替米考星纳米乳对小白鼠急性毒性试验的研究

李向辉　王岩　欧阳五庆

摘要：为了评价替米考星纳米乳（Tilmicosin nanoemulsion）的安全性，进行了小白鼠口服急性毒性及半数致死量（LD50）的测定。结果表明，替米考星纳米乳的LD50为2 260.4 mg/kg，LD50的95%可信限为2 094.5～2 456.5 mg/kg。因此具有较低的口服毒性，对内脏器官无病理损害作用，兽医临床使用比较安全，适合用于口服给药。

关键词：替米考星纳米乳；小白鼠；急性毒性

中图分类号：S859.83 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）06-1383-03

替米考星（Tilmicosin）是一种半合成的大环内酯类畜禽专用广谱抗生素，它为泰乐菌素的衍生物，其抗菌谱与泰乐菌素相似，对革兰氏阳性菌及部分革兰氏阴性菌、霉形体、螺旋体等均有很强的抑制作用[1]，尤其对胸膜肺炎放线杆菌、畜禽巴氏杆菌及支原体作用最强[2]。然而替米考星在水中溶解度低，吸收不完全，生物利用度低，体内半衰期短。替米考星纳米乳（Tilmicosin Nanoemulsion）是将传统抗菌药物替米考星以纳米乳为药物载体研制而成的一种新型纳米制剂，在兽医临床上有望用于家畜肺炎、禽慢性呼吸道病及奶牛乳腺炎的防治。为了进一步探讨替米考星纳米乳的安全性，本研究采用小白鼠急性毒性试验来考察替米考星纳米乳的安全性，为该药在兽医临床合理、有效的利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要药品及试剂 吐温-80（化学纯），天津市致远化学试剂有限公司生产；乙醇，中国医药集团上海化学试剂公司生产；肉豆蔻酸异丙酯（IPM），购自陕西省医药公司；替米考星原料药，购自于山东齐鲁制药有限公司；蒸馏水，实验室自制。

1.1.2 试验动物 昆明系小白鼠（18～22 g，雌雄各半），由第四军医大学试验动物中心提供，小白鼠常规饲养管理，温度18～22 ℃，相对湿度50%～70%。

1.2 方法

1.2.1 替米考星纳米乳的制备 按照文献[3]的方法制备替米考星纳米乳。以吐温-80为表面活性剂、乙醇为助表面活性剂、IPM 为油相，按照替米考星 5.5%、无水乙醇 18.5%、吐温-80 27.5%、IPM 5.0%、蒸馏水 43.5%（以上各组分含量均为质量分数）的比例。先称取适量的替米考星溶解于助表面活性剂，充分溶解后加入表面活性剂，搅拌均匀，再缓慢加入油相，最后在磁力搅拌器的作用下逐滴地滴加蒸馏水，并观察溶液状态，溶液由澄清变浑浊，继续滴至溶液至澄清透亮状态，即制成了5.5%的替米考星纳米乳。

1.2.2 急性毒性试验

1）预试验。预试验按简化寇氏法设计[4，5]。首先取32只小白鼠按体重随机分4组，每组8只，雌雄各半进行编号。采用空腹按体重1次口服给药，最大剂量不超过1 mL。将替米考星纳米乳用蒸馏水稀释后，按等差数列从小到大配成不同浓度的稀释液，分4个剂量组，每组1个剂量分别灌胃给药，给药后观察10 d，观察中毒症状并记录死亡数。找出替米考星纳米乳能使小鼠全部死亡的最小剂量（Dm）和能使小鼠全部存活的最大剂量（Dn）。

2）正式试验。根据预试验结果设计正式试验。取56只小白鼠按体重随机分7组，每组8只，雌雄各半进行编号，注射剂量换算成替米考星原料药依次为1 600、1 800、1 910、2 120、2 450、2 620、2 800 mg/（kg·bw）。计算替米考星纳米乳相邻两组剂量比r=■，其中a为分组数，根据预试验所得的最小剂量（Dm）和最大剂量（Dn）及以上公式，算出各组小鼠的用药剂量，以此剂量组对小白鼠灌胃给药[6，7]。给药后观察10 d，记录各组的死亡数，剖检全部供试小鼠，观察并记录内脏器官的病理变化情况。将试验结果数据代入Bliss软件或简化寇氏法公式，求出替米考星纳米乳的半数致死量（LD50）和95%可信限。

2 结果与分析

替米考星纳米乳对小白鼠的急性毒性试验结果见表1。

经预试验测得替米考星纳米乳的毒性剂量范围约为1 750～3 020 mg/（kg·bw），相邻两组较合适的剂量比为r≈1.067。

采用简化寇氏法对替米考星纳米乳在小白鼠上进行了口服急性毒性试验，根据Bliss软件计算出替米考星纳米乳的LD50为2 260.4 mg/（kg·bw），95%可信限为2 094.5～2 456.5 mg/（kg·bw）。

小鼠死亡多发生于给药后1.5～2.0 h。主要症状为四肢无力、运动失调、嗜睡等。对死亡小鼠进行剖检，除可见急性死亡大剂量组小鼠胃稍膨胀外，其他脏器未见有明显异常。对存活小鼠10 d后称重，体重增长正常，剖检各内脏器官均未发现异常病理变化。

3 小结与讨论

药物的安全性评价是研究、开发新药的一个重要环节，为新药的上市提供全面客观的依据。安全性评价的目的在于了解药物单次或短时间多次给药后，动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考[5]。试验结果表明，替米考星纳米乳口服的LD50为2 260.4 mg/（kg·bw），根据WHO颁布的化学物质的急性毒性分级标准剧毒（LD50﹤1 mg/（kg·bw））、高毒（1～50 mg/（kg·bw））、中毒（51～500 mg/（kg·bw））、低毒（501～5 000 mg/（kg·bw））和微毒（5 001～15 000 mg/（kg·bw））[8，9]可知，替米考星纳米乳属于低毒级药物。目前已报道的国产替米考星的口服半数致死量（LD50）为2 071 mg/（kg·bw），95%可信限为1 932～2 219 mg/（kg·bw）[3]。虽然也属于低毒级药物，但替米考星纳米乳与其相比进一步降低了替米考星的毒性。

试验发现5%～8%的小白鼠在口服替米考星纳米乳后5 min内死亡。剖检可见除胃有些膨大外，其他脏器均未见异常。分析原因可能与过敏反应或心动过速有关[1]，对这一部分小鼠随即进行了补做，未计算入试验结果内。对死亡小鼠统计结果表明，大剂量组小鼠多在口服替米考星纳米乳后30～40 min左右死亡，剖检发现小鼠胃有些膨大，其他脏器未发现异常。对存活10 d的小鼠称重，体重增长正常，剖检均未发现任何脏器有异常变化。表明口服替米考星纳米乳对小鼠内脏器官无病理损害作用。

试验结果表明，替米考星纳米乳的口服急性毒性非常低，LD50为2 260.4 mg/kg，95%可信限为2 094.5～2 456.5 mg/kg。本研究制备的替米考星纳米乳具有较低的口服毒性，对内脏器官无病理损害作用，兽医临床使用比较安全，适合用于口服给药。

参考文献：

[1] 孙永学，陈杖榴. 替米考星在兽医临床上应用的研究概况[J].兽药与饲料添加剂，2002，7（6）：22-25.

[2] FODOR L，REEVE J L，HODGE A，et al. Efficacy evaluations of the use of oral tilmicosin in pneumonic calves[J]. Veterinary Journal，2000，159（2）：194-200.

[3] 李向辉，欧阳五庆，杨雪峰，等. 替米考星纳米乳的制备及其质量评价[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2009，37（4）：42-46.

[4] 孙红武，欧阳五庆.黄连素口服纳米乳的研制、质量及安全性评价[J].上海交通大学学报（农业科学版）， 2007，25（1）：60-65.

[5] 何 庆，夏忠玉. 冰片口服制剂安全性的试验研究[J].中国药师，2006，9（5）：419-421.

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[7] 张桂枝，罗永煌，李 竞，等. 复方磺胺间甲氧嘧啶缓释型注射液的毒性研究[J]. 中国兽医医药杂志，2005（3）：36-37.

[8] GOHEL M C，AMIN A F. Formulation optimization of controlled release diclofenac sodium microspheres using factorial design[J]. Controlled Release，1998，51（2-3）：115-122.

[9] 王壮成，王世祥，蔡东兴. 应用乳酸环丙沙星配合催产素治疗奶牛慢性子宫内膜炎的临床观察[J].宁夏农林科技，2004（6）：61-62.