人参花食用安全性研究

杨 明，于德伟，杨 铭，林 贺，陈文学

(1.吉林省中医药科学院 新药研究开发中心，吉林 长春130021;2.长春中医药大学 药学院，吉林 长春130117)

人参花系五加科人参属植物人参(Panax ginseng C.A.Meyer)的干燥花蕾。具有补气强身，延缓衰老作用，近年研究表明［1］，人参花中总皂苷含量是人参根的5.06 倍，却几乎不含导致人“上火”的人参皂苷Ro。同时人参花含有20 余种挥发油和20余种矿物质及微量元素，具有较高的药用和食用价值。本文对人参花的急性毒性试验、遗传毒性试验、30 d 喂养试验毒理学安全性进行了初步研究，作为其食用的安全性依据。

1 材 料

1.1 受试物

人参花由中国农业科学院左家特产研究所提供，用时粉碎，过100 目筛，实验时用蒸馏水配成所需浓度。

1.2 试验动物与环境

清洁级Wistar 大鼠，昆明种小鼠，购自吉林大学基础医学院动物实验中心。动物合格证号:SCXK(吉)-2003 -0001。根据试验所需选择相应性别、体重和数量的动物。动物饲养环境:温度(23 ±1)℃;相对湿度50% ±10%。

1.3 菌株

菌株分别为TA97、TA98、TA100、TA102 均由华西医科大学公共卫生学院检测中心提供。

1.4 方法［2-4］

1.4.1 大鼠急性经口毒性试验

取雌雄各半大鼠40 只，体重130 ～140 g，按体重随机分为2 组(对照组及人参花组)，禁食16 h，于24 h 内灌胃给药人参花3 次，累计给药量17.4 g/kg·bw，对照组给同体积水。给药后观察14 d 内大鼠的外观、行为活动、精神状态、食欲、大、小便及其颜色，皮毛，肤色，呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡等情况。

1.4.2 Ames 试验

采用平板掺入法，人参花受试品设4 000 μg/皿为最高剂量，其它剂量依次为1 000 μg/皿、200 μg/皿、40 μg/皿、8 μg/皿共5 个剂量组;另设含蒸馏水为溶剂对照组、10%S9 混合液为S9 对照组;敌克松(Dexon，50μg/皿)、叠氮钠(NaN3，20μg/皿)、丝裂霉素C(MMC，20μg/皿)、2 -氨基芴(2 -AF，20μg/皿)和1.8 -二羟基蒽醌(50μg/皿)为阳性对照组。相同的条件下同时进行非活化和活化试验，每个剂量做3 个平行皿，试验重复2 次。

1.4.3 小鼠骨髓细胞微核试验

人参花受试品设3 个剂量，高剂量为4.0 g/kg·bw、中剂量为2.0 g/kg·bw、低剂量为1.0 g/kg·bw，蒸馏水为溶剂对照，分两次口服灌胃给药，第二次给药后6 h 处死动物，收获细胞，制片、染色、观察。阳性对照为环磷酰胺(40 mg/kg·bw)口服灌胃1 次，给药后24 h 处死，制片。

1.4.4 小鼠精子畸形试验

将人参花受试品设3 个剂量，采用口服灌胃给药，高剂量为4.0 g/kg·bw、中剂量为2.0 g/kg·bw、低剂量为1.0 g/kg·bw，蒸馏水为阴性对照组，阳性对照组给予环磷酰胺(60 mg/kg·bw)，每天给药1次，连续5 d。首次给药后第35 天处死动物，取精子，制片、固定、染色、观察。

1.4.5 大鼠30 天喂养试验

清洁级Wistar 大鼠，按体重随机分为正常对照组，人参花6.0 g/kg·bw、3.0 g/kg·bw 和1.5 g/kg·bw 3个服用剂量组，每组20 只动物，雌雄各半。每日上午8 h 和下午4 h 各口服灌胃1 次，每周灌服7 d，连续30 d。停用后，恢复性观察2 周。试验期间对大鼠的外观行为进行观察、记录，对体重增长、体温、摄食量、饮水量等指标进行检测，并分别于灌服30 d 和2 周恢复期结束后进行血液学(包括红细胞计数、血红蛋白含量、红细胞容积、平均红细胞容积、平均红细胞血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度、网织红细胞计数、白细胞计数、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、血小板计数、凝血酶原时间、活化部分凝血酶原时间)、血液生化学(包括天门冬氨酸氨基转换酶、丙氨酸氨基转换酶、碱性磷酸酶、尿素氮、肌酐、总蛋白、白蛋白、血糖、总胆红素、总胆固醇、甘油三脂)检测、脏器系数和病理组织学检查。

1.5 统计方法

对精子畸形试验数据采用秩和检验;其他试验数据采用T 检验。

2 结 果

2.1 大鼠急性经口毒性试验

给药后大鼠活动自如，毛色光泽、尿便正常、饮食正常，体重增长正常，未见其它异常反应，大鼠无一例死亡。14 d 后处死动物，肉眼观察大鼠各脏器未见异常。因给药体积，浓度均已达最大限度，故人参花灌胃给药大鼠的最大耐受剂量大于17.4 g/kg·bw，表明其无急性毒性作用。

2.2 Ames 试验

人参花受试品对TA97、TA98、TA100、TA102 菌株在有无S9 混合液条件下均未引起基因组碱基置换或移码突变，受试各剂量组、溶剂对照组、S9 对照组对TA97、TA98、TA100、TA102 菌株的回变菌落数同自发回变组菌落数相比无统计学差异，受试组与阳性对照组相比差异均非常显著。表明人参花Ames 试验结果为阴性。见表1。

表1 -1 人参花供试品的Ames 试验结果(±S)n=6

表1 -1 人参花供试品的Ames 试验结果(±S)n=6

组别 剂量(μg/皿)TA97 TA98-S9 +S9人参花 4000 118.8±3.76 138.2±5.15 30.0±2.97 36.2±5-S9 +S9.56人参花 1000 118.8±3.92 138.2±6.85 32.3±2.34 35.0±2.76人参花 200 119.8±1.83 128.3±5.47 30.5±5.47 37.5±6.53人参花 40 115.0±5.59 129.7±12.94 33.3±4.08 36.3±1.75人参花 8 114.0±8.53 127.2±6.62 34.3±3.72 38.7±4.72敌克松 50 1360.5±198.25 — 241.0±9.49 —2-氨基芴 20 — 923.3±49.88 — 1479.7±71.86溶剂对照 蒸馏水 123.09.19 127.0±14.66 37.7±2.42 40.2±1.94 S9 对照 10%S9混合液 — 130.2±11.36 — 38.8±1.83自发回变 —121.8±6.55 35.5±1.87

表1 -2 人参花供试品的Ames 试验结果(±S)n=6

表1 -2 人参花供试品的Ames 试验结果(±S)n=6

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2.3 小鼠骨髓细胞微核试验

人参花受试品各剂量组的小鼠骨髓细胞微核发生率与阴性对照组比较均无统计学差异(P ＞0.05)，与阳性对照组比较则差异显著(P ＜0.01)。表明人参花对小鼠骨髓嗜多染红细胞无诱发微核作用。见表2。

2.4 小鼠精子畸形试验

人参花受试品各剂量组小鼠精子畸形率和阴性对照组比无显著差异(P ＞0.05)，和阳性对照药环磷酰胺比差异非常显著(P ＜0.01)。表明人参花对小鼠精子无致畸变作用。见表3。

2.5 大鼠30 d 喂养试验

2.5.1 对动物一般行为活动、外观体征、形态等影响

在30 d 服用人参花期间和2 周恢复性观察期间，对照组及服用人参花各剂量组动物活动、行为正常，反应机敏，被毛光洁，饮食、尿便正常。与对照组动物比较未见异常改变。

2.5.2 对体重增长、体温、摄食量及饮水量的影响

在30 d 服用人参花期间和2 周恢复观察期间，服用人参花各剂量组动物的体温、摄食量、饮水量和体重增长均无异常，与对照组比较无明显差异(P ＞0.05)。体重增长数据见表4。

表2 人参花对小鼠骨髓细胞微核发生率的影响(±S)

表2 人参花对小鼠骨髓细胞微核发生率的影响(±S)

* 与阴性对照组比较，P ＜0.01

表3 人参花对小鼠精子发生率的影响

表4 人参花对大鼠长期毒性试验体重增长的影响(±S)

表4 人参花对大鼠长期毒性试验体重增长的影响(±S)

注:括号内为动物数

2.5.3 血液学及血液生化学检测结果

连续服用人参花30 d 和2 周恢复期观察结束，对照组及服用人参花各剂量组动物的血液学及血液生化学指标均在正常参考值范围之内，服用人参花的各剂量组与对照组比较均无明显差异(P ＞0.05)。部分数据见表5、6。

2.5.4 脏器系数及病理组织学检查

连续服用人参花30 d 和2 周恢复期观察结束，经系统解剖、肉眼观察，对照组及服用人参花各剂量组动物主要脏器的外观形态、表面色泽、轮廓体积、所处位置等均未见异常病理改变。各组动物间主要脏器系数值也均无显著差异(P ＞0.05)。对照组和高剂量组动物组织器官的病理组织学检查也未发现与受试品相关的毒性反应发生。脏器系数部分数据见表7。

表5 人参花对大鼠长期毒性试验(30 d)血常规的影响(±S)n=10

表5 人参花对大鼠长期毒性试验(30 d)血常规的影响(±S)n=10

组别 剂量(g/kg) WBC×109/L L% M% G% RBC×1012/L Hbg/L PLT×109/L RC(×0.001)82 ±0.36 151 ±9.87 724 ±83.0 1.99 ±0.31人参花 6 11.1 ±2.95 74.8 ±2.65 7.40 ±0.99 17.8 ±2.89 6.77 ±0.70 150 ±10.0 711 ±118 1.83 ±0.39 3 10.7 ±2.72 73.3 ±2.99 7.37 ±1.53 19.3 ±2.59 6.65 ±0.55 147 ±10.7 723 ±130 1.85 ±0.50 1.5 11.8 ±2.72 74.2 ±3.89 7.22 ±1.27 18.6 ±3.85对照组 - 11.5 ±3.28 73.9 ±2.55 7.03 ±1.20 19.1 ±3.15 6.6.81 ±0.61 151 ±8.73 731 ±145 1.80 ±0.37

表6 人参花对大鼠长期毒性试验(30 d)血液生化学指标的影响(±S)n=10

表6 人参花对大鼠长期毒性试验(30 d)血液生化学指标的影响(±S)n=10

组别 剂量(g/kg) ALT(U/L) AST(U/L) ALP(U/L) TP(g/L) Cr(μmol/L)TCHO(mmol/L)TG(mmol/L)GLU(mmol/L)±6.26 1.92 ±0.15 0.53 ±0.07 5.20 ±0.67人参花 6 40.2 ±7.61 178 ±45.5 171 ±49.3 65.4 ±2.43 87.6 ±4.89 1.83 ±0.14 0.50 ±0.07 4.93 ±0.61 3 38.2 ±6.18 152 ±39.2 166 ±48.5 64.7 ±2.07 86.6 ±5.80 1.97 ±0.15 0.51 ±0.07 5.39 ±0.75 1.5 38.6 ±8.02 157 ±35.8 170 ±59.2 65.2 ±2.42 86对照组 - 39.6 ±7.14 171 ±30.9 168 ±53.9 65.3 ±2.10 87.0.3 ±7.11 1.96 ±0.15 0.51 ±0.08 5.47 ±0.98

表7 人参花对大鼠长期毒性试验(30 d)主要脏器指数的影响(g%)(±S)n=10

表7 人参花对大鼠长期毒性试验(30 d)主要脏器指数的影响(g%)(±S)n=10

组别 剂量(g/kg) 心 肝 脾 肺 肾(双) 脑 睾丸(双)(n=5)子宫(n=5)77 ±0.14 0.49 ±0.11 0.90 ±0.05 0.151 ±0.03人参花 6 0.39 ±0.03 4.49 ±0.66 0.57 ±0.13 0.67 ±0.06 0.73 ±0.09 0.48 ±0.11 0.95 ±0.11 0.178 ±0.03 3 0.41 ±0.03 4.62 ±0.51 0.59 ±0.08 0.66 ±0.08 0.75 ±0.12 0.49 ±0.07 1.03 ±0.14 0.138 ±0.02 1.5 0.41 ±0.04 4.53 ±0.59 0.60 ±0.13 0.69 ±0.11对照组 - 0.40 ±0.04 4.67 ±0.70 0.57 ±0.09 0.67 ±0.09 0.0.78 ±0.11 0.46 ±0.07 0.93 ±0.11 0.169 ±0.03

3 讨 论

随着我国人民生活水平的提高，对保健滋补食品需求增多。以人参花为原料开发的保健食品因缺乏系统完整的食用安全性评价，限制了其开发利用，使用量落后于国外［5］。探讨人参花作为新食品资源的安全性尤为重要。我们参照《新资源食品安全评价规程》及《GB 15193.1 -2003 食品安全性毒理学评价程序》对人参花进行了毒理学安全性研究。

研究结果显示，人参花无急性毒性反应，最大耐受剂量大于17.4 g/kg·bw;3 项遗传毒性试验结果均为阴性，提示人参花对哺乳类动物体细胞染色体及生殖细胞无损伤作用;30 d 喂养试验未见明显毒性作用，受试大鼠一般行为活动、外观体征、形态、体重增长、体温、摄食量、饮水量、血液学、血液生化学、脏器系数及病理组织学等各项指标均未见异常改变。因此我们认为上述试验结果可以为人参花的食用安全性提供一定的依据，但由于其具有一定的药理作用，作为食品服用周期较长，还需要进行相应的毒副作用观察及慢性毒性研究。

［1］ 湖广.人参花蕾的药用价值远超人参［J］. 家庭医药，2005，4:55.

［2］ GB 15193 -2003.食品安全性毒理学评价程序和方法［S］.

［3］ 傅颖，梅松，刘冬英，等.铁皮枫斗胶囊的毒性研究及安全性评价［J］.中国卫生检验杂志，2011，20(11):2789 -2790.

［4］ 侯志勇，王立强，韩静.肾茶胶囊对大鼠脏器长期毒性的实验研究［J］.中国医药科学，2011，1(12):16 -17.

［5］ 李冬.浅谈人参临床实验研究［J］.中国卫生产业，2011，8(8):20.