高效液相色谱法测定复方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量

丁 乐

（赣州市妇幼保健院，江西 赣州 341000）

高效液相色谱法测定复方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量

丁 乐

（赣州市妇幼保健院，江西 赣州 341000）

目的 建立HPLC法同时测定复方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量。方法 用Hypersil CN（200mm×4.6mm，5μm）色谱柱，以水-甲醇-四氢呋喃（60∶28∶12）为流动相，检测波长为240nm。结果 醋酸曲安奈德和氯霉素的平均回收率分别为101.0%（RSD为1.23%）和100.1%（RSD为1.40%）；其浓度分别在5.02～100.40μg/mL（r=0.9999，n=5）及99.73～1994.50μg/mL（r=0.9998，n=5）范围内线性关系良好。结论 该方法准确可靠，可用于复方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量测定。

复方醋酸曲安奈德乳膏；HPLC；含量测定

复方醋酸曲安奈德乳膏（去氯霜）是以醋酸曲安奈德和氯霉素（图1）为主药，以硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、白凡士林、十二烷基硫酸钠、羟本乙酯、甘油等为基质制成的乳剂型软膏，是一种糖皮质激素类药物，外用具有抗炎、抗过敏及止痒作用，临床上主要用于过敏性皮炎、湿疹、神经性皮炎、脂溢性皮炎及骚痒症等疾病的治疗，效果良好。已有较多文献[1-3]报道用HPLC法同时测定其中两主药成分的含量，但均用十八烷基键合硅胶作色谱柱，而此色谱柱条件下色谱峰分离度与其保留时间难以协调。本文经过实验研究，采用氰基键合硅胶色谱柱，以水-甲醇-四氢呋喃（60∶28∶12）作为流动相，在此色谱条件下两主成分的峰形、分离度、保留时间均较好，得到了较为理想的结果。

图1 分子结构式（A：醋酸曲安奈德Triamcinolone Acetonide；B：氯霉素chloromycetin）

1 仪器与试药

1.1 仪器

采用Agilent 1100型高效液相色谱仪（二极管阵列检测器），自动定量进样器；HP1100色谱工作站。

1.2 试药

醋酸曲安奈德对照品（中检所，批号：100125-201004）和氯霉素对照品（中检所，批号：130303-201114）；复方醋酸曲安奈德乳膏（批号：20121012，20121120，20121121）及其空白基质均由吉安市中心人民医院提供；甲醇和四氢呋喃均为色谱纯，水为重蒸水。

2 色谱条件

采用Hypersil CN（200mm×4.6mm，5μm）色谱柱，以水-甲醇-四氢呋喃（60∶28∶12）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为240nm，室温为柱温，进样量为20μL。

3 方法与结果

3.1 试液的配制

①对照品储备液的制备：精密称取醋酸曲安奈德、氯霉素对照品适量，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，使制成醋酸曲安奈德、氯霉素浓度分别为0.5mg/mL、10mg/mL的溶液。②对照品溶液的制备：精密量取对照品储备液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释到刻度，摇匀。用移液管移取25～50mL量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。③供试品溶液的制备：精密称取样品5g（共三批，每批称两份）置50mL量瓶中，加甲醇适量，置80℃水浴中加热溶解3min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀；置冰浴中冷冻2h后，过滤。精密量取放置至室温的续滤液25mL，置50mL量瓶中，加水稀释到刻度，过滤，取滤液作为供试品溶液。

3.2 系统适应性实验

在2所述色谱条件下，照3.6样品含量测定项下的方法进行测定，对照品、样品色谱图见图2，醋酸曲安奈德保留时间约10.322'，理论塔板数不小于5000，氯霉素保留时间约为6.438'，理论塔板数不小于3000，分离度＞3。

3.3 空白干扰试验

按处方配比（处方为：醋酸曲安奈德0.5g，氯霉素10g，硬脂酸87.5g，单硬脂酸甘油酯75g，甘油87.5g，白凡士林80g，十二烷基硫酸钠10g，羟苯乙酯1g，2，6-二叔丁基-4-甲基酚0.5g，二甲亚砜1.25g，丙酮1.25g，加纯化水适量使成1000g。制备方法：取单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士林、2，6-二叔丁基-4-甲基酚于水浴中加热融化，保持溶液85℃左右，作为油相；取十二烷基硫酸钠、羟苯乙酯加热水溶解，保持溶液85℃左右，作为水相。将水相缓缓加入油相中，边加边搅拌至乳化完全，降至40℃，加入用二甲亚砜、丙酮、甘油溶解的醋酸曲安奈德和氯霉素，搅拌至匀，冷却即得。）配制空白基质，照供试品溶液制备项下的方法制备空白样品溶液，进样，得到色谱图（图2）。由该色谱图可知，在醋酸曲安奈德和氯霉素相应的位置无干扰峰出现。

3.4 线性试验

精密量取对照品储备液适量，用甲醇-水（50∶50）作溶剂稀释成系列浓度的对照品溶液，分别进样20μL，记录峰面积，以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标进行回归分析，得醋酸曲安奈德回归方程：A=3.65+30.92C(r=0.9999) ；氯霉素回归方程：A=134.85+10.60C（r=0.9998）。结果见表1，由表可知，醋酸曲安奈德在5.02～100.40μg/mL及氯霉素在99.73～1994.50μg/mL的浓度范围内均成良好的线性。

3.5 精密度实验

精密量取适量对照品储备液，用甲醇-水（50∶50）作溶剂制成含醋酸曲安奈德25μg/mL、氯霉素500μg/mL的对照品溶液，精密量取20μL按2所述色谱条件连续进样6次，记录其峰面积，计算得醋酸曲安奈德峰面积的RSD为0.35%，氯霉素峰面积的RSD为0.11%。结果见表2，由表2可知，该实验方法精密度良好。

图2 HPLC色谱图（A：对照品溶液；B：空白基质；C：样品溶液）

表1 线性实验结果

表2 精密度实验结果

表3 醋酸曲安奈德回收率情况

表4 氯霉素回收情况

3.6 回收试验

按处方比例配置各含醋酸曲安奈德及氯霉素为标示量80%、100%、120%的模拟样品九份，按含量测定项下的方法制备供试品溶液并进行含量测定，按外标法计算回收率。醋酸曲安奈德和氯霉素的平均回收率分别为101.0%（RSD为1.23%，n=9）和100.1%（RSD为1.40%，n=9）。其结果见表3和表4，由表可知该实验方法回收率良好。

3.7 样品含量测定

取3.1项下对照品溶液及供试品溶液，分别进样20μL，记录峰面积，按外标法计算醋酸曲安奈德和氯霉素的含量，其结果见表5。

表5 样品测定结果

4 讨 论

4.1 色谱柱的选择

文献报道所用的色谱柱均为十八烷基键合硅胶柱，经试验发现，该柱虽可完全分离这两组分，但氯霉素和醋酸曲安奈德的保留时间相差较大，氯霉素几乎无保留，而醋酸曲安奈德的出峰时间较长。考虑到氯霉素极性较强，为增加其保留时间，特考虑采用极性较强的氰基键合硅胶色谱柱。试验表明，在使用该色谱柱的条件下，两组分不仅能很好的分离，而且保留时间恰当，在12min内可以完成色谱分析。

4.2 流动相的选择

若单纯采用甲醇和水作流动相，则氯霉素与辅料中羟苯乙酯的分离度达不到要求，随着改性剂四氢呋喃的加入，氯霉素与羟苯乙酯能很好的分离，综合考虑各种因素如各峰的分离度、保留时间及流动相的黏度，故确定了本文的流动相比例。

4.3 溶剂的选择

本实验过程中曾试过选择用甲醇-水(50∶50)作溶剂溶解样品，但回收率较低；后改为先用甲醇溶解，再在最后一步增加水稀释至刻度[相当于甲醇-水（50∶50）]，一是可以排除一部分基质的干扰，延长色谱柱的使用寿命，二是峰形也有所改善，回收率也较好。

4.4 检测波长的选择

因处方中两主成分的含量相差20倍，故选择对醋酸曲安奈德更为敏感的240nm波长为检测波长。

[1] 李莉,赵作连.李晓敏,等.HPLC法测定曲氯霜中氯霉素和醋酸曲安奈德的含量[J].中国药事,2006,29(9):539-540.

[2] 李爱英,赵作连.HPLC法同时测定曲氯乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量[J].药物分析杂志,2007,27(2):272.

[3] 张红,谈宇英.高效液相色谱法测定复方醋酸曲安奈德乳膏中2组分的含量[J].中国医院药学杂志,2004,24(12):795-796.

R917

B

1671-8194（2013）23-0062-03