鸡新城疫活疫苗(Lasota株)生产种毒的保存期试验

李小静 唐满华 邓月嫦 梁榕丽 莫秋女

（广东大华农动物保健品股份有限公司 广东 新兴 527400）

鸡新城疫活疫苗(Lasota株)生产种毒的保存期试验

李小静 唐满华 邓月嫦 梁榕丽 莫秋女

（广东大华农动物保健品股份有限公司 广东 新兴 527400）

对3批置-70℃超低温冰箱的鸡新城疫(Lasota株)生产种毒进行保存期试验，检测结果表明，种毒在-70℃保存5年，病毒含量、免疫原性、安全性均达到规程要求，分别用该3批种毒生产9批鸡新城疫抗原病毒含量检测均≥108.83EID50/0.1ml，高于国家标准(国标＞107.0EID50/0.1ml)，因此鸡新城疫(Lasota株)生产种毒在-70℃存放保存期至少为5年。

新城疫 生产种毒 保存期

《中华人民共和国兽用生物制品规程》(以下简称规程)2000年版中明确规定鸡新城疫低毒力活疫苗(Lasota株)生产种毒在-15℃以下保存，应不超过1年，由于现在技术的进步，冻存温度可以达到更低，而生产种毒是生物制品生产的重要原材料，直接关系到产品质量，因此目前绝大部分企业均是将种毒置-70℃保存，因而重新确定种毒的保存期是很必要的。现对2008年扩繁制备的3批鸡新城疫生产种毒进行保存期试验。

1 材料与方法

1.1 材料 （1）鸡新城疫生产种毒3批，由中国兽医药品监察所冻干毒种2001.3.25于2008年根据规程制备所得。（2）新城疫北京株强毒2006.06，购自中国兽医药品监察所。（3）SPF鸡胚和SPF鸡由新兴大华农禽蛋有限公司SPF种蛋自行孵化所得。

1.2 方法 （1）病毒含量测定[1]：将生产种毒自-70℃超低温冰箱取出，每个批号各一瓶，按规程要求，用灭菌生理盐水进行10倍稀释，接种10日龄SPF鸡胚，培养置120h，根据Reed-Muench计算EID50。2009～2013年每12个月检测一次，观察病毒含量变化。（2）免疫原性测定：每个批号种毒各取1瓶，用生理盐水稀释至5000EID50/ 0.1ml，各滴鼻1月龄SPF鸡10只，0.1ml/只，同时设对照5只，隔离饲养14d后各肌肉注射含104ELD50的鸡新城疫北京株强毒1ml，观察14d。（3）安全性评价：每个批号种毒各取1瓶，用灭菌生理盐水稀释5倍，各滴鼻接种7日龄SPF鸡10只，0.05ml/只，同时设对照鸡10只，免疫组和对照组在同条件下分别饲养，观察10日。（4）鸡新城疫抗原生产及病毒含量测定：每个批号种毒各取3瓶，按规程要求制备抗原，共收获9批检测病毒含量。

2 结果

2.1 病毒含量 从表1可以看出，2009～2013年每12个月检测一次种毒的病毒含量结果均高于国家标准，与2008年病毒含量检测值基本一致，无明显下降趋势，说明种毒置-70℃保存效价稳定。

表1 2008～2013年病毒含量测定结果 (EID50/0.1ml)

3.2 免疫原性 从表2可以看出，种毒按规程规定免疫剂量免疫SPF鸡后保护率达到100%，能经受鸡新城疫北京株强毒攻击，达到规程要求。

表2 2013年3批生产种毒免疫原性测定结果

3.3 安全性 从表3可以看出，种毒安全性评价合格，在保存过程中，毒力未出现增强等异常情况。

表3 2013年3批生产种毒安全性评价结果

3.4 鸡新城疫抗原病毒含量 从表4可以看出，用这3批种毒制备的9批鸡新城疫抗原经检测病毒含量明显高于国家标准。

表4 鸡新城疫抗原病毒含量检测结果 (EID50/0.1ml)

4 讨论

新城疫是危害养鸡业的重要传染病之一，具有很高的发病率和病死率，截至目前，接种疫苗仍是预防该病的主要措施[2]。全国几乎所有的生物制品企业都有这个产品，如果制备一批生产种毒可以使用5年，相对于每年生产一批种毒所花费的人力和物力会降低很多倍，而且会降低污染外源病毒的几率，另外频繁的更换种毒批号，也不利于产品质量的稳定。规程规定-15℃以下保存，通常是指保存温度在-15～20℃之间保存期为1年，此次试验证明，鸡新城疫活疫苗(Lasota株)生产种毒置-70℃保存5年各项检测结果仍然能达到规程要求，种毒的有效保存期至少可以是5年。

[1] 农业部兽用生物制品规程委员会,中华人民共和国兽用生物制品规程[M]. 北京: 化学工业出版社, 2000.

[2] 赵瑞宏, 张丹俊等. 不同新城疫疫苗和免疫途径对鸡新城疫HI抗体的影响[J]. 现代农业科技, 2009(19): 303-304.

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1007-1733(2013)09-0002-02

2013–06–19）