硫酸阿托品滴眼液含量测定方法的改进

范本冲，范义凤

（南通大学附属医院药剂科，江苏226001）

硫酸阿托品为阻断M胆碱受体的抗胆碱药，对眼的影响表现为扩瞳、升高眼压、调节功能麻痹，临床用于虹膜睫状体炎、角膜炎、巩膜炎及检查眼底等。我院制剂室根据《中国医院制剂规范》（西药制剂）第2版[1]配制硫酸阿托品滴眼液，采用氢氧化钠滴定液（0.02 mol·L-1）中和滴定以测定其中硫酸阿托品的含量，但本法测出硫酸阿托品的含量一直偏高。文献报道硫酸阿托品滴眼液中硫酸阿托品的含量测定方法有紫外分光光度法[2-3]、酸性染料比色法[4]、系数倍率法[5]、高效液相色谱法[6]等。本文采用高效液相色谱法测定硫酸阿托品滴眼液的含量，并与中和法进行了比较，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器：Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），Cary100紫外分光光度计（美国瓦里安公司），BP211D型电子天平（德国Satrorius公司）。

1.1.2 试药：硫酸阿托品对照品（中国药品生物制品检定所，批号0040-9109），硫酸阿托品原料（北京双鹤药业有限公司，批号050402），甲醇（色谱纯，国药集团化学制剂有限公司，批号081109），磷酸二氢钾（南京化剂厂,批号071224），氯化钠(南通勤奋制药厂，批号050206),羟甲基苯甲酸乙酯（广东省台州市新华制药厂，批号050801），氯仿、乙醇均为分析纯，氢氧化钠滴定液（0.02mol·L-1）、酚酞指示液均按中华人民共和国药典（2010年版）附录配制。样品：硫酸阿托品滴眼液（本院制剂室，批号110507,110819,111125），空白滴眼液（按处方配制，不含硫酸阿托品）。

1.2 方法与结果

1.2.1 中和滴定法：《中国医院制剂规范》（西药制剂）第2版中硫酸阿托品滴眼液的含量测定方法为：精密量取硫酸阿托品滴眼液5mL，加中性乙醇与中性三氯甲烷（对酚酞指示液显中性）各5mL，酚酞指示液 3 滴，用氢氧化钠滴定液（0.02 mol·L-1）滴定，至溶液显淡红色，即得。每1mL的氢氧化钠滴定液（0.02 mol·L-1） 相当于 6.948mg的硫酸阿托品（C17H23NO3）·H2SO4·H2O。

1.2.2 高效液相色谱法

1.2.2.1 系统适应性试验：色谱柱为Sino Chrom ODS-BP C18柱（5μm，4.6×150mm），流动相为甲醇-0.5%磷酸二氢钾（35:65），流速为 1.0 mL·min-1，检测波长为217nm。精密称取105℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品50mg，置50mL量瓶中加水溶解至刻度，摇匀，作为贮备液。取此贮备液5.0mL置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下，进样20μL测定峰面积，结果硫酸阿托品与杂质峰分离良好，理论塔板数达4000以上，高效液相色谱图见图1。

图1 阿托品高效液相色谱图

1.2.2.2 标准曲线的制备：精密量取2.2.1项下的贮备液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL，置 25mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，配成系列标准溶液，按2.2.1项色谱条件分别进样20μL，测定峰面积，以峰面积对其浓度进行线性回归，得回归方程为A峰=14.9727C+24.3857（r=0.9999），在 40.0～160.0μg·mL-1范围内峰面积与浓度线性关系良好。

1.2.2.3 回收率试验：分别精密称取105℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品40、50、60mg各3份，分别置50mL量瓶中，同时按处方比例分别加入其余辅料配成低、中、高（80%、100%、120%）3种溶液，加水适量使溶解并加水稀释至刻度。精密量取溶液5mL置50mL量瓶中加水稀释刻度，摇匀。进样20μL测定回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=9）

1.2.2.4 精密度测定：取标准曲线项下41.08μg·mL-1，102.7μg·mL-1，164.32μg·mL-1低、中、高三种浓度的溶液，吸取20μL注入高效液相色谱仪，连续进样5次，测定峰面积，计算日内RSD分别为0.65%、0.48%、0.35%，日间 RSD分别为 1.82%、1.26%、0.76%。

1.2.2.5 样品的含量测定：精密量取硫酸阿托品滴眼液1.0mL置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按2.2.1项下的色谱条件进样20μL测定其峰面积，并代入回归方程计算含量,并与中和滴定法（原法测定）进行比较，结果见表2。

表2 样品的含量测定结果、相当标示量（%）

3 讨 论

硫酸阿托品为硫酸盐的生物碱，《中国医院制剂规范》（西药制剂）第2版的含量测定方法采用氢氧化钠滴定液中和滴定其硫酸根离子以测定硫酸阿托品的含量。该方法简单，所需仪器设备较少，药检人员容易掌握。但中和滴定法容易受指示剂、所用试剂及标准液等因素影响，滴定终点判断也容易造成误差，导致结果偏低或偏高。从本实验样品含量测定结果可以看出，中和滴定法的测得结果比高效液相色谱法测得的结果约高4%，主要是由于硫酸阿托品分子中含有酯键，它在弱酸性及近中性条件下较稳定，在碱性溶液中分解（如加热则分解更迅速），生成莨菪酸及莨菪醇。由于采用的是酸碱中和滴定，分解后生成的莨菪酸也会消耗一定量的氢氧化钠标准液，所以导致硫酸阿托品含量测定结果偏高。由于《中国医院制剂规范》（西药制剂）第2版规定硫酸阿托品滴眼液的含量范围为90%～110%，此方法仍能基本满足医院制剂室的含量测定要求。

流动相的选择曾采用文献方法[5]选择其流动相为乙腈：水（含1%三乙胺，用磷酸调pH5.8）55∶45进行实验，但在做的过程中发现，由于仪器不同、色谱柱不同，所以重复性较差，无法进行实验。后采用文献报道过HPLC法测定消旋山莨菪凝胶的含量[7]，选用的是甲醇-0.5%磷酸二氢钾（22:78）作为流动相进行试验，因硫酸阿托品的结构和消旋山莨菪碱相似，仅相差一个羟基，所以我们选用相同的流动相，但出峰时间较长，因此改变了流动相物质之间的配比为35:65，结果表明，各峰分离良好，保留时间适宜，故选用此流动相。

高效液相色谱法测定硫酸阿托品滴眼液的含量结果较为准确，可不受辅料羟苯乙酯的干扰，不经分离直接测定硫酸阿托品的含量，能克服中和滴定法的缺点，但按此方法需要一定的仪器设备。医院制剂室可根据现有的仪器设备等条件，选用适宜的方法。

[1]中华人民共和国卫生部药政局.中国医院制剂规范（西药制剂）[M].2版.北京:中国医药科技出版社,1995：82.

[2]黎奔,梁球.紫外分光光度法测定硫酸阿托品眼药水的液含量[J].中国医院药学杂志,1989,9(7):315-316.

[3]董秀，胡克忠.联立方程新解法测定硫酸阿托品滴眼液含量[J].中国现代应用药学杂志，2001，18(1)：67-68.

[4]邓朝晖，刘银生，葛碧谨.复方硫酸阿托品滴眼液中硫酸阿托品含量测定方法研究[J].中国药业，2000，9(9)：23-24..

[5]屈悦.系数倍率法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].中国药师,2005,8(5):436-437.

[6]孙东凯，李季静，胡凤婷.HPLC法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].首都医药,2007,18(9):52.

[7]范义凤，李德明，王华.消旋山莨菪碱凝胶的制备及质量控制[J].中国药房，2007,18（10）：766-767.