中风复元口服液质量标准研究

★ 张诚光 谭梅英 胥爱丽 李素梅（.广东省第二中医院 广州 50095；.广东省中医研究所 广州50095）

中风复元口服液主要由黄芪、陈皮、赤芍、半夏等中药组成，具有补气活血，化痰通腑的功效，可用于中风恢复期、后遗症期治疗中风后肩手综合症，中风后便秘等。为了更好地控制中风复元口服液的质量，本文通过实验制定了科学可靠的质量标准，对保证临床用药的有效性和安全性具有一定的价值和意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪，Alltech 3300蒸发光散射检测器，四元梯度泵，G2170AA数据处理系统；CAMAGTLCSCANNER III型薄层扫描仪（瑞士）；CAMAG TLC SAMPLER 4型自动点样仪（瑞士）；PBQ-II型薄层自动铺板器（重庆南岸实验电器厂）；电热恒温干燥箱：DHG-9070A（上海精宏实验设备有限公司）；电子天平：BP-221D Sartorius（德国）；电热恒温水浴锅：HWS-26（上海）；

1.2 试药

黄芪甲苷对照品（批号：110781-200613）、黄芪对照药材（批号：120974-200609）、陈皮对照药材（批号：120969-200507）、赤芍对照药材（批号：121092-200402）均购自中国药品生物制品检定所；中风复元口服液由广东省第二中医院制剂室提供；乙腈为色谱纯试剂（一级），水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 黄芪TLC鉴别 取中风复元口服液10mL，加水饱和正丁醇振摇提取3次，每次15mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g，加水100mL，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液加水饱和正丁醇振摇提取，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-稀氨水（1→10）（4：1：5）的上层溶液为展开剂，置于用浓氨试液预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰（见图1）。

2.1.2 陈皮TLC鉴别 取中风复元口服液10mL，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL溶解作为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.3g，加乙酸乙酯30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液2μL，对照药材溶液4μL，分别点于同一用1%氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯（3：2）为展开剂，展开，取出，晾干，在105℃加热3分钟，置于紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰（见图2）。

2.1.3 赤芍TLC鉴别 取中风复元口服液5mL，通过D101型大孔树脂柱（湿法装柱，内径8mm，柱高10cm），先用水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，再用20%乙醇30mL洗脱，弃去洗脱液，继续用20%乙醇70mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取赤芍对照药材0.5g，加水50mL，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至5mL，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液15μL，对照药材溶液3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水（6：3：1.5：1.5：0.3）为展开剂，置于用浓氨试液预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰（见图3）。

2.2 黄芪甲苷含量测定

2.2.1 色谱条件[1]色谱柱：Agilent Hypersil ODSC18（4.6mm×250mm，5μm）柱；流动相：乙腈-水（32：68）；流速：1.0mL/分；柱温：25℃；漂移管温度：45℃；气体流速：1.5L/分；撞击器模式：开。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解，制成每1mL含黄芪甲苷0.512mg的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密量取中风复元口服液20mL，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，（内径1.5cm，长12cm），以水50mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 取处方中除黄芪外其他药材，按制剂工艺制备，按2.2.3项下供试品溶液的制备方法制得供试品阴性对照溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL进样，记录色谱图。从图中可见，黄芪甲苷色谱峰峰形对称，达到基线分离，阴性对照溶液在黄芪甲苷色谱峰处基本无干扰。结果见图4。

2.2.5 线性范围的考察 分别精密吸取不同浓度黄芪甲苷对照品溶液（每1 mL中含黄芪甲苷分别为0.0512μg，0.1536μg，0.2560μg，0.3584μg，0.4608μg）10μL进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积的自然对数值（Y）对进样量的自然对数值（X）进行线性回归，得标准曲线：Y=1.3722X+5.0011，r=0.9995。表明黄芪甲苷在0.512-4.608μg范围内呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液（0.512mg·mL-1）5μL重复进样6次，测得峰面积积分值的RSD为1.48%，表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 取样品供试液（批号120201）分别于0，2，4，6，8小时进样5μL，测得样品中黄芪甲苷峰面积值的RSD为1.84%，表明样品供试液在8小时内稳定。

2.2.8 重复性试验 按拟定的含量测定方法，取同一批样品（批号：120201）5份，分别制备供试液，测得峰面积并计算含量，结果供试品中黄芪甲苷的RSD为1.32%。

2.2.9 回收率试验 取已知黄芪甲苷含量的同一批号样品（120201）6份，置分液漏斗中，再分别精密加入一定量的黄芪甲苷对照品，按上述供试品制备方法，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测试，结果黄芪甲苷的平均回收率为99.92%，RSD为1.67%，结果见表1。

表1 黄芪甲苷回收率试验结果

2.2.10 样品的测定 分别精密吸取对照品溶液2μL、5μL与供试品溶液各10μL，按上述色谱条件进行测定，结果见表2。

表2 样品中黄芪甲苷含量测定结果（n=2）

图4 中风复元口服液HPLC色谱图（t/min）

3 讨论

《中国药典》2010年版一部第283页黄芪项下收载有黄芪甲苷的提取、纯化方法，采用此方法处理供试品，以正丁醇-乙酸乙酯-稀氨水（1→10）（4：1：5）上层溶液为展开剂，以浓氨试液饱和展开缸，所得色谱斑点清晰，供试品色谱与对照药材色谱对应良好，且阴性对照无干扰，故列入正文。

《中国药典》2010年版一部第176页陈皮项下收载有薄层鉴别方法，但操作方法过于复杂，为简化方法，首先采用乙醚为提取溶剂，以甲苯-乙酸乙酯（3：2）为展开剂，结果供试品斑点较浅。将提取溶剂改为乙酸乙酯[2]，以5%三氯化铝乙醇溶液为显色剂，结果供试品色谱与对照药材色谱对应良好，斑点清晰，分离度好，且阴性无干扰，故列入正文。

《中国药典》2010年版一部第147页赤芍项下收载有薄层鉴别方法，采用此方法，结果供试品色谱背景较深，拖尾严重。采用大孔树脂吸附法对供试品进行纯化[3]，以20%乙醇洗脱，将展开剂改为甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水（6：3：1.5：1.5：0.3），以浓氨试液饱和展开缸，结果供试品色谱与对照药材色谱对应良好，斑点清晰，且阴性无干扰，故列入正文。

选择方中君药黄芪所含黄芪甲苷作为含量测定指标，测定其含量以控制中风复元口服液的质量。参考《中国药典》2010年版一部黄芪【含量测定】项下方法对中风复元口服液样品进行处理并检测，所得结果较为理想，峰形及分离度均良好，出峰时间亦较短，故选择该方法作为黄芪中所含黄芪甲苷的含量测定方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部，北京：化学工业出版社，2010.

[2]水彩红，陈玉敏，姜春来，等.小儿止泻安颗粒质量标准的研究[J].解放军药学学报，2011，27（5）：435-437.

[3]陈立江，段洪云，张胜，等.赤芍中芍药苷的分离纯化与结构鉴定[J].中国现代应用药学，2011，28（7）：634-637.