高效价冷凝集素对交叉配血的影响及消除方法的探讨

杜 兴 王龙刚 孙建文*

(中国人民解放军第八五医院检验科，上海 200052)

高效价冷凝集素对交叉配血的影响及消除方法的探讨

杜 兴 王龙刚 孙建文*

(中国人民解放军第八五医院检验科，上海 200052)

【墒要】目的 探讨高效价冷凝集素对血常规血型鉴定和交叉配血的影响及消除方法。方法 通过临床病例分析、红细胞ABO血型鉴定、血清抗体筛选、抗体鉴定、冷凝集素效价测定等血型血清学检测来查找配血困难原因。结果 高效价冷凝集素常造成一些常规检验项目失真，最常见的影响就是对血常规，血型鉴定，尤其是对交叉配血的干扰。与自身红细胞发生明显凝集，使血型鉴定出现失误，并干扰交叉配血，因错误输血而导致自身免疫性红细胞破坏，引发严重的临床症状。结论 高效价冷凝集素干扰交叉配血时，应选择有价值的鉴别试验，如复核血型、自身对照试验，抗人球蛋白试验、聚凝胺法交叉配血试验等进行多方面排除、鉴定，以确保临床用血的安全有效性。

冷凝集素；血常规；血型鉴定；交叉配血

冷凝集素又称冷型自身抗体、冷型血凝素或冷型溶血素，是红细胞自身免疫性抗体，其特点是在低温时，与自身的红细胞发生凝集，体外最适反应温度为4～27℃，4℃时反应最强[1]。临床上患者血清中冷凝集素抗体滴度的增高，会给交叉配血试验带来困难，在对这些患者进行交叉配血试验时，避免冷凝集素对其的影响就显得尤为重要[2-5]。为确保临床用血的安全性，现对高效价冷凝集素致临床配血的影响进行分析如下

1 资料与方法

1.1 临床资料

患者，男，53岁，2012年12月因胆囊癌内科治疗入院，既往有胆囊结石多年，无输血史、药物过敏史及接触放射性物质，无家族性遗传病。查血常规RBC 1.39×1012/L，Hb 43g/L。因贫血明显，临床考虑给予输血，申请2个单位红细胞悬液。临床查血型为A型，Rh阳性。在室温交叉配血时，凝聚胺法出现主侧凝集，次侧呈小颗粒状凝集（室温20℃）。重复操作结果相同。重新抽取新鲜标本送至血液中心要求协助排查不规则抗体。其检测结果如下：多特异性抗球蛋白试验：多抗-IgGC3（-）、单抗-IgG（-），抗-C3试验（-）、盐水对照（-）（取放散后的患者红细胞检测），其他试验：血清中未检出IgG类不规则抗体。

考虑冷凝集素影响，随后复查血常规均在室温和37℃进行。结果见表1。

表1 血常规在室温和37℃进行的结果比较

1.2 方法

1.2.1 血型血清型检测

①试剂：抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体），人ABO血型反定型用红细胞试剂盒，RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体），改良凝聚胺试剂盒均为上海血液生物医药有限责任公司产品。②检测方法：ABO血型鉴定、Rh血型鉴定均按说明书进行操作；③冷凝集素抗体滴度的测定：取患者不抗凝的静脉血2mL，置37℃孵育，凝固后分离血清；取患者抗凝血1mL，以温生理盐水洗涤红细胞3次，最后配成2%的红细胞悬液；取10支小试管，每管加生理盐水0.2mL，第一管加血清0.2mL，逐管稀释至第9管，混匀后弃去0.2mL，第10管作对照；每管加2%红细胞悬液0.2mL，摇匀，置4℃冰箱中12h后观察结果。记录有明显凝集的最后一管的滴度，若第9管仍然有凝集可继续稀释观察其最高滴度。滴度＞1∶32有诊断意义，滴度＜1∶32无明确临床意义。

1.2.2 交叉配血试验

与A型献血者在室温（20℃）进行盐水法及凝聚胺配血法，操作按说明书进行，主侧出现凝集，次侧也出现凝集，配血不和；随后用温盐水将患者红细胞洗涤3次，配置2%～5%左右的红细胞悬液，再次进行交叉配血。判读结果在37℃的环境下进行，取出试管轻轻混合观察结果；镜下观察时先将玻片置于37℃的温箱内预热。

2 结 果

2.1 患者红细胞ABO血型鉴定20℃和37℃的结果见表2。

表2 患者红细胞ABO血型鉴定20℃和37℃的结果

2.2 多特异性抗球蛋白试验：多抗-Ig G C3（-）、单抗-Ig G（-），抗-C3试验（-）、盐水对照（-）（取放散后的患者红细胞检测）。

2.3 不规则抗体试验：血清中未检出IgG类不规则抗体。

2.4 冷凝集素试验：在患者的血清中加入血型相同或O型的正常人的红细胞，在31℃以下可见红细胞凝集，置于4℃冰箱可见明显凝集，将温度回升至37℃，凝集又消失。

2.5 冷凝集素抗体效价测定：此患者冷抗体效价为1∶256。

2.6 交叉配血试验：盐水法及凝聚胺法交叉配血试验，室温下主、次管都有不同程度的凝集颗粒出现，部分较明显，之后用处理后的患者血清，红细胞做盐水法及凝聚胺交叉配血，在37℃环境下轻轻摇动，主次侧均无凝集，倒入预温的玻片，显微镜下可见红细胞散在、弥漫排列，可以排除其他亚型抗体导致免疫反应影响结果，交叉配血成功。

2.7 输血反应：保温缓慢输注交叉配血成功的A型红细胞悬液，患者无不良反应。

3 讨 论

Land于1913年首次对冷凝集素（Cold agglutinin，CA）进行报道。一般正常人的血清中存在CA，其效价不超过1∶16[6]，通常不会导致自身血细胞凝集。当温度低于某一特定温度时，循环中的自身抗体就会与红细胞抗原相结合。其范围4～35℃，通常低于25℃。文中患者血样检测温度为22℃。但在某些疾病时，其效价往往＞1∶64，最常见于支原体肺炎，患者自身免疫性贫血、阵发性血红蛋白尿、传染性单核细胞增多症、白血病、急性肝硬化、病毒性肺炎、支原体性肺炎、精神分裂症、高龄孕产妇也均可引起冷凝集素短时间升高[7]，即高效价冷凝集素。高效价冷凝集素会造成常规检验项目的失真，最常见的影响就是对血常规。血清中冷凝集素一般系抗红细胞I抗原的抗体(IgM)，它能与患者自身红细胞或O型人红细胞在32℃以下发生凝集(0～4℃活性最强)，在37℃时已凝集的红细胞呈可逆性完全散开[8,9]。本实验也观察到这一现象，一般正常人Hb/RBC的比值约为30∶1(Hb的单位为“g/L”，RBC的单位为“1012/L”)[10]，由表1可见在室温时患者红细胞和血红蛋白含量相差悬殊，患者血样有细小的颗粒状凝集，温度升至37℃散开。高效价冷凝集素对血型鉴定以及交叉配血试验的影响更是不言而喻。由表2知患者血型正定型A型，反定型B，O均凝集，故添加自身对照试验。自身对照为阳性，该患者无输血史，家族史，不规则抗体筛查阴性，正反定型不一致考虑可能为冷凝集素所致，故逐将血型管置于37℃水浴箱中，10min后观察结果，反定型O凝集较之前明显减少，升温至37℃，凝集均消失，初步定为“A”型；用37℃ 0.9%生理盐水将患者红细胞洗涤3次，做正定型为A型。用凝聚胺法进行交叉配血，严格按照冷凝集素抗体存在的情况下进行操作，先用温盐水洗涤患者红细胞，配置2%～5%左右的红细胞悬液，判读结果在37℃的环境下进行，镜下观察时将玻片置于37℃的温箱内预热，患者血液最终交叉配血成功，先后成功输入4个单位的红细胞悬液。证实患者血清中确实含有高效价的冷凝集素。随后将患者血清经连续倍比稀释测得患者冷凝集素效价在4℃为1∶256。

在冬季遇到红细胞和血红蛋白含量相差悬殊，血型鉴定正反定型不符和交叉配血不相合时，应考虑高效价冷凝集素的存在与否，同时排除血清中可能存在的其他不规则抗体。若存在高效价冷凝集素，在进行血细胞分析样本时，应仔细观察样本，在审核报告单时重点审查Hb/RBC的比值，尤其是MCHC，可以帮助及时发现严重错误。做血型鉴定及交叉配血时，环境温度严格控制在37℃进行，配血时应注意与血清中可能存在的其他不规则抗体相鉴别，特别是Rh抗-D，最好用“1+1”配血法，即除用盐水法配血外，还应加做酶法或抗人球蛋白或聚凝胺法配血，以选择相容的同型血输注，同时镜检是不可避免的环节。另外建议此类患者尽量少输血，输入的血必须选择与同种抗体相溶的血液，血液在输入之前在37℃水浴适当加温，输入过程中保温缓慢滴入，这样可以使患者用血更安全有效。对于临床检验及血库工作人员，在工作中难免会碰到高效价冷凝集素的病例，只有认真仔细的对待，其对血常规，血型鉴定及交叉配血的影响才能被及时发现，从而确保临床用血的安全有效性。

[1] 丁振若,于文彬.苏明权.现代检验医学[M].北京:人民军医出版社,2007:818-819.

[2] 周建月,韦喜敢,杨海燕.冷抗体对血型鉴定和交叉配血的干扰及处理方法[J].检验医学与临床,2011,8(1):55-57.

[3] 林国连,詹奕荣,刘红杏,等.冷凝集素对血型鉴定和交叉配血的影响相关研究分析[J].河北医学,2010,16(3):302-304.

[4] 杨世明,曹丽妍,张勇萍,等.自身冷抗体对血型鉴定和交叉配血试验的影响[J].第四军医大学学报,2009,30(8):50.

[5] 姜燕娟,庞桂芝,张趁利.高效价冷自身抗体引起血型鉴定及配血困难1例[J].临床血液学杂志:输血与检验版,2008,21(5): 520-520.

[6] 洪玲珍.室温下冷凝集素干扰血液分析仪多项检测参数1例[J].实用医学杂志,2008,24(8):1347.

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[10] 肖秀林.血细胞分析后的质量保证[J].实用医技杂志,2007,14 (5):569.

Influence Investigation of High Titer Cold Agglutinin on Clinical Cross-matching Test and Its Eliminate Measures

DU Xing, WANG Long-gang, SUN Jian-wen
(Department of Clinical Laboratory, 85th Hospital of PLA, Shanghai 200052, China)

Objective To investigate the effect of high titer cold agglutinin on clinical cross-matching test and its eliminate measures. Methods The result of cross-matching test trouble that high titer cold agglutinins caused was searched by medical record analysis, ABO blood group identification, serum antibody screening, antibody identification, cold agglutinin titration, etc. Results The reason of disturbing routine blood, blood group identification and cross-matching blood test, the presence of high-titer cold agglutinins usually cause routine inspection items misfit by causing obvious agglutination with its own red blood cells, and make mistakes to blood type identification, or interfere with cross-matching blood test, sometimes destruct autoimmune red blood cell caused by transfusion errors, even trigger severe clinical symptoms. Conclusion When high-titer cold agglutinins interfering with cross-matching blood test, valuable identification tests should be thought so as to make sure with safety and efficacy of blood clinical using, such as depleted and identified by countercheck blood type, autoantibody absorption test, antiglobulin test of coombs, polybrene cross-matching blood test, irradiation teat.

Cold agglutinin; Routine blood test; Blood group identification; Cross-matching test

R446.11

B

1671-8194（2013）23-0026-02

*通讯作者：E-mail：doctorsjw@hotmail.com