促甲状腺素酶联免疫吸附试验在新生儿疾病筛查中的应用

2013-08-15李传胜徐宏飞张兰香张燕华解宗麟

中国医学装备 2013年10期

李传胜徐宏飞魏莉张兰香张燕华解宗麟

先天性甲状腺机能减退(甲低)是引起常见先天性痴呆的病因之一，他是以外周血甲状腺激素(T3和T4)水平降低为特征的新生儿内分泌障碍。世界范围内先天性“甲低”的平均发病率为1∶4000。“甲低”的特点是外周血中甲状腺激素低于正常水平，而促甲状腺素高于正常水平[1]。人体的促甲状腺素是由脑垂体前叶合成分泌，调节和刺激甲状腺产生甲状腺激素。甲状腺激素缺乏刺激TSH分泌，存在负反馈。TSH水平受下丘脑分泌的促甲状腺素释放激素的影响[2]。因此，新生儿外周血促甲状腺素浓度水平提高，可作为筛查判断先天性“甲低”的根据。但由于患“甲低”疾病的婴儿缺乏早期症状，不易及时发现并治疗，从而导致了患“甲低”疾病的婴儿终身残疾。为此，自1974年始发达国家已普遍实行新生儿先天性甲状腺机能筛查，从而使发病造成对婴儿的危害大幅降低。本试验是采用改良的酶联免疫“双抗夹心法”吸附试验为原理进行设计的，具有准确分辨“甲低”人群及正常人群的功能[3]。新生儿出生前后和出生后数月内甲状腺激素的不足将妨碍其大脑的正常发育，其最终结果导致不可修复的大脑功能障碍和骨骼神经系统发育障碍。早期筛查出新生儿先天性“甲低”，用甲状腺激素的替代治疗可防止大脑的发育不良，适用于新生儿先天性甲状腺机能的筛查。

1 资料与方法

1.1 标本采集

(1)对采集的血片应严格按要求验收。标本验收可以减少假阳性率，避免造成不必要的浪费。婴儿出生后3～5 d，用滤纸从婴儿的足跟取一滴血液，获得带血点(直径0.8 cm)的滤纸片，并确信滤纸片被血样完全浸透，带血样的滤纸片至少晾干2 h，将带血样的干燥滤纸片密封，在4～8 ℃的室温下贮存4月。

(2)滤纸片标本的收集必须为单一的一滴血液，否则会造成假阳性结果。血样在滤纸片上扩展的面积要足够大，保证血液从滤纸的上面均匀浸透到下面，浸透不完全则会造成测定的TSH量偏低。

(3)采血点应稍微靠近足跟的左表面皮肤，抹掉第一滴血用随后形成的血滴。为提高婴儿足跟针刺点血流，婴儿足跟可用热湿毛巾(约42 ℃)敷3 min。不可过分挤压足部，否则会导致溶血或组织液的稀释。血滴形成后，用滤纸片轻轻地接触血滴，但不可向足跟挤压，从滤纸背面观察血滴透过滤纸。通常1个婴儿要收集3个血点(3滴血)的滤纸标本，血样点应避免污染。置滤纸于水平位置，室温空气需干燥2～6 h[4]。

(4)注意不可将血样加热和堆积，不可接触其他物品表面。将每个带血标本的滤纸片置于单独的信封中，并邮寄至新生儿筛查中心实验室。中心实验室收到标本后应放置于4～8 ℃的室内防湿保存，并及时筛查。

(5)标本收集卡应注明以下内容：医院名称、编号、婴儿姓名、出生日期、住院号、家庭地址、电话和采血日期。血片打孔时应尽量避免血斑边缘，应取中心与边缘之间部位。

1.2 试剂准备

检测试剂不可使用超过有效期的试剂，不可互用不同批号的试剂，因其每批试剂的批号标准品和质量控制值有可能不同，注意标准品和质量控制的单位，应分清是血清还是全血，并坚持使用原厂试剂[5]。试剂应在2～8 ℃冰箱内储存[6]，试剂盒从冰箱取出30 min后方能打开外包装，等待试剂温度与室内温度平衡后方可使用。所用的蒸馏水和去离子水都应保证其质量，否则将会提高假阳性率。酶的配置时间应在使用前1 h内，酶配制完毕轻微晃动混匀后静止放置30 min以上[7]。

1.3 加样

加样时严格操作方能获得理想的检测结果。应准确地使用加液器，不可使加液头接触孔壁，避免孔间污染；配制底物溶液等时所用的器具必须洁净，应仔细清洗加样板是很重要的。避免加在孔壁上部，也不可溅出或产生气泡。加完后震荡混匀，但不可使液体溅出孔外。

(1)温度。加入酶后的反应温度应控制在25～27 ℃之间。冬天的假阳性率偏高的原因，由于早上和晚间的温度不稳定有关。保温时间过长, 保温温度过高,都会引起试验的高本底现象。

(2)清洗加样板。每次清洗加样板要彻底，拍板要干净，尽可能的不留残余。清洗每块加样板的时间应尽可能保持相对一致。

1.4 TMB显色剂的配制

TMB显色剂必须在临用前配制，TMB显色剂溶解于二甲基亚砜中，二甲基亚砜对眼睛和皮肤有刺激，若接触到眼睛时应立即用清水冲洗，然后去医院治疗；接触皮肤后应立即用大量清水冲洗；操作应带手套；氧化剂，金属离子和肥皂残留物均能干扰TMB的反应。TMB的熔点为18 ℃，低于此温度则易结晶。使用前应放置于18～25 ℃的室内，待平衡溶解后用底物缓冲液稀释配制[8]。TMB显色剂对光具有敏感性，应避免暴露在强光下。