HP L C法对蒙药四味土木香散中氧化苦参碱含量的测定分析

邓清平 吕玉光

1.湖南省长沙市四医院，湖南 长沙 410006；2.佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154003

蒙药四味土木香散是临床中常见的一种药物，主要由土木香和苦参以及珍珠杆与山柰等药物精制而成的，临床上具有清热解表的效果。但是，在对其进行质量控制时，如何采取有效的方法进行测定显得尤为重要。临床中采取测定的方法也比较多，常见的采取高效液相色谱法（HPLC）测定苦参碱的含量，但是这种测定方法中被测峰面积比较小，而且存在拖尾和保留时间长等不足[1]。随着人们对其质量控制的不断研究，有资料采取HPLC法进行测定其中的氧化苦参碱，且具有较好的应用效果。因此，本文对这种测定方法进行深入的探讨，具体的方法如下：

1 材料与方法

1.1 研究材料

仪器：岛津LC-6A液相色谱仪和CR-3A记录仪以及SPD-6AV检测器与SIL自动进样器。

试剂：甲醇作为色谱纯，其他的试剂为分析纯。氧化苦参碱对照品（由中国药品生物制品检定所提供），蒙药四味土木香散（由内蒙古蒙药股份有限公司提供）。

1.2 方法

本次研究对于测定蒙药四味土木香散中的氧化苦参碱含量采取HPLC法进行测定，条件如下[2]：色谱柱：Shimpack CLC-ODS 色谱柱（6.0 mm×150 mm，5 μm）；流动相：0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液-甲醇-高氯酸钠（750∶250∶20）；流速：1.0 mL/min；波长：215 nm；温度：室温。

2 结果

2.1 系统适用性试验

通过上述的条件下分析，选取供试品和对照品以及阴性空白样品溶液均取20 μL。结果显示，供试品溶液的色谱被测峰和其他的峰分离较好，而且理论塔板数均按照氧化苦参碱峰计算＞4000[3]。具体的图像显示见图1。

2.2 溶液制备

图1 高效液相色谱图

取样品溶液0.5 g，并采取精密进行称定，然后将其进行置入锥形瓶中，并进行滴加0.5 mL的浓氨试液，精密加入20 mL的三氯甲烷，并对其质量进行称定，采取超声进行处理40 min，并放冷，再次称定其质量。然后，加入三氯甲烷补足原来的质量，经虑过和精密量取后，取续滤液5.0 mL，并进行蒸干处理，在残渣中加入无水乙醇溶液进行稀释并进行摇匀。最后采取微孔膜进行过滤，所得的溶液即为供试品溶液；然后依据处方的比例进行制备缺苦参阴性样品溶液，并采取同样的方法制备阴性对照品溶液。同时，精密称取氧化苦参碱对照品，并利用甲醇制成0.198 mg/mL的溶液作为对照品溶液[4]。

2.3 线性关系

本次研究对于线性关系的考察如下：精密称取对照品溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，并将抽取的溶液置入 25 mL的量瓶之中，加入流动相稀释到刻度，并摇匀处理。然后按照上述的色谱条件进行测定峰面积，其中，纵坐标为峰面积的积分值，横坐标为进样量[5]。并绘制标准的曲线图，得出回归性方程：Y=1118990X+13871，r=0.9999。其中，线性范围值为 0.2～1.6 μg。

2.4 精密度试验

首先，精密量取2.0 mL的对照品溶液，并将其置入25.0 mL的量瓶之中，并采取流动相进行稀释到刻度，进行摇匀，重复进样5次，每次进行测定20 μL，得峰面积积分值的RSD=0.3%。然后，采取同样的方法量取2.0 mL的供试品溶液，并将其置入25.0 mL的量瓶之中，并采取流动相进行稀释到刻度，进行摇匀，重复进样5次，每次进行测定20 μL，得峰面积积分值的RSD=0.8%。

2.5 稳定性试验

称取同一批的供试品溶液，并且进行分别在2、4、6、8 h时进行进样1次，而且每次进样为20 μL，并详细记录峰面积积分值，其结果显示，在8 h内，氧化苦参碱峰面积无任何的改变，并且其RSD=2.0%。

2.6 重复性试验

称取同一批号的供试品溶液0.5 g，并取5份，同时进行精密称定，并按照样品含量的测定方法进行测定，结果，氧化苦参碱的平均含量值为2.825 mg/g，RSD=1.2%，n=5。

2.7 加样回收试验

选取样品0.5 g，并进行精密称定，加入3.0 mL的对照品溶液，并且按照供试品溶液的制备方法进行制备，并计算有效回收率情况，具体的结果见表1。

2.8 样品测定

精密称取供试品溶液和对照品溶液均2.0 mL，并将其置入25.0 mL的量瓶之中，并采取流动相进行稀释到刻度，摇匀，按照外标法计算氧化苦参碱的含量。具体的数据分析见表2。

3 讨论

蒙药四味土木香散的质量控制中，常常采取HPLC法进行测定苦参碱的含量，但是这种测定的方法并不是很理想，在实际的操作中存在被测峰面积比较小、拖尾和保留时间长等不足点，从而使得整个应用效果并不理想[6-8]。随着人们对其测定的不断研究，采取HPLC法进行氧化苦参碱含量的测定，具有较好的应用效果[9-10]。而且通过本次的临床研究分析，采取HPLC法测定蒙药四味土木香散中氧化苦参碱的含量具有较好的应用效果，而且资料显示，氧化苦参碱在0.2～1.6 μg的范围内和峰面积的线性关系良好，而且平均加样回收率达到了99.6%，RSD=0.5%。因此，采取这种方法可行，具体的分析如下：

表1 蒙药四味土木香散中氧化苦参碱加样回收试验结果分析（n=6）

表2 样品的含量测定结果比较（n=3）

3.1 波长选择

由于紫外分光的光度计测得的样品最大吸收波长在220 nm，而本次研究中采取测定氧化苦参碱样品溶液在220 nm内均具有较好的吸收效果。因此，本次研究选取检测的波长为215 nm，从而有效地提高了试验的准确性[11-12]。

3.2 提取条件

本次研究中对于溶液的制备主要依据 《中国药典》2010年版苦参药材含量的测定方法进行制备[13]。文章采取0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液-甲醇-高氯酸钠（750∶250∶20）这种方法比较方便，而且其重现性也比较好[14]，故选取此条件。

3.3 溶剂选择

由于本次研究的样品中含有成膜的物质，而且这种物质不易溶解于水，而氧化苦参碱比较容易溶于水，因此，本次研究选取了无水乙醇，而且能够有效地稀释成较大的体积，并且减小了其体积的变化，从而避免出现误差[15]。

3.4 处理时间

通过本次的临床研究分析，而且对不同的超声处理时间进行分析，结果发现超声处理40 min后其氧化苦参碱的含量不再变化，而且比较稳定[16]。因此，本次研究中选取超声处理时间为40 min。

综上所述，临床中采取HPLC法进行测定蒙药四味土木香散中氧化苦参碱的含量具有较好的应用效果。这种方法比较简单，而且测定的结果也比较准确，重现性和回收率均比较高[17]，是临床中测定蒙药四味土木香散中氧化苦参碱的有效方法，值得在临床中应用。

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