新疆地区维、汉族幽门螺旋杆菌临床分离菌株对左氧氟沙星耐药分析

李 娜 ，聂占国，刘正祥，张 新

1.石河子大学医学院，新疆石河子832000;2.兰州军区乌鲁木齐总医院消化中心;3.兰州军区乌鲁木齐总医院检验科

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)定植于人类胃黏膜，其致病性和毒力均很强，它在多种消化道疾病的发生和发展中扮演重要角色。质子泵抑制剂和两种抗生素的三联疗法是国内外推荐的H.pylori根除治疗的方案。近年来，由于H.pylori对现常用一线药物耐药率逐渐升高，导致其根除失败率也逐渐上升［1］。左氧氟沙星属于第一代氟喹诺酮类药物，以其抗菌谱广、毒性较小等特点被国内外H.pylori感染治疗指南推荐为H.pylori根除治疗初治或挽救治疗的药物之一［2］。但现有研究报道的H.pylori对左氧氟沙星耐药率差别较大。目前，尚未见新疆地区H.pylori对左氧氟沙星耐药现状及汉维两民族耐药率是否有差异的报道。本研究应用E-test法检测对比了新疆地区维汉族H.pylori对左氧氟沙星耐药状况，以便指导临床用药。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2011年10月-2012年10月在乌鲁木齐军区总医院、新疆医科大第一附属医院胃镜中心因消化道症状接受胃镜检查的H.pylori感染患者。纳入标准:(1)14C呼气试验阳性;(2)民族为汉族、维族，且均为三代纯系民族，年龄18～80岁;(3)两周内未服用过抗生素、铋剂、H2RA和质子泵抑制剂(PPI)、激素、非甾体类抗炎药及未进行过根除H.pylori治疗者;(4)无严重心、肝、肺肾疾病史及胃手术史的患者;(5)所有入选患者均对本试验知情同意。

1.2 方法

1.2.1 H.pylori菌株的分离培养:在胃镜下于患者胃窦部小弯侧距幽门2～3 cm处用无菌活检钳钳取胃黏膜组织2块，放于装有转运培养液的EP管中，用冰块保存，送至检验科接种在H.pylori选择培养基上，置于密闭培养罐中，加入微需氧产气袋(日本三菱公司)，将其放置在37℃的恒温孵育箱中培养3～7 d观察结果。

1.2.2 H.pylori菌株的鉴定:(1)菌落为无色透明，针尖样大小;(2)革兰染色为阴性，镜下呈多形性，主要为弧形、海鸥状;(3)生化反应结果:尿素酶(福建三强生物化工有限公司)、氧化酶(广东环凯微生物科技有限公司)、触酶试验均为阳性。

1.2.3 H.pylori菌株的传代培养:将分离出的原代培养菌落用无菌接种环接种在H.pylori传代培养基上，置于微需氧、37℃恒温环境中培养3 d。

1.2.4 左氧氟沙星药敏试验:将传代培养的H.pylori分离菌株用4.5%的盐水配成细菌悬液，在麦氏比浊仪上调整为约2个麦氏单位。将无菌棉签浸入菌液，分三个方向均匀涂布在含有7%～10%脱纤维羊血的90 mm M-H药敏培养基上，晾干后放置左氧氟沙星E-test药敏试纸条(梅里埃)，于微需氧、37℃恒温环境中培养3 d后，根据厂家说明读取药敏结果。药敏结果判定:左氧氟沙星最低抑菌浓度(MIC)≥1.0 mg/L为耐药。

1.3 统计学分析 采用SPSS 17.0统计软件处理实验数据，计数资料以率表示。数据间比较用χ2检验(四格表、R×C列表)，P＜0.05为差异有统计学意义。分析比较不同民族、性别、年龄和疾病类型中H.pylori临床分离菌株对左氧氟沙星的耐药率。

2 结果

2.1 基本情况 本研究共入组60例患者，男34例，女26例;年龄18～68岁;民族:汉族、维族各30例，汉族男15例、女15例，维族男19例、女11例;镜下诊断:消化性溃疡29例，胃炎31例。

2.2 H.pylori对左氧氟沙星耐药情况及汉维族分布分离培养的60株H.pylori菌株中，敏感35株，耐药25株，总耐药率为41.67%。在30株汉族H.pylori菌株中，敏感18株，耐药12株，耐药率为40.00%，占总耐药率的48.00%;在30株维族H.pylori菌株中，敏感17株，耐药13株，耐药率为43.33%，占总耐药率的52.00%。

2.3 H.pylori菌株对左氧氟沙星耐药与患者民族、性别、年龄、及疾病的关系 耐药菌株与患者民族、性别、年龄及疾病的关系相比较，差异无统计学意义(P＞0.05，见表1)。

表1 H.pylori对左氧氟沙星的耐药与患者民族、性别、年龄及疾病的关系［例数(%)］Tab1 H.pylori resistant to levofloxacin and ethnic，gender，age of patients and disease relations［n(%)］

3 讨论

H.pylori对抗生素耐药性的产生导致其根除率下降了70%［3］，是H.pylori根除失败的主要原因之一。因此，长期监测H.pylori对常用抗生素的耐药率对指导临床合理用药是十分必要的。

随着左氧氟沙星在临床治疗中的广泛应用，H.pylori对左氧氟沙星的耐药率也逐渐升高，这限制了其在H.pylori根除治疗中的应用。芬兰的一项研究［4］显示:2000年-2008年H.pylori对左氧氟沙星的耐药率从0上升至12%。不同的国家和地区H.pylori对左氧氟沙星的耐药率不同，马来西亚、波兰的耐药率相对较低，分别为1%［5］、5%［6］;而意大利的 H.pylori对左氧氟沙星的耐药率则相对较高，为19.1%［7］。国内的相关报道也显示H.pylori对左氧氟沙星耐药率存在很大差异，贵州、咸宁地区H.pylori对左氧氟沙星的耐药率较低，分别为 3.33%［8］、6.4%［9］，而杭州则相对较高，为17.1%［10］，上海市青浦区更是高达41.7%［11］。本试验用E-test法对60株H.pylori临床分离菌株对左氧氟沙星耐药性研究显示:新疆地区H.pylori临床分离菌株对左氧氟沙星的耐药率为41.67%，高于国内外报道。基因突变是细菌对抗生素耐药性产生的内在因素，H.pylori对喹诺酮类药物产生耐药可能与gyrA基因突变有关［12］。但多数的基因突变是由于长期反复使用同类药物所诱发的。细菌对喹诺酮类药物原发性耐药较为少见，多为获得性耐药，且存在交叉耐药性［13］。H.pylori对左氧氟沙星耐药率不同可能主要与不同地区的喹诺酮类药物使用情况有关，对喹诺酮类药物使用较多的地区，H.pylori对其耐药率也相应较高。朱晓庆等［14］对新疆地区3家二级医院抗菌药物利用分析中显示喹诺酮类药物在手术患者和非手术患者中的应用率较高，排第3位。张倩等［15］在2007年-2009年新疆某医院喹诺酮类药物应用分析的调查研究中也显示左氧氟沙星注射剂的销售金额和用药频度在三年内始终保持第1位。笔者对本试验标本来源的两家三级甲等医院及本地区药店调查显示本地区喹诺酮类药物特别是左氧氟沙星的使用率及购买率一直保持在较高水平。因此，新疆地区H.pylori对左氧氟沙星的耐药率较高，可能与本地区左氧氟沙星的临床用药率较高有关，也可能与本地区其他喹诺酮类药物较多使用而引起的交叉耐药有一定联系。

H.pylori对抗生素耐药性的产生还可能与患者的年龄、性别、所患疾病及种族等有关［16］。新疆是多民族聚居的地区，不同民族之间的生活习惯、医疗卫生条件、就医意识不同，H.pylori对常用抗生素耐药率可能存在差异，但本研究显示:汉维两族之间H.pylori对左氧氟沙星耐药率差异无统计学意义。且本地区H.pylori对左氧氟沙星耐药性与年龄、性别无关，这与国内外其他研究［17］相一致。本研究显示H.pylori对左氧氟沙星耐药性与患者所患胃部疾病无关，与谭鹤龙等［11］的研究不同，可能与地区差异相关，也可能是由于标本例数过少产生偏倚所致，还有待进一步研究。

本研究显示新疆地区H.pylori对左氧氟沙星耐药情况已经相当严重，且H.pylori对左氧氟沙星耐药性的产生与患者的民族、性别、年龄、疾病无关。因此，在制定H.pylori的根除方案时应避免选择左氧氟沙星或在使用前询问患者既往使用喹诺酮类药物的情况，有条件最好做药敏实验，根据药敏结果选择根除药物。

［1］Megraud F.H.pylori antibiotic resistance:prevalence，importance，and advances in testing［J］.Gut，2004，53(9):1374-1384.

［2］World Organization of Gastroenterology.World Organization of Gastroenterology(WGO-OMG E)Clinical Guidelines-Helicobacter pylori infection in developing countries［J］.Chin J Gastroenterol，2007，12(1):40-52.世界胃肠病学组织.世界胃肠病学组织(WGO-OMG E)临床指南—发展中国家幽门螺杆菌感染［J］.胃肠病学，2007，12(1):40-52.

［3］O’Connor A，Gisbert JP，McNamara D，et al.Treatment of Helicobacter pylori infection 2010［J］.Helicobacter，2010，15(1):46-52.

［4］Kostamo P，Veijola L，Oksanen A，et al.Recent trends in primary antimicrobial resistance of Helicobacter pylori in Finland［J］.Int J Antimicrob Agents，2011，37(1):22-25.

［5］Ahmad N，Zakaria WR，Mohamed R.Analysis of antibiotic susceptibility patterns of Helicobacter pylori isolates from Malaysia［J］.Helicobacter，2011，16(1):47-51.

［6］Karczewska E，Wojtas-Bonior I，Sito E，et al.Primary and secondary clarithromycin，metronidazole，amoxicillin and levofloxacin resistance to Helicobacter pylori in southern Poland［J］.Pharmacol Rep，2011，63(3):799-807.

［7］Zullo A，Perna F，Hassan C，et al.Primary antibiotic resistance in Helicobacter pylori strains isolated in northern and central Italy［J］.Aliment Pharmacol Ther，2007，25(12):1429-1437.

［8］Liu L，Hu L，Liu YL，et al.Antibiotic resistance of Helicobacter pylori in Guizhou Province ［J］.Chin J Gastroenterol Hepatol，2012，21(8):702-705.刘苓，胡林，刘娅琳，等.贵州省幽门螺杆菌临床菌株的抗生素耐药现状［J］.胃肠病学和肝病学杂志，2012，21(8):702-705.

［9］Sun JG，Deng MZ，Bao YF，et al.Analysis on infection and drug resistance of Helicobacter pylori in patients with gastric diseases in Xianning area ［J］.Modern Medicine and Health，2011，27(14):2085-2086.孙剑刚，邓毛子，包永芬，等.咸宁地区胃疾病患者幽门螺旋杆菌感染及耐药性分析［J］.现代医药卫生，2011，27(14):2085-2086.

［10］Luo Y.Analysis of Helicobacter pylori on levofloxacin resistance［J］.Herald of Medicine，2012，31(9):1217-1218.骆瑛.幽门螺旋杆菌对左氧氟沙星耐药性分析［J］.医药导报，2012，31(9):1217-1218.

［11］Tan HL，Liu B，Liu TM，et al.Study on antibiotic resistance of helicobacter pylori isolated in Qingpu district，Shanghai［J］.Chin J Gastroenterol，2011，16(1):32-35.谭鹤龙，刘兵，刘铁梅，等.上海市青浦区幽门螺旋杆菌抗生素耐药情况的研究［J］.胃肠病学，2011，16(1):32-35.

［12］Kim JM，Kim JS，Kim N，et al.Distribution of fluoroquinolone MICs in Helicobacter pylori strains from Korean patients［J］.J Antimicrob Chemother，2005，56(5):965-967.

［13］Rimbara E，Noguchi N，Kawai T，et al.Fluoroquinolone Resistance in Helicobacter pylori:Role of Mutations at Position 87 and 91 of GyrA on the Level of Resistance and Identification of a Resistance Conferring Mutation in GyrB ［J］.Helicobacter，2011，17(1):36-42.

［14］Zhu XQ，Zhang YJ，Peng X，et al.Investigation on application of antibiotics in three second-level hospitals in Xinjiang from Jan.to Jun.in 2008 ［J］.China Pharmacy，2010，21(10):873-875.朱晓庆，张永军，彭曦，等.新疆地区3家二级医院2008年1-6月抗菌药物利用分析［J］.中国药房，2010，21(10):873-875.

［15］Zhang Q，Wang KY，Wang SZ，et al.Analysis of 2007-2009 Affiliated Cancer Hospital of Xinjiang medical quinolones［J］.Chin J Mod Drug Appl，2010，4(21):109-110.张倩，王科燕，王松芝，等.2007-2009年新疆医科大学附属肿瘤医院喹诺酮类药物应用分析［J］.中国现代药物应用，2010，4(21):109-110.

［16］Boyanova L.Prevalence of multidrug-resistant Helicobacter pylori in Bulgaria［J］.J of Med Microbiol，2009，58(Pt7):930-935.

［17］Horiki N，Omata F，Uemura M，et al.Annual change of primary resistance to Clarithromycin among Helicobacter pylori isolates from 1996 through 2008 in Japan ［J］.Helicobacter，2009，14(5):86-90.