双价肾综合征出血热灭活疫苗（地鼠肾细胞）细菌内毒素检查法

2013-06-19费刚

中国医药指南 2013年1期

关键词：检查法内毒素药典

费刚

(吉林长春物制品研究所疫苗三室，吉林长春 130062)

双价肾综合征出血热灭活疫苗（地鼠肾细胞）细菌内毒素检查法

费刚

(吉林长春物制品研究所疫苗三室，吉林长春 130062)

目的建立双价肾综合征出血热灭活疫苗（地鼠肾细胞）细菌内毒素检查法。方法细菌内毒素检查的定量测定法与凝胶限量法两种方法进行干扰实验。结果通过样品进行适当的稀释，凝胶法：样品浓度为1.2×10-3mg/mL，使用灵敏度为0，06EU/mL的鲎试剂进行细菌内毒素检查无干扰作用；定量测定：与凝胶法相同的样品浓度回收率好，无干扰作用。结论双价肾综合征出血热灭活疫苗（地鼠肾细胞）可以建立细菌内毒素检查法。

双价肾综合征出血热灭活疫苗（地鼠肾细胞）；细菌内毒素检查法；干扰作用

双价肾综合征出血热灭活疫苗（地鼠肾细胞）双价肾综合征出血热灭活疫苗（地鼠肾细胞）在2000年版中国生物制品规程中执行热原检查法[1]，2005年版中国药典三部中规定执行细菌内毒素检查法，检查内容为每瓶（1.0 mL）应不高于100 EU/剂，2010年版中国药典三部中规定执行细菌内毒素检查法毒（凝胶限度试验），检查内容为每瓶（1.0 mL）应不高于50 EU/剂。鉴于细菌内素检查法有快速、准确、灵敏、经济适用等特点，本文采用细菌内毒素定量检查法和凝胶法两种方法进行实验，评价2010年版中国药典中双价肾综合征出血热灭活疫苗（地鼠肾细胞）对细菌内毒素检查的影响[1]，现报道如下。

1 实验材料与仪器

1.1 鲎试剂（TAL）

1.1.1 凝胶法鲎试剂

批号：0909021，灵敏度：0.25EU/mL；批号：0910014，灵敏度：0.125EU/mL；批号：0907012，灵敏度：0.06EU/mL。来源：湛江博康海洋生物有限公司。

1.1.2 内毒素动态浊度法鲎试剂

批号：0908120，规格：1.2mL/支，灵敏度：0.06EU/mL。来源：湛江博康海洋生物有限公司。

1.2 细菌内毒素检查用水

批号：0905100，规格：50mL。来源：湛江博康海洋生物有限公司。

1.3 细菌内毒素国家标准

批号：931，效价：9000 EU/支；来源：湛江博康海洋生物有限公司。

1.4 样品（S）

双价肾综合征出血热灭活疫苗（地鼠肾细胞）；批号：20091005、20091106、20091107。来源：长春生物制品研究所。

1.5 EDS—细菌内毒素定量检测仪

来源：湛江博康海洋生物有限公司。

2 实验方法与结果

2.1 样品内毒素限值（L）的确定

中国药典2010年版三部细菌内毒素检查法中规定应不高于50 EU/剂（50 EU/ mL）。

2.2 样品的制备

由样品最小浓度MVC=λ/L，当λ为0.25EU/mL、0.125EU/mL、0.06EU/mL时，MVC分别为5×10-3mg /mL、2.5×10-3mg /mL、1.2× 10-3mg /mL。

2.3 鲎试剂灵敏度复合实验

结果符合药典规定。

2.4 样品凝胶法干扰试验

2.4.1 样品的初选试验

结果符合药典规定。样品的干扰试验：当样品浓度为5×10-3mg /mL时对2 λ内毒素产生凝集反应，浓度为2.5×10-3mg/mL的溶液，使用灵敏度为0.125EU/mL的鲎试剂进行干扰验证试验，结果符合规定。

2.4.2 取样品浓度为1.2×10-3mg /mL的溶液，干扰实验（0.06EU/ mL）的鲎试剂进行，结果表明，该浓度下的样品已经消除对鲎试剂试验的抑制作用，光度测定法取样品浓度为5×10-3mg /mL、2.5× 10-3mg /mL、1.2×10-3mg /mL的三种溶液进行细菌内毒素定量测定。见表1。

表1 标准曲线的数据

R=-0.9826，从中可以看出，样品溶液浓度为5×10-3mg /mL，回收率仅为55.9%、59.2%，还有抑制作用，而将浓度降为2.5×10-3mg /mL、1.2×10-3mg /mL时，回收率均上升至92%～119%。结果表明稀释倍数逐渐增加情况下，供试品干扰因素逐渐减少，逐渐排除了鲎试剂与内毒素的干扰作用。