白康Ⅰ号冲剂中黄芪甲苷的含量测定及临床应用

陈家鲁

(本文编辑:张仲书)

白康Ⅰ号冲剂由黄芪、首乌等八味药材组成，具有滋补肝肾，活血化瘀的功能，主要用于治疗白癜风。该品种长期作为医院科研制剂使用，在临床上取得了较好的效果。为了更好地控制产品质量，本文分析选择其君药黄芪作为研究指标，拟对其有效成分黄芪甲苷进行系统的研究。黄芪甲苷为紫外末端吸收的物质，用紫外分光光度法检测困难，运用高效液相色谱法配蒸发光散射检测法(HPLC-ESLD)进行黄芪甲苷的检测已多有报道［1-3］，因此本文采用HPLC-ESLD法进行检测。实验结果表明该法具有准确度高，简便快捷，干扰少，重现性好等特点，可用于白康Ⅰ号冲剂的质量控制。

1 材料与方法

1.1 仪器 高效液相色谱仪(岛津LC-20AB日本)，蒸发光散射检测器(PL-ELS 2100型)，电子分析天平(梅特勒-托利多ML104型，精确度为万分之一)。所用试剂中甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，实验用水为去离子水。

1.2 药品 白康Ⅰ号冲剂(南京军区机关医院提供，批号：20120301，20120302，20120303)，黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0781-9908)。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件 色谱柱：Dubhe C18(250 mm×4.6 mm)；柱温：30 ℃；流动相：甲醇-水溶液(83∶17)；流速：1.0 ml/min；蒸发温度为 90 ℃，散射温度为60℃，气体流量：1.8 SLPM；理论塔板数：以黄芪甲苷峰计不低于10000。

1.3.2 供试品溶液 取白康Ⅰ号冲剂约4 g研细，精密称定后置索氏提取器中，加甲醇40 ml冷浸过夜，再加甲醇适量回流4 h，合并回收甲醇并浓缩至干，再加水10 ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇提取液；用氨试液洗涤2次，每次20 ml，弃去氨液。将正丁醇液蒸干，加水3～5 ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm，长12 cm)，以水50 ml洗脱，弃去水液；再用40%乙醇30 ml洗脱，弃去40%乙醇洗脱液；继用70%乙醇50 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至2 ml量瓶内，加甲醇至刻度摇匀，即得。再以0.45 μm微孔滤膜滤过，待进样。

1.3.3 不含黄芪的阴性样品溶液 取阴性样品(不含黄芪)约4 g精密称定，按1.3.2项制备得阴性样品液。进样10μl，按上述色谱条件测定。

1.3.4 标准曲线制备 取黄芪甲苷对照品8 mg精密称定，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀制得0.8202 mg/ml的黄芪甲苷标准储备液。精密量取上述溶液适量以甲醇倍比稀释得浓度为0.0513、0.1026、0.2051、0.4101、0.8202 mg/ml的标准曲线溶液，分别吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪测定(重复2次)。

1.3.5 方法学考验 以0.1026 mg/ml的黄芪甲苷标准溶液为测试样品，连续进样6针考验精密度；以(批号20120301)供试品溶液每2 h进样1次，共进5次，考验稳定性；以 白康Ⅰ号冲剂(批号20120303)精密称定6份各4 g，按1.3.2项平行制备样品液，进行重复性考验；另称取同批号白康Ⅰ号冲剂6份，每份2 g，两份1组，共3组，每组分别加入黄芪甲苷标准液(0.1026 mg/ml)0.85、0.90、0.95 ml，进行回收实验；分别取不同批号的白康Ⅰ号冲剂4 g，及取不同批号的药材粗粉4.0 g，按1.3.2项制备供试品溶液，按上述色谱条件进行实际测定。

2 结果

2.1 液相色谱结果 结果见图1。由图谱可知在大约7 min处无吸收峰出现，即阴性样品在黄芪甲苷峰相应位置无干扰。

2.2 黄芪甲苷标准曲线 以峰面积的对数值为纵坐标(Y=lnA)，以进样量的对数值为横坐标(X=lnQ)，绘制标准曲线，得线性回归方程为 Y=1.4847X+11.806，相关系数(r)=0.9996，线性范围为0.0513～0.8202 mg/ml，线性较好。

2.3 方法学考验 相对标准误差(RSD)为1.46%，表明精密度良好。供试品溶液中的黄芪甲苷在8 h内稳定，RSD为1.61%，稳定性良好。重复测试，黄芪甲苷的RSD为2.67%，重复性良好。黄芪甲苷平均回收率为97.53%，RSD为1.24%(表1)，表明本法回收良好。白康I号冲剂中黄芪甲苷的含量为每袋不少于0.4 mg，实测平均为0.44 mg(表2)；黄芪甲苷的药材的实测平均含量为0.0835%(g/g)(表3)。

图1 黄芪甲苷色谱图

3 白康1号冲剂的临床应用

选择我院2011年1月-2012年12月门诊白癜风53例，平均年龄36.7(17～66)岁，采用白康1号冲剂配合白康搽剂(自制)进行针对治疗，3次/d，每次1包，搽剂每日涂抹患处2次，3个月为1个疗程，3个疗程后观察治疗效果。按照疗效评定标准［5］(痊愈：白斑全部消失，恢复正常肤色；显效：白斑部分消退或缩小，恢复正常肤色的面积占皮损面积大于50%；好转：白斑部分消退或缩小；无效：白斑无色素再生或范围扩大)判定治疗结果。结果显示，痊愈2例(3.77%)，显效20例(37.74%)，好转15例(28.30%)，无效16例(30.19%)，总有效率达69.81%。

表1 HPLC-ESLD回收实验结果(n=6)

表2 实际测定结果(mg，n=6)

表3 药材中黄芪甲苷的实际测定(n=3)

4 讨论

白康一号冲剂中黄芪甲苷的含量随提取时间的延长而降低。提取2 h所制得供试品含量最高但是不稳定，这可能与方中其他药材的干扰有关，具体原因有待进一步考察。为了更准确测定其含量，本实验采用提取4 h制备供试品。2010版药典［4］规定黄芪甲苷的测定用乙腈-水溶液作为流动相，笔者实验发现用甲醇-水溶液(83∶17)作为流动相得到的黄芪甲苷色谱峰分离度及峰形较好，加之经济方便的考虑，本实验采用甲醇-水溶液作为高效液相色谱含量测定的流动相。

白康1号冲剂在临床使用时，配合白康搽剂(自制)，治疗白癜风的总有效率达到69.81%，证明白康1号冲剂是一个具有明确疗效的临床经验方。

［1］赵灵芝，朱丹妮，严永清.HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量［J］.药物分析杂志，1999，19(6)：403-405.

［2］胡端龙，姜丽珍，奚静芳.丹溪玉屏风颗粒中黄芪甲苷的含量测定［J］.中国现代中药，2011，13(6)：41-42.

［3］张 丽，张爱华，张晓骞，等.HPLC-ELSD法测定仁术健胃颗粒中黄芪甲苷的含量［J］.中成药，2004，26(12)：1018-1021.

［4］中华人民共和国药典2010版(一部)［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：1283-1285.

［5］中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会色素病学组.白癜风临床分型及疗效标准(2003年修订稿)［J］.中华皮肤病杂志 2004，37(7)：440.