注射口蹄疫疫苗对种公牛精液品质的影响

孔 伟，马志远，王宝全，窦世玲，米占锋，马 元，张宝良，曹振卿

（甘肃省家畜繁育中心，甘肃 武威 733000）

近年来，口蹄疫疫病发病情况比较复杂，给我国畜牧业生产带来了重威胁。种公牛站作为育种和牛冷冻精液生产供应单位，对疫情的防控意义要远大于一般养殖场，所以利用口蹄疫疫苗对种公牛进行多次免疫是各种公牛站年度防疫工作的重点。但在生产实践中发现，注射口蹄疫疫苗对种公牛造成不同程度的应激反应，导致精液品质在短期内下降，给冻精生产带来了一定的不利影响［1］。为了客观、准确地掌握种公牛注射口蹄疫疫苗后精液品质的影响程度及恢复状况，本试验通过连续3年跟踪监测注射口蹄疫疫苗对种公牛生产的影响，减少因疫苗注射造成的生产损失提供数据参考，为今后制定科学的免疫程序提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

选择甘肃省家畜繁育中心种公牛站饲养的20头健康无病、体重相近、性欲旺盛、采精正常的西门塔尔种公牛作为供试牛，年龄为2～4岁。试验期间按照《种公牛饲养管理技术规程》进行。

1.2 试验时间

试验全期分为三个阶段，第一阶段前期为2009年4月25至5月25日、后期为2009年9月25至10月25日，第二阶段前期为2010年4月25至5月25日、后期为2010年9月25至10月25日，第三阶段前期为2011年4月25至5月25日、后期为2011年9月25至10月25日。

1.3 试验疫苗

选择由中农威特生物科技股份有限公司生产的O型、亚洲Ⅰ型口蹄疫二价灭活疫苗，每年免疫2次，注射时间为5月10和10月10日。

1.4 仪器设备

牛用假阴道、鼓风干燥消毒柜、精子密度测定仪、电子天平、低温冷冻仪、磁力搅拌器、恒温水浴锅、超声波洗涤器、相差显微镜、细管精液封装打印一体机、平衡冷柜、程序冷冻仪、高压灭菌器、无菌操作台、染色板。

1.5 采精操作

由专职采精员负责采精工作，成年牛采精频率为每周采精2d，间隔2d，一天采精2次，中间间隔不少于30min，青年公牛每周1次，早晨采精，并严格执行采精操作规程。

1.6 精液制作

原精采集后送入检测室，专人检测评定精液量、精子活力和原精密度，确定稀释倍数。将稀释好的精液封装后，放入4℃冰箱中平衡4h，用程控冷冻仪按设定好的冷冻程序冷冻，最后用附电视显微摄像系统的生物显微镜评定活力，镜检合格者包装入库［1］。

1.7 数据处理

试验数据采用统计软件SPSS 13.0进行T检验，各组数据均以平均数±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 注射口蹄疫疫苗后种公牛临床症状观察

试验牛注射口蹄疫苗后表现为：虚弱无神、低头耷耳、不愿活动、眼睛潮红、流口水、采食减少、体温升高、呼吸急促等应激症状，注射部位肿胀，肌肉坚硬形成包块，长期不散。

2.2 注射口蹄疫疫苗前后种公牛精液品质的比较

2.2.1 精液量的变化 从表1可知：接种口蹄疫疫苗前后种公牛的射精数量发生了明显变化，连续三年，接种后15d的精液量均显著低于接种前15d的精液量（P＜0.05），2009年接种后较之接种前减少了2.4mL、2010年减少了2.3mL、2011年减少了2.5mL，连续三年接种后射精量与接种前精液量相比较，降幅较大，分别下降了36.36%、33.82%和32.90%。

表1 接种口蹄疫疫苗前后种公牛精液量的比较

2.2.2 精子密度的变化 接种口蹄疫疫苗前15d和接种后15d种公牛精子密度如表2所示，2009年接种前后精子密度差异显著（P＜0.05），接种后精子密度减少了4.98亿／mL，下降幅度为28.97%；2010年接种前精子密度显著高于接种后（P＜0.05），接种后精子密度减少了464亿／mL，下降幅度为26.75%；2011年接种后精子密度显著低于接种前精子密度（P＜0.05），接种后精子密度减少了4.94亿／mL，下降幅度为27.61%。

2.2.2 精子活力的变化 种公牛接种O型、亚洲Ⅰ型口蹄疫二价灭活疫苗前后精子活力的变化如表3所示，接种后原精活力达0.6上所占比例、接种后原精活力和接种后冻后活力与接种前相比较，均有所下降，2009年上述三项活力指标分别下降了15.4%、1.9%、8.4%，2010年依次降低了10.9%、4.4%、9.25，2011则下降了10.5%、2.6%、10.6%。经显著性检验，连续三年，接种口蹄疫疫苗前后，三种精子活力表示指标均无显著差异（P＞0.05）。

表2 接种口蹄疫疫苗前后种公牛精子密度的比较

表3 接种口蹄疫疫苗前后种公牛精子活力的比较

2.2.4 精子畸形率和顶体完整率的变化 种公牛精子畸形率和顶体完整率在接种疫苗前后发生的变化如表4所示，2009年接种前精子畸形率显著低于接种后（P＜0.05）、接种前顶体完整率显著高于接种后（P＜0.05），接种后精子畸形率上升了5.7%，头部膨胀、大卷尾、有头无尾精子，以及带有原生质滴精子增多，接种后精子顶体完整率下降9.2%，顶体中头部膨胀、顶体半脱落、顶体全部脱落的精子，以及着色不均的精子明显增多；2010年和2011年接种前后种公牛精子畸形率和顶体完整率变化特点基本与2009年相符，接种后2010年和2011年精子畸形率分别上升了6.2%、7.6%，接种后2010年和2011年精子顶体完整率各自下降了9.9%和8.9%。

表4 接种口蹄疫疫苗前后种公牛精子畸形率和顶体完整率的比较

2.2.5 精子存活率的变化 由表5可知：在37℃、4h内精子存活率接种疫苗后明显减弱。相同条件下，连续三年，接种后精子存活率均极显著低于接种前（P＜0.01），接种后2009年、2010年和2011年精子存活率分别下降了17.15%、15.8%及15.2%，降幅依次为62.82%、58.83%及53.33%。

表5 接种口蹄疫疫苗前后种公牛精子存活率的比较

3 讨论

3.1 口蹄疫疫苗对种公牛精液品质的影响原因分析

利用口蹄疫疫苗对偶蹄目动物进行免疫已成为许多国家防控口蹄疫疫情的主要措施和手段，并收到了显著效果。但在免疫过程中发现，疫苗注射后对动物生产均会产生一定程度的负面影响。孙江涛等研究认为，口蹄疫疫苗注射可影响奶牛的产奶量、体温和乳品质，且持续5～6d［2］。汪泽华研究结果表明：种公猪在预防注射后的第1～5d内，采取精液是完全可以使用的，在第6d到第14以至25d内，因精子活力没有完全恢复，故不宜采精配种，否则影响配孕率［3］。马保华等研究认为：在注射传染性胸膜肺炎疫苗后次日起7d内精子活力处于0.2～0.5之间，达不到输精要求，7d后精子活力逐渐升高，密度也开始逐渐增加［4］。以上研究结果同时表明：畜禽免疫接种各种不同的疫苗后，其生产性能、繁殖性能等出现不同程度的下降趋势。

本试验研究结果表明：种公牛免疫接种O型、亚洲Ⅰ型口蹄疫二价灭活疫苗后15d，种公牛的精液量明显减少，因种公牛精液量的多少受到年龄、采精员的技术手法、采精季节（如温度、湿度）、采精频率、种公牛营养水平、性欲及精神状态等影响［5］，在本试验中，上述因素均保持一致，从而说明注射口蹄疫疫苗会显著降低种公牛的精液量。接种疫苗后，种公牛的精子密度显著减小、精子畸形率显著增加、精子顶体完整率显著下降、精子存活率显著减弱，究其原因，其一、可能与疫苗的注射应激及疫苗中氢氧化铝或双相矿物油等佐剂对动物细胞具有毒性作用有关［6］，其二、可能与种公牛精液生成有关，因一个精子发生周期所需时间为45～60d［5］，注射口蹄疫疫苗恰好与精子发生周期相一致，造成精液品质下降现象。

根据GB4143－2008《牛冷冻精液》国家标准的要求，种公牛鲜精活力须≥65%，冻后活力≥35%，不符合该标准的精液均要废弃，鲜精活力率可以说明口蹄疫疫苗对种公牛精液生产的影响。由本试验结果可以看出，除2009年和2010年接种后原精活力略低于65%，其余活力指标均满足生产要求。虽然注射口蹄疫疫苗前后种公牛的精子活力之间差异不显著，但有下降的趋，导致发生的原因可能来自种公牛体质逐渐恢复、种公牛精液质量逐渐提高和疫苗引起的应激反应逐渐减小［1］。

3.2 降低口蹄疫疫苗对种公牛精液品质的影响措施

口蹄疫疫苗注射对种公牛产生较大应激，对种公牛精液品质有一定的负面影响。从本试验研究结果可以看出，口蹄疫疫苗的接种对种公牛精液品质影响较大。在这段时间里，饲养管理人员及饲喂人员应精心照料好接种公牛，从卫生、饮水、饮食等多方面入手，给予接种疫苗牛群最佳的关心照料，以使牛体在最短时间内恢复精液品质。为了降低接种疫苗对精液品质的影响，建议采取如下措施：①预防注射时，应考虑生产需要，合理安排种公牛的免疫时间，缓解因疫苗应激引起的精液质量下降，比如采取在每年的停采期进行疫苗注射或减少疫苗注射次数等措施，都可以减少种公牛站的生产损失；②种公牛在接种口蹄疫疫苗后停采一段时间，待牛体及精液品质回升后再恢复生产［7］；③加强门卫消毒制度，生产区内的工作人员应注意严格消毒，非生产人员严禁进人，把好种公牛的饲料来源地的选择，加强牛舍的卫生制度，搞好牛体的卫生［8］；④加强种公牛运动锻炼增强体质，及时清理牛舍内粪便污物。

综上所述，注射O型、亚洲Ⅰ型口蹄疫二价灭活疫苗对种公牛精液量、精子密度、精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率及精子存活率均产生一定程度的负面影响，给精液生产带来了一定的损失。因此，合理安排种公牛的免疫时间，尽量避开种公牛精液生产高峰期，可以减少因疫苗注射引起的冻精生产损失，在达到预期免疫效果的同时，最大限度提高种公牛的精液品质，保证种公牛生产正常进行。

3.3 本试验改进之处

本试验选择研究对象单一，仅为西门塔尔种公牛，且试验对象数量有限，建议增加其他种公牛品种，比较品种间差异，同时增加每一品种的试验数量和试验覆盖范围，提高试验结果的广泛性和可信性；因本次研究仅检查接种口蹄疫疫苗后15d时种公牛的精液品质，建议增设时间段，比如以周为单位，详细监测每一周种公牛精液品质的变化规律，为合理开展种公牛精液生产和制定切实可行的免疫程序提供理论指导。

［1］ 张淑二，朱茹萌，翟向玮等.注射口蹄疫疫苗对三个品种公牛精液品质的影响［J］.家畜生态学报，2011，32（4）：75－78.

［2］ 孙江涛，程大庆，郭成林，等.注射口蹄疫疫苗对泌乳牛生产性能的影响［J］.中国奶牛，2009，（5）：40－41.

［3］ 汪泽华.常规免疫注射对公猪精子活力的影响［J］.贵州畜牧兽医，2002，26（2）：31－32.

［4］ 马保华，赵晓娥.传染性胸膜肺炎及其疫苗对山羊繁殖性能的影响［J］.动物医学进展，2000，21（4）：134－135.

［5］ 张海涛，刘 玉，张晓霞，等.影响公牛精液产量的因素及应对措施［J］.中国奶牛，2006，（10）：21－23.

［6］ 蒋文俊，李华春，李 乐，等.口蹄疫疫苗研究进展［J］.畜牧与兽医，2004，36（5）：42－43.

［7］ 王元兴，郎介金，丁家桐，等.动物繁殖学［M］.南京：江苏科技出版社，1993：56－57.

［8］ 刘武军，刘 涌.关于种公牛注射口蹄疫疫苗引起生产性能降低的分析［J］.黄牛杂志，1995，21（4）65－67.