复方丹参滴丸中丹参素的含量测定

余晓峰

（河南省许昌市中医院，河南 许昌 461000）

复方丹参滴丸中丹参素的含量测定

余晓峰

（河南省许昌市中医院，河南 许昌 461000）

目的建立高效液相法（HPLC）测定复方丹参滴丸中丹参素含量的方法。方法色谱柱为Nucleosil C18色谱柱（250×4.6mm，10μm），以甲醇-水-冰醋酸(21∶78∶1.0)为流动相；柱温为室温；流速为0.9 mL/min；检测波长为280 nm。结果丹参素对照品在0.01～0.10mg/mL范围内呈良好线性关系（r=0.997，n=5），回归方程为A=17371C+3500，平均回收率为100.15%，RSD为4.19%，所测复方丹参滴丸中丹参素的平均含量为8.034mg/g，符合2010版药典对其含量的要求。结论HPLC测定复方丹参滴丸中丹参素含量的方法操作流程简单、快速，准确度高，建议在复方丹参滴丸的质量监控中大力推广使用。

复方丹参滴丸；HPLC；丹参素；含量测定

复方丹参滴丸是一种棕色圆珠形滴丸，气香，味稍苦，临床上其主要作用是活血化瘀、理气止痛，用于治疗胸中憋闷和心绞痛等[1]。经毒理研究证明，复方丹参滴丸是一种无毒性的中药剂型，在临床上治疗中几乎不会产生不良反应[2]。复方丹参滴丸是唯一被美国食品药品安全监督管理局审核通过的中药产品，其生产核心技术应用与研发成为业内企业关注的重点。复方丹参滴丸的主要成分为丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B，据研究丹参素是复方丹参滴丸发挥药理作用的主要有效成分[3]，本文采用了HPLC法测定复方丹参滴丸中丹参素的含量，操作流程简便易懂，结果准确性高，现将操作步骤总结如下，以期为临床上丹参滴丸的质量控制提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

P200Ⅱ型高效液相色谱仪（大连依利特科学仪器有限公司）、20μL定量进样环、UV-3900（日本日立），UV-200Ⅱ型紫外-可变波长检测器、EC2000色谱数据处理工作站、KQ-400DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、电子天平。

1.2 试药

复方丹参滴丸（天津天士力制药股份有限公司）、丹参素对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：100018-200908）、甲醇为色谱纯、冰醋酸为色谱纯、水为蒸馏水、其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Nucleosil C18色谱柱（250×4.6mm，10μm），以甲醇-水-冰醋酸(21∶78∶1.0)为流动相（通过文献和预试验进行色谱条件的优化）。流速为0.9mL/min，20μL定量管进样，柱温为室温[4]。理论板数按照丹参素峰计算应不低于1200。

检测波长的确定：取2.2.1的对照品溶液进行紫外全波长扫描确定丹参素的最大吸收波长为280nm。

2.2 供试液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取丹参素对照品10.0mg，置于10mL容量瓶中，加流动相溶解并且定容。摇匀，过滤。取续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，作为丹参素对照品贮备液。

2.2.2 供试品溶液的制备

取复方丹参滴丸10粒，研成细粉后精确称量，置100mL容量瓶中，加流动相适量(大约80mL)，超声处理15min使其完全均匀溶解于流动相中，放冷并稀释至刻度100mL。摇匀、滤过，取续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得复方丹参滴丸的供溶液试品溶液。

2.3 线性关系的考察

分别精密量取上述配制的对照品溶液0.5mL、1mL、2mL、3mL、5mL至10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀后用0.45μm微孔滤膜过滤，各进样20μL，按上述色谱条件分别测定其峰面积，结果见表1。结果丹参素对照品在0.01～0.10mg/mL范围内呈良好线性关系，回归方程为A=17371C+3500，r=0.997(n=5)。

表1 丹参素的对照品标准曲线

2.4 加样回收试验

精密量取供试品溶液6份，分为3组，分别加入浓度为0.0810、0.2430、0.4050mg/mL的对照品溶液0.5mL于EP管中，摇匀，取续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，进样20μL，每组进样两次。按上述色谱条件测定峰面积，结果丹参素平均回收率为100.15%，RSD为4.19%。试验结果表明，加样回收率良好。

2.5 精密度试验

取浓度为0.1620mg/mL的对照品溶液20μL，按拟定的色谱条件重复进样3次，记录峰面积，RSD为4.05%(n=3)。试验结果表明精密度良好。

2.6 样品测定

取3份“2.2.2”供试液20μL，按拟定的色谱条件进样，记录峰面积，按外标法计算样品中丹参素的含量分别为8.013mg/g、7.925mg/g、8.164mg/g，平均含量为8.034mg/g，符合2010版药典的含量要求。

3 讨 论

复方丹参滴丸是在现代高科技条件下提取出丹和三七的有效成分后，再加入适量冰片而制成的一种新型纯中药滴丸剂，是在中医的传统理论指导下与现代药剂学新技术相结合制备而成的，具有剂量小、服用方便、溶出速度快、起效迅速、可直接经粘膜吸收入血、生物利用度高、疗效高以及无胃肠刺激、无明显毒副作用等多种优点[5]。临床上长期以来用于治疗冠心病和心绞痛等心血管疾病，现在已经成为国内心血管市场上的最主要药物和品牌。

本实验中的对照品溶液在UV-3900下进行紫外光谱扫描（波长为200～600nm之间），结果表明在280nm处丹参素有最大吸收，并且在此波长处其它物质均无吸收，故选择测定波长定为248nm。

高效液相法测定药物制剂中丹参素含量的报导比较多，有报道使用甲醇-水为（20∶80）等流动相。本文对其进行修饰，并进行多次预试验的筛选，考虑到色谱柱的适应能力等诸多因素选择甲醇-水-冰醋酸(21∶78∶1.0)为流动相时，出峰时间以及峰型较佳，保留时间适宜。在测定复方丹参滴丸中丹参素的含量时，其他药物成分均无干扰。本文采用HPLC法对复方丹参滴丸中的丹参素进行含量测定方法的研究，具有操作方法简单以及灵敏度高等优点，由于仪器和人为操作原因RSD有少许误差。总而言之，与其他方法相比较，HPLC法提高了测定时的专属性以及准确性，可用于复方丹参滴丸中丹参素的含量测定，建议临床上丹参滴丸的质量控制时可进行参考。

[1] Chu Y,Zhang L,Wang XY,et al.The effect of Compound Danshen Dripping Pills,a Chinese herb medicine,on the pharmacokinetics and pharmacodynamics of warfarin in rats[J].J Ethnopharmacology, 2011,137(3):1457-1461.

[2] Ng CS,Wang SP.Systematic review and meta -analysis of randomized controlled trials comparing Chinese patent medicines Compound Danshen Dripping Pills and Di'ao Xinxuekang in treating angina pectoris[J].Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao,2012,10 (1):25-34.

[3] 袁琦,赵辉.HPLC法测定复方丹参滴丸中丹参素的含量[J].河南大学学报:医学版,2008,27(2):31-32.

[4] 靳荣.复方丹参滴丸临床新用近况[J].实用中医药杂志,2012,28 (7):610-611.

[5] 丁兰,易爱纯,石峥嵘.高效液相色谱法同时测定复方丹参滴丸中丹参素和原儿茶醛[J].中国实用医药,2008,3(18):70-71.

R927.2

B

1671-8194（2013）17-0085-02