马立克氏病鸡外周血HSP70抗体滴度变化研究

裴兰英 （聊城大学农学院 山东 聊城 252059） 王俊海 （山东省聊城市畜牧站）田中杰 （河南出入境检验检疫局 河南 郑州）

马立克氏病鸡外周血HSP70抗体滴度变化研究

裴兰英 （聊城大学农学院 山东 聊城 252059） 王俊海 （山东省聊城市畜牧站）田中杰 （河南出入境检验检疫局 河南 郑州）

通过人工攻毒建立鸡马立克氏病肿瘤模型。利用ELISA方法，研究肿瘤发生、发展过程中，外周血HSP70抗体水平的变化。结果显示：攻毒21、28d时，各组试验鸡外周血HSP70抗体水平差异不显著(P＞0.05)，攻毒35d后，攻毒组鸡外周血HSP70抗体水平显著低于(P＜0.05)疫苗组和空白组。

马立克氏病 ELISA HSP70抗体

恶性肿瘤已成为导致我国城乡居民因病死亡的一个重要原因。对肿瘤发生的机理和防治措施的研究是近现代医学界科研工作的热点和难点。HSP(Heat Shock Protein，HSP)是生物圈中最为保守的蛋白分子之一，近年来研究发现，HSP在肿瘤的发生、发展及转移过程中发挥着重要作用[1,2,3]。对临床病例及肿瘤细胞体的研究表明，发生肿瘤时，HSP的表达量发生剧烈变化，同时，有研究表明HSPs对肿瘤细胞的生长和存活起重要作用[4]，且发生肿瘤时，患者外周血HSP的抗体水平发生显著变化

[5]。但有关肿瘤的发生发展与外周血HSPs抗体水平之间的动态相关性未见报道。本试验通过人工攻毒的方式，建立鸡马立克氏病动物模型，定期剖杀试验用鸡，采取外周血，分离血清，利用ELISA方法，动态研究肿瘤发生、发展与试验鸡外周血HSP70抗体水平之间的相关性，对探索HSPs作为肿瘤发生的预警作用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验动物和试剂

1.1.1 试验动物 200只1日龄SPF来杭鸡由聊城某SPF鸡场提供。在温控实验动物房条件下进行饲养，试验鸡由专人饲养管理。

1.1.2 主要试剂 鸡HSP70抗体检测试剂盒，购买于武汉华美生物工程有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 试验分组及取样 试验分攻毒组、疫苗组和空白组。试验鸡分别在21、28、35、42、49日龄分5批进行剖杀，采取外周血，分离血清，-20℃保存备用。

1.2.2 血清最佳稀释倍数 利用攻毒组和空白组鸡血清分别进行1∶5、1∶10和1∶50稀释，按试剂盒说明书步骤进行检测，每个稀释度两个重复，寻找最佳稀释比例。

1.2.3 试验样品检测 试验样品按最佳稀释比例进行稀释，按说明书步骤进行如下操作。加样50μl/孔→37℃温育30min→洗板5次(2min/次)→加辣根过氧化物酶标记抗鸡IgG工作液50μl/孔，37℃温育30min→洗板同上→加底物液90μl/孔，37℃避光30min→加终止液50μl/孔→酶联仪450nm检测。

1.2.4 分析及统计 利用软件SPSS进行t检验，判定组间HSP70抗体水平的差异显著性。

2 结果与分析

2.1 血清最佳稀释倍数

表1 血清稀释倍数

从表1可以看出，1∶10稀释比例两组所测数据比值最大，差异显著(P＜0.05)，因此采用1∶10稀释。

2.2 样品检测

表2 血清样品HSP70抗体检测结果 (log2)

从表2可以看出，在21和28日龄时，各试验组鸡外周血HSP70抗体滴度差异不显著，在35日龄后，攻毒组试验鸡外周血HSP70抗体滴度显著低于疫苗组和空白组试验鸡。

3 讨论

近年来大量研究发现，HSPs在某些肿瘤组织中的表达与在正常组织中的表达不同，并且在某些肿瘤中会出现针对某些HSPs的自身抗体。因此，人们希望通过肿瘤组织中某些HSPs或其特异性抗体的测定对肿瘤进行诊断和预后。在研究女性生殖道恶性病变中HSP的自身免疫与预后关系时，发现妇科恶性病变患者中有40.6%能够检测到针对HSP27的自身抗体，显著高于良性炎性病患者(4.3%)和健康女性(3.4%)的检出率。在本试验中检测了肿瘤发生过程中外周血HSP70抗体滴度的变化，发现在35日龄后，攻毒组鸡外周血HSP70抗体滴度显著低于空白组和疫苗组鸡，也许是因为在35日龄后，攻毒组鸡才发生大量的肿瘤。该结果与以往报道的不符，其具体机制还需进一步研究。

[1].Hightower L E, Hendershot L M. Molecular chaperones and the heat shock response at Cold Spring Harbor. Cell Stress Chaperones, 1997,2∶1-11.

[2].尹燕明, 秦庆亮, 张伟等. 肝细胞癌热休克蛋白70过表达与自发性癌细胞凋亡[J]. 中华肝脏病杂志, 2001, 9(2)∶ 84～85.

[3].So A, Hadaschik B, Sowery R, et al. The role of stress proteins in prostate cancer. Curr Genomics, 2007, 8(4)∶ 252-261.

[4].孙培明, 李玉保, 王志亮等. 热应激下肉鸡心肌的损伤和热休克蛋白的定位[J]. 南京农业大学学报, 2005, 28(1)∶ 131-134.

[5]. 栗军香, 张瑞英, 魏红等. HSP70在急性白血病外周血细胞中的表达及临床意义[J]. 山东医药, 2007, 47(17)∶ 4445.

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1007-1733(2013)10-0011-02

2013–07–05）