蛇肽保健酒对小鼠佐剂性关节炎的影响＊

曹娟娟，和七一，赵瑛，张荣春，魏世蓉，邹家丽，邓可宣 ，余晓东

（重庆市动物生物学重点实验室／重庆市生物活性物质工程研究中心／重庆师范大学生命科学学院 400047）

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性全身性自身免疫性疾病，病理基础为关节滑膜炎，公认的RA发病的中心环节是树突状细胞（Dendritic cells，DCS）介导自身反应性T细胞的异常活化［1］。因临床表现复杂多样，加上类风湿因子（rheumatoid factor，RF）特异性较差，在其他自身免疫性疾病甚至正常人血清中都检测得到，最终因不能及时治疗而致关节功能障碍，致残率较高，严重危害了人类的身体健康［2－4］。中国传统医学认为毒蛇及其毒性成分有祛风解毒、镇痉止痛的功效，能治疗风湿痛、四肢麻木、半身不遂等症［5］。本实验室研制开发的蛇肽保健酒，肽浓度18mg／100mL，乙醇浓度为35%，具有提高机体免疫能力、增强机体性功能、延缓衰老和抗疲劳等功效［6］。佐剂性关节炎（adjunctive arthritis，AA）小鼠是目前广泛应用的类风湿性关节炎模型之一。该模型以多发性关节炎为特征，原发病变主要是局部急性炎症反应，并于致炎后一段时间出现继发病变，同时出现以细胞免疫变化为主的免疫功能紊乱［7］。本研究以AA小鼠为模型，研究蛇肽保健酒对AA小鼠足趾和踝关节肿胀度、体质量、脾脏指数以及血清循环免疫复合物（CIC）水平的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 昆明种健康雄性成年小鼠60只，体质量（20±2）g；蛇肽保健酒，酒基，弗氏完全佐剂（FCA），地塞米松片，硼酸缓冲液，聚乙二醇；浓缩仪，电子游标卡尺，电子分析天平，酶标仪。

1.2 方法

1.2.1 分组及给药方式 将60只小鼠随机分为6组，即对照组、模型组、酒基组、蛇肽低剂量组和高剂量组、阳性对照组，每组10只。除对照组注射生理盐水外，在其他各组小鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂（FCA）0.02mL诱导炎症发生。造模成功后第2天至34d，开始对小鼠进行灌胃，每只小鼠每天1次，每次0.2mL。阳性对照组以1mg／kg地塞米松进行灌胃，酒基组按10mL／kg灌胃，蛇肽保健酒组分别按8.3mL／kg（低剂量）、33.2mL／kg（高剂量）灌胃，对照组和模型组用纯净水对小鼠进行灌胃。

1.2.2 AA小鼠足趾和踝关节肿胀度的测定 在造模后第2、10、18、26、34天用电子游标卡尺测定各组小鼠右后肢足趾和踝关节直径。

1.2.3 小鼠体质量和脾脏指数的测定 在造模后第2、10、18、26、34天分别称量小鼠体质量。于末次给药24h后，称量体质量。之后脱颈处死小鼠，剖解剥离脾脏，称取脾脏质量，以脾脏质量比小鼠的质量作为脾脏指数。

1.2.4 CIC的测定 造模后第34天，小鼠眼球取血，离心（3000r／min，10min）分离血清，血清用2倍体积0.1mol／L硼酸缓冲液（pH＝8.4）稀释备用。测定管与对照管各加稀释血清30μL，测定管加入4.1%聚乙二醇溶液300μL，对照管加入上述硼酸缓冲液300μL，混匀后4℃放置1h。用酶标仪以495nm波长测定各管吸光度（A）值，检测结果表示为测定管A495nm－对照管A495nm。

表1 蛇肽酒对AA小鼠右后足趾肿胀度的影响（mm，，n＝10）

表1 蛇肽酒对AA小鼠右后足趾肿胀度的影响（mm，，n＝10）

a：P＜0.05，b：P＜0.01，与模型组比较；c：P＜0.01，与对照组比较。

组别 第1天 第2天 第10天 第18天 第26天 第34天对照组 2.29±0.02 2.29±0.02 2.16±0.04 2.36±0.04 2.44±0.07 2.45±0.01模型组 2.33±0.02 3.65±0.17c 3.33±0.10c 3.77±0.07c 3.60±0.24c 3.54±0.08c酒基组 2.32±0.04 3.67±0.14c 3.27±0.10c 3.64±0.06c 3.42±0.11c 3.43±0.07c蛇肽低剂量组 2.30±0.06 3.50±0.07c 3.28±0.07c 3.63±0.09c 3.12±0.09bc 2.92±0.06bc蛇肽高剂量组 2.30±0.06 3.62±0.14c 3.16±0.08c 3.77±0.06c 3.43±0.10c 3.35±0.10c阳性对照组 2.29±0.09 3.76±0.07c 3.14±0.09c 3.40±0.18ac 3.09±0.15ac 3.18±0.08ac

表2 蛇肽酒对AA小鼠右后踝关节肿胀度的影响（mm，，n＝10）

表2 蛇肽酒对AA小鼠右后踝关节肿胀度的影响（mm，，n＝10）

a：P＜0.05，b：P＜0.01，与模型组比较；c：P＜0.01，与对照组比较。

组别 第1天 第2天 第10天 第18天 第26天 第34天对照组 3.41±0.09 3.35±0.10 3.26±0.03 3.51±0.08 3.35±0.02 3.29±0.08模型组 3.35±0.04 4.24±0.10c 4.12±0.12c 4.43±0.09c 4.21±0.10c 4.25±0.07c酒基组 3.52±0.05 4.31±0.08c 3.95±0.10c 4.38±0.09c 3.92±0.09a 3.88±0.10b蛇肽低剂量组 3.43±0.07 4.32±0.07c 4.04±0.07c 4.43±0.10c 3.97±0.06a 3.82±0.08b蛇肽高剂量组 3.51±0.05 4.26±0.03c 3.90±0.06c 4.32±0.06c 4.02±0.06a 4.00±0.07a阳性对照组 3.50±0.05 4.40±0.05c 3.96±0.11c 4.07±0.11a 3.93±0.03a 3.90±0.12a

表3 蛇肽酒对AA小鼠体重的影响（g，，n＝10）

表3 蛇肽酒对AA小鼠体重的影响（g，，n＝10）

a：P＜0.05，与阳性对照组比较。

组别 第1天 第2天 第10天 第18天 第26天 第34天对照组 18.92±0.59 20.79±0.63 27.93±1.16 32.98±0.97 36.55±1.18 37.62±1.20模型组 19.00±0.30 20.43±0.43 27.34±0.73 32.44±1.71 34.74±2.04 35.93±2.31酒基组 20.08±0.35 21.40±0.31 26.22±0.88 31.99±1.36 35.56±1.21 36.81±1.11蛇肽低剂量组 19.50±0.70 20.86±0.39 26.74±1.27 34.21±1.56 38.16±1.61a 39.80±1.83a蛇肽高剂量组 19.33±0.49 20.82±0.47 25.82±1.04 32.50±0.97 36.27±1.04 37.68±1.38阳性对照组 19.42±0.47 21.00±0.56 26.23±0.99 28.95±1.93 33.68±1.43 33.33±0.67

1.3 统计学处理 数据分析采用SPSS17.0统计分析软件，计量资料以表示，组间比较采用方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 蛇肽保健酒对AA小鼠右后足趾肿胀度的影响 由表1可见，从造模后第2天开始，其他各组小鼠后足趾肿胀度显著高于对照组（P＜0.01）。与模型组比较，从给药后第17天即造模后第18天开始，阳性对照组小鼠足趾肿胀明显降低（P＜0.05）；从造模后第26天开始，蛇肽低剂量组小鼠足趾肿胀度显著降低（P＜0.01）；酒基组与蛇肽高剂量组均无显著变化。

2.2 蛇肽保健酒对AA小鼠右后踝关节肿胀度的影响 由表2可见，从造模后第2天开始，其他各组小鼠右后踝关节肿胀度显著高于对照组（P＜0.01）。在造模后第18天，阳性对照组小鼠踝关节肿胀度显著降低（P＜0.05）；造模后第26天，蛇肽低剂量组、蛇肽高剂量组、酒基组和阳性对照组小鼠踝关节肿胀度均显著降低（P＜0.05）；造模后第34天，阳性对照组、蛇肽高剂量组小鼠踝关节肿胀度均显著降低（P＜0.05），蛇肽低剂量组和酒基组小鼠踝关节肿胀度降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。

2.3 蛇肽保健酒对AA小鼠体质量的影响 由表3可见，从造模第18天开始，与对照组比较，阳性对照组体质量增加缓慢，但未呈现显著性差异；但蛇肽低剂量组差异有统计学意义（P＜0.05），第26天和第34天时，阳性对照组与蛇肽低剂量组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.4 蛇肽保健酒对AA小鼠脾脏指数的影响 造模后第34天，测定各组小鼠脾脏指数，结果显示：与对照组（2.90±0.22）比较，模型组小鼠的脾脏指数（4.49±0.08）升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组（4.49±0.08）小鼠相比，阳性对照组（3.10±0.76）的脾脏指数显著降低（P＜0.05）；酒基组（2.35±0.10）、蛇肽低剂量组（2.60±0.19）和蛇肽高剂量组（3.03±0.35）的脾脏指数均降低，且差异有统计学意义（P＜0.01）。

2.5 蛇肽保健酒对AA小鼠血清CIC水平的影响 造模后第34天，测定各组小鼠血清CIC指数，结果显示模型组（2.38±1.22）小鼠血清CIC指数显著高于对照组（0.52±0.10）（P＜0.05）；与模型组相比，蛇肽低剂量组（0.65±0.14）和阳性对照组（0.37±0.09）的小鼠血清CIC指数均显著降低（P＜0.05）。

3 讨 论

3.1 蛇肽保健酒对AA小鼠踝关节和右后足趾肿胀度的影响 有研究发现眼镜蛇毒素低、中、高剂量（2、10、50μg／kg）对大鼠右足踝关节肿胀均无显著的抑制作用［8］。然而本研究发现：在足趾肿胀方面，阳性对照组效果显著，蛇肽低剂量组效果极显著。在踝关节肿胀方面，阳性对照组有显著抑制效果，但蛇肽低剂量组效果极显著，效果强于阳性对照组。从而说明蛇肽保健酒可明显减轻关节炎外在症状，可出现受累关节肿胀减轻，防止组织局部组织损伤，对关节损伤有修复效应［9］。但同时，酒基组小鼠踝关节肿胀度也有显著性降低。分析其原因：乙醇可以通过增强先天免疫系统细胞的功能来调节免疫反应，无论是人或是实验动物，低浓度乙醇均可能提高其免疫功能［10－13］，从而进一步减轻踝关节肿胀。研究结果提示：地塞米松起效快，但蛇肽保健酒效果更为明显，且蛇肽含量对抑制肿胀影响较大。

3.2 蛇肽保健酒对AA小鼠体质量的影响 与对照组相比较，模型组与阳性对照组小鼠体质量均有下降趋势，且实验过程中发现阳性对照组小鼠不活跃，毛色暗淡，可见地塞米松在治疗关节炎的同时对机体也造成了一定的损伤，不良反应较大。

3.3 蛇肽保健酒对AA小鼠脾脏指数的影响 脾脏作为体内最大的淋巴器官，具有储血、调节血量和参与免疫等重要功能。类风湿性关节炎病例的一个特征就是脾脏肿大［14］。蛇肽高、低剂量组小鼠脾脏肿大均显著减轻，效果与地塞米松组相当。同时酒基对降低脾脏肿胀也有效果，且与蛇肽低、高剂量组结果相似。

3.4 蛇肽保健酒对AA小鼠CIC的影响 CIC是RA的一个重要检测指标［9］。本研究发现：仅蛇肽低剂量组与阳性对照组小鼠CIC显著降低，并恢复为正常水平。提示蛇肽酒与地塞米松均对调节AA小鼠体液免疫发挥作用。

综合以上5个测量指标，低剂量蛇肽酒与地塞米松均对AA小鼠佐剂性关节炎具有显著的治疗效果，但低剂量蛇肽酒治疗效果更好，且未见不良反应。蛇肽酒对佐剂性关节炎的最佳治疗剂量及其他功效有待于进一步深入研究。

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