神经生长因子在胃腺癌组织中的表达及其与神经受浸的相关性研究

胡海霞，李伟，熊正文，李宏伟，黄勇，苏红

（中国人民解放军第251医院病理科，河北张家口075000）

神经生长因子在胃腺癌组织中的表达及其与神经受浸的相关性研究

胡海霞，李伟，熊正文，李宏伟，黄勇，苏红

（中国人民解放军第251医院病理科，河北张家口075000）

目的探讨神经生长因子在胃腺癌组织中的表达及神经受浸的情况，并分析其与临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学(EnVisionTM)法检测神经生长因子（NGF）在胃腺组织及癌旁组织中的表达。结果NGF在癌旁组织中的阳性表达率为6.66%，其在胃腺组织中的阳性表达率为51.25%，差异有统计学意义(P＜0.01)；NGF的阳性表达率与患者年龄、肿瘤直径、组织学分级及浸润深度无关，差异无统计学意义(P＞0.05)，但与淋巴结转移及神经受浸有关，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论NGF在胃腺组织中过表达，预示着患者预后不良及神经易受浸。

神经生长因子；胃腺癌；神经受浸；免疫组织化学

胃癌的发病率在世界上占所有肿瘤的第二位，是我国最常见的恶性肿瘤之一[1]。其发生、发展严重地影响着人们的生活水平及身心健康，特别伴有癌性疼痛，更易造成患者负面情绪的产生。然而，癌性疼痛发生的机制是多方面的，其中神经受浸比较常见。为了研究与神经受浸有关的因素，本文欲探讨神经生长因子(NGF)在胃腺癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系。

1 材料与方法

1.1 一般来源收集2005年4月至2011年12月期间我科存档患者资料，并经临床病理医生诊断为胃腺癌80例，同时选取了距腺癌0.5 cm处的癌旁组织30例。患者年龄32～87岁，平均57岁，＜57岁者24例，≥57岁者56例；肿瘤直径＜4 cm者20例，≥4 cm者60例。组织学分级[2]：高分化腺癌32例，要求腺样结构超过肿瘤的95%；中分化腺癌29例，要求腺样结构50%～95%；低分化腺癌19例，要求腺样结构5%～50%；未分化癌要求腺样结构＜5%。淋巴结有转移者41例，无转移者39例；神经有浸润52例，神经无浸润28例。癌组织浸润深度：黏膜下层9例，肌层13例，浆膜层58例。

1.2 主要试剂和方法兔抗人即用型多克隆抗体NGF及相关配套试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。采用免疫组织化学法EnVisionTM染色组织切片，实验操作按说明书进行。以公司提供的阳性染色切片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗为阴性对照。

1.3 结果判断NGF阳性着色以细胞质呈现黄色或棕黄色颗粒为准。阳性判定标准[3]：按染色强度及阳性细胞数量进行半定量积分法分级。着色程度分为：基本不着色、染色与背景相似者为0分；着色浅、略高于背景者为1分；中度着色、明显高于背景者为2分；高强度染色、着深棕色者为3分。阳性细胞数量分为：阳性细胞数＜10%为0分；10%～25%为1分；26%～50%为2分；＞50%为3分。每张切片在高倍镜(10×40)下取5个视野计数200个细胞。两项相乘：0～2分为阴性(-)，≥3分为阳性(+)。

1.4 统计学方法相关资料数据采用统计分析软件SPSS17.0处理，计数资料运用χ2检验分析，检验水准以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NGF在胃腺及癌旁组织中的表达NGF在30例癌旁组织中阳性表达2例，阴性表达28例，阳性率为6.66%；而在80例胃腺组织中阳性表达41例，阴性表达39例，阳性率为51.25%。经χ2检验分析，NGF在两者中的表达差异有统计学意义(χ2=18.21，P＜0.01)，见表1和图1、图2。

表1 NGF在胃腺癌及癌旁组织中的表达（例）

图1 NGF在癌旁组织中的表达（EnVisionTM×100）图2NGF在胃腺癌组织中的表达（EnVisionTM×100）

2.2 NGF的表达与胃腺癌临床病理因素的关系NGF在淋巴结转组中的阳性表达率为73.17%，而在无淋巴结转移组中的阳性表达率为28.20%，差异有统计学意义(P＜0.01)；NGF在神经受浸组中的阳性表达率为73.07%，而在无神经受浸组中的阳性表达率为10.17%，差异有统计学意义(P＜0.01)；但NGF的阳性表达与患者年龄、肿瘤直径、组织学分级、癌组织浸润深度无关，差异无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

表2 NGF的表达与胃腺癌临床病理因素的关系（例）

3 讨论

NGF是对神经组织有营养活性的一大类肽类物质的总称，它由α、β、γ三种亚基构成。NGF受体分为高亲和力TrkA受体和低亲和力p75受体，前者为功能受体，其主要功能是通过信号通路MEK/MAPK激活抗凋亡蛋白来实现某些肿瘤细胞的生长；后者为辅助受体，其可增强NGF与TrkA的结合力，调节TrkA的信号传导，并与细胞程序死亡相关，可诱导肿瘤细胞的凋亡[4]。有资料显示，NGF高表达具有促进胆管癌细胞增殖的作用，而在乳腺癌中的表达随着肿瘤恶性程度的增高而增高，肝癌组织中NGF的表达明显高于正常肝组织及肝硬化组织[5-7]。本研究结果表明，NGF在癌旁组织中阳性表达率为6.66%，远远低于在胃腺癌组织中阳性表达率为51.25%，推测NGF有可能参与了胃癌的发生。实验结果进一步显示，NGF的表达与患者年龄、肿瘤直径、组织学分级、癌组织浸润深度无关，而与淋巴结转移、神经受浸有关。同时，镜下观察发现，在神经受浸组织中癌细胞数量明显多于无神经受浸组织，且阳性表达也较高，这说明神经组织中表达的NGF具有吸引肿瘤细胞运动的趋向性，而肿瘤细胞分泌NGF所形成的浓度梯度诱导神经组织的定向生长，导致肿瘤细胞对神经的浸润发生。也有学者认为，NGF的嗜神经能力与NGF与其受体结合后促进肿瘤细胞肝素酶的转录有关[4]。

总之，NGF参与了胃腺癌发生、发展的过程，其在胃腺癌组织中的过表达更有利于癌细胞浸润神经。因而，检测NGF有无过表达，能在一定程度上了解患者病情的进展。但NGF与肿瘤细胞运动的趋向性之间是如何实现的有待研究进一步探讨。

[1]陈明净,翁阳.上皮细胞钙黏附蛋白与胃癌[J].海南医学,2009, 20(3):101-104.

[2]哈米霍恩著.虞积耀,崔常才,常晓燕,等译.消化系统肿瘤病理学和遗传学[M].北京:人民卫生出版社,2006:131.

[3]骆树瑜,张剑明,李宏捷,等.腺样囊性癌嗜神经侵袭中神经生长因子、上皮钙黏素和钙结合蛋白A4的表达及意义[J].口腔医学杂志,2010,45(9):531-534.

[4]李东亮,张朝.基础神经生物学[M].北京:人民军医出版社, 2006:332-336.

[5]郭伟,邹声泉.神经生长因子对人胆管癌细胞增殖作用的影响[J].中国普通外科杂志,2005,l4(8):595-598.

[6]Dolle L,Adriaenssens E,EI Yazidi-Belkoura IE,et a1.Nerve growth factor receptor and signaling in breast cancer[J].Curt Cancer Drug-Targets,2004,4(6):463-470.

[7]Ras G,Serafino A,Bellis L,et al.Nerve growth factor involvement in liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma[J].World J Gastroentero,2007,13(37):4986-4995.

Expression of nerve growth factor in gastric adenocarcinoma and its correlation with nerve invasion

HU Hai-xia,LI Wei,XIONG Zheng-wen,LI Hong-wei,HUANG Yong,SU Hong.Department of Pathology,the 251stHospital of Chinese PLA,Zhangjiakou 075000,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of nerve growth factor(NGF)in gastric carcinoma and the situation of nerve invasion,and analyze the relationship between nerve growth factor and clinicopathological factors.MethodsNGF was detected in gastric carcinoma and paracancerous tissue by immunohistochemistry(EnVisionTM).ResultsThe positive expression rate of NGF was 6.66%in paracancerous tissue and 51.25%in gastric carcinoma,showing statistically significant difference(P＜0.01).The positive expression rate of NGF was not related to age,tumor size,histological classification,infiltrated depth,with no statistically significant difference among them (P＞0.05).The positive expression rate of NGF was related to lymphatic nodes metastasis and nerve invasion,with statistically significant difference(P＜0.01).ConclusionThe over-expression of NGF in gastric carcinoma indicates unfavorable prognosis and nerve invasion.

Nerve growth factor;Gastric adenocarcinoma;Nerve invasion;Immunohistochemistry

R735.2

A

1003—6350（2013）06—0788—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.06.0338

2012-11-14)

胡海霞。E-mail：liwei-324@163.com