同调节机体的先天性防御反应与获得性免疫反应和其他一些特征[3]。

人们一直寻找适合应用于畜禽的免疫增效剂，生物活性多糖是一种广谱的免疫增强剂，具有抗感染、抗衰老及抗肿瘤等作用[4]。甲壳素又称甲壳质，是自然界中产量仅次于纤维素的天然多糖，与葡萄糖或纤维素相比，甲壳素的生物活性来得更高，因此其主体结构与葡萄糖分子相近，其整体结构又与植物纤维素相似，具有支持及保护有机生命体的作用，甲壳素还能提高巨噬细胞(Mφ)的吞噬能力，促进抗体生成，抑制肿瘤细胞的生长[5]。本项目试图将甲壳素与氢氧化铝胶和蜂胶对鸡新城疫(ND)免疫应答的影响进行比较，从中筛选出适宜，有效的免疫增强剂，为应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂及仪器甲壳素(山东奥康生物科技公司)；鸡新城疫疫苗(吉林省生物制品厂2007 062208)；氢氧化铝胶和蜂胶、鸡新城疫甲壳素疫苗(甲壳素的含量为0.2%)、鸡新城疫铝胶疫苗(铝胶含量为0.2%)、鸡新城疫蜂胶疫苗(蜂胶含量0.2%)均自制；ND浓缩抗原、3.8% 枸橼酸钠溶液、V型微量血凝板、50μl定量移液管。

1.1.2 试验动物未免疫的1日龄健康AA雏鸡，共300只。

1.2 方法

1.2.1 鸡接种前的准备将实验组和对照组的雏鸡适应环境后，分别对每只鸡采血1.5ml；分离血清，冰箱冷冻备用。

1.2.2 1%鸡红细胞制备方法先用灭菌注射器吸取3.8%枸橼酸钠溶液(其量为所需血量的1/5)，从鸡翅静脉抽血至需要血量，置灭菌离心管内，加灭菌生理盐水为抗凝血的2倍，以2500r/min离心10min，弃上清夜，再加生理盐水悬浮血球，同上法离心沉淀，如此将红细胞洗涤三次，最后用灭菌生理盐水配成1%悬液。

1.2.3 鸡的接种采血后第2d对鸡接种，分别肌肉注射各种佐剂疫苗；A组：接种鸡新城疫甲壳素灭活苗每只4头份；B组：接种鸡新城疫蜂胶灭活苗每只4头份；C组：接种鸡新城疫铝胶灭活苗4头份;D组：空白对照组肌肉注射同等剂量的生理盐水。

1.2.4 接种后鸡的采血和制备血清接种后第3、4、5、6、7、9、11、13、15、20、25 d,分别对鸡采血1.5ml。每次采完血后，分别制备血清，置冰箱冷冻备用。

1.2.5 血球凝集试验(HA) 取V型微量血凝板，每空加入50μl生理盐水，取50μl鸡新城疫病毒加入第一孔，倍比稀释至第11孔，第12孔作对照；然后每孔加入1%(体积分数)鸡红细胞50μl，振荡混匀，37℃静置15min后判定，以凝集50%红细胞的最高稀释倍数为病毒血凝价。

1.2.6 血凝抑制试验(HI) 取25μl待测血清于V型微量血凝板，倍比稀释，然后每孔加入4单位抗原(4U)25μl，37℃静置15min后判定，以能抑制100%红细胞凝集的最高稀释倍数为血清凝集抑制价。

2 结果

2.1 血凝抑制实验结果

血凝抑制实验结果见下表1。

表1 各组血凝抑制实验结果

由表1可见，在各组鸡中反复随机抽取10只鸡，在3种佐剂中，甲壳素疫苗能增强特异的病毒血凝抑制抗体的效价，蜂胶疫苗在增强特异的病毒血凝抑制抗体的效价上低于甲壳素疫苗高于铝胶疫苗，对照组在增强特异的病毒血凝抑制抗体方面最低。此结果表明，甲壳素疫苗对鸡免疫鸡新城疫灭活疫苗具有免疫增强作用。

2.2 接种前血清HI抗体检测结果

对接种前采集的血清样品进行检测。A、B、C和对照组鸡血清的HI抗体效价均为4.67log2(表2)。

2.3 接种后血清HI抗体检测结果

分别用鸡新城疫甲壳素灭活苗、鸡新城疫铝胶灭活苗、鸡新城疫蜂胶灭活苗，对3组鸡进行接种，接种后，A组HI抗体效价均值上升了5.33log2，B组HI抗体效价上升了4.66log2，C组HI抗体效价均值上升了2.33log2(表2)。

表2 不同佐剂疫苗免疫鸡抗体(HI)效价均值 (log2)

3 讨论

3.1 鸡体的健康状况

只有在鸡群健康的情况下，机体的各项生理指标均正常，机体对疫苗才能产生最有效的免疫应答，产生最佳的特异性抗体[6]，本次试验选用健康的AA雏鸡。当鸡感染病毒性传染病可使鸡的免疫器官和功能受到损害，从而降低了鸡群的抵抗力，降低鸡群对鸡新城疫疫苗免疫接种的应答反应，易造成鸡新城疫免疫失败，也容易引发混合感染或继发感染。

3.2 母源抗体的水平及其干扰

不注意母源抗体水平也是促使免疫效果不良的因素。接种鸡新城疫疫苗后，产生新城疫抗体，该抗体经卵黄而传递给雏鸡，雏鸡获得这种来源于母体的新城疫抗体称之为母源抗体[7]，正是因为有母源抗体的保护，才使得雏鸡在出壳后一段时间内能抵抗病毒的侵害。母源抗体在保护鸡体免受新城疫病毒侵害的同时，也能抑制雏鸡新城疫免疫反应的发生，导致雏鸡免疫失败[8]。所以对雏鸡接种3种佐剂苗前，先饲喂10d，依次来消除母源抗体的干扰，以保证试验的顺利进行。