HIV患者外周血CD4+/CD25hi/ CD127low调节性T细胞的表达及临床意义

王兆丰 葛志坚 鲍轶 邵平扬 陈松劲 阮玲娟

HIV患者外周血CD4+/CD25hi/ CD127low调节性T细胞的表达及临床意义

王兆丰 葛志坚 鲍轶 邵平扬 陈松劲 阮玲娟

目的 探讨感染人类自身免疫缺陷病毒（HIV）患者抗病毒治疗前后外周血CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞的表达情况及临床意义。 方法 选择符合HIV诊断标准、接受抗病毒治疗超过3个月的64例患者，采用高效抗逆转录病毒治疗（HARRT），分别于治疗前、治疗3个月后采用流式细胞术检测外周血CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞和CD4+T细胞的表达情况，并与80例健康体检者（对照组）比较。结果与对照组比较，HIV患者CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数及百分比显著降低，差异有统计学意义（P＜0．01）。HIV患者的CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数和CD4+T细胞呈正相关（P＜0．01）；HIV患者治疗3个月后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞均有升高，与治疗前的差异均有统计学意义（均P＜0．01）。根据年龄将患者分为18～30岁、31～45岁、＞45岁，各年龄段患者治疗后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数分别是治疗前的4．28倍、3．00倍、2．00倍。结论HIV患者外周血CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞的表达与病毒的感染、清除有关；外源性药物可升高调节性T细胞的表达。

调节性T细胞 HIV感染 高效抗逆转录病毒治疗

【 Abstract】 ObjectiveTo investigate peripheral blood CD4+/CD25hi/CD127lowRegulatory T cell（Treg）levels in HIV patients after antiviral therapy and its clinical significance．MethodsSixty four HIV patients,including 18 cases aged 18～30,35 cases aged 30～45 and 11 cases aged＞45 received highly active antiretroviral therapy(HAART)．CD4+/CD25hi/CD127lowTreg and CD4+T cells in peripheral blood mononuclear cells(PBMC)were determined by flow cytometry before and 3 months after HAART．Eighty healthy individuals served as controls．ResultsBefore HAART the circulating Treg levels in HIV patients were significantly lower than those in controls(8±2．20,33±10．03,P＜0．01)．Treg was positively correlated with CD4+cells in PBMCs(r=0．81,P＜0．01)of HIV patients．The circulating levels of Treg were increased 3 months after HAART(P＜0．01);the degree of Treg cell elevation was associated with the age of patients:4．28-fold for 18～30 age group,3-fold for 30～45 age group and 2-fold for＞45 age group,respectively．ConclusionHighly active antiretroviral therapy can increase the CD4+/CD25hi/CD127lowTreg levels in HIV patients,which may be associated with the reduction of viral load．

机体感染人类自身免疫缺陷病毒（HIV）后可引发全身性的免疫失调，表现为CD4+T细胞的进行性减少以及调节性T细胞和效应T细胞之间的免疫失衡[1]。调节性T细胞是具有免疫调节功能的T细胞亚群，能抑制自身免疫疾病的发生，在维持内环境稳定中有一定作用[2]。CD127是调节性T细胞表面标志物，CD127的表达对T淋巴细胞的成熟、维持及免疫应答发挥着重要作用。CD4+T细胞是HIV攻击的主要细胞，当CD4+T细胞＜200个/μl时，免疫系统遭到彻底破坏，免疫功能极度低下。笔者通过测定HIV患者治疗前后CD4+T细胞和CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数及百分比，探讨HIV患者的发病机制和对外源性药物的免疫应答情况。

1 对象和方法

1.1 对象 嘉兴市2005-01—2011-12符合HIV诊断标准[3]、在嘉兴市疾控中心接受免费艾滋病抗病毒治疗超过3个月的64例患者，男59例，女5例；年龄18～68岁，平均（39.88±9.89）岁。所有患者HIV抗体初筛、确证试验（WB）均为阳性，CD4+T细胞＜200个/μl，临床诊断为艾滋病期，由本人同意并签订《抗艾滋病病毒药物治疗同意书》后登记并录入国家艾滋病抗病毒药物治疗数据库提供的《治疗基本情况表》。选择2011-01—06在嘉兴学院医学院附属第二医院健康体检者80例作为对照组，其中男55例，女25例，年龄18～62岁，平均（36.88± 9.09）岁。

1.2 仪器与试剂 流式细胞仪采用美国BD FACSCantoⅡ流式细胞仪FACSDiva软件，以BD Calibrite七色校准微球试剂对仪器进行校准；试剂为CD4-PECY5/CD25-FITC/CD127-PE，同型对照为gG1-FITC/ IgG1-PE/IgG1-PECY5，均为美国BD公司生产。

1.3 方法 所有患者均使用高效抗逆转录病毒治疗（HARRT）。药物使用国家提供的核苷类反转录酶抑制剂药物（NRTIs），包括齐多夫定（AZT）、拉米夫定（3TC）、司他夫定（D4T）、替诺福韦（TDF），以及非核苷反转录酶抑制剂类药物（NNRTs），包括奈韦拉平（NVP）、依非韦仑（EFV）[4]。每种治疗方案均包含3种抗病毒治疗药物,其中2种核苷类反转录酶抑制剂和1种非核苷类反转录酶抑制剂[5]。分别于治疗前和治疗3个月后检测外周血CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞和CD4+T细胞绝对计数和百分比。测定步骤：使用含EDTA-K2的真空采血管采集受试对象静脉血，对照管加入IgG1-FITC/ IgG1-PE/IgG1-PECY5 20μl，测定管加入CD4-PECY5/ CD25-FITC/CD127-PE 20μl，分别加入100 μl的枸橼酸钠（EDTA）抗凝新鲜全血，室温避光孵育20min，采用CoulteRQ-PREP溶血仪溶血后上流式细胞仪检测。

1.4 统计学处理 采用GraphPad Prism 5统计软件，计量资料以表示，组间及治疗前后的比较采用t检验，CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞与CD4+T细胞的相关性分析采用Pearson相关系数。

2 结果

2.1 两组治疗前CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数及百分比的比较 CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数HIV患者（8.00±2.20）个/μl，对照组（33.00± 10.03）个/μl，两组差异有统计学意义（P＜0.01）。CD4+/ CD25hi/CD127low调节性T细胞百分比HIV患者（2.67± 0.69）%，对照组（6.53±4.11）%，两组差异有统计学意义（P＜0.01）。CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞与CD4+T细胞呈正相关（r=0.81，P＜0.01），见图1。

图1 HIV患者CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞与CD4+T细胞的相关性

2.2 HIV患者治疗前后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞的比较 根据年龄将HIV患者分为18～30岁18例，其中男16例，女2例；30～45岁35例，其中男33例，女2例；＞45岁11例，其中男10例，女1例。各年龄段HIV患者治疗3个月后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数及百分比明显升高，治疗前后的差异有统计学意义（P＜0.01）。治疗后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞和CD4+T细胞绝对计数是治疗前的3.09倍、1.93倍，治疗后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数是治疗前的4.28倍、3.00倍、2.00倍，治疗后CD4+T细胞绝对计数是治疗前的2.30倍、2.09倍、1.41倍，见表1、图2、3。

表1 HIV患者治疗前后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞的比较

3 讨论

最近有研究发现，CD127可以作为记忆性T细胞及调节性T细胞特异性的表面标记物，这对效应性T细胞向记忆性T细胞的转化、维持及调节性T细胞功能的进一步研究提供了重要工具，也为病毒感染的研究及治疗的进一步发展提供了重要信息[6]。本研究中发现HIV患者治疗前CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数和百分比均显著低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.01）；HIV患者CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数与CD4+T细胞绝对计数呈正相关，说明HIV病毒感染可能与IL-7的特异性应答有关，而IL-7在病毒感染后的免疫应答及病毒特异性CD4和CD8记忆性T细胞库的产生及维持过程中发挥重要作用[7]。

图2 流式细胞图（P3：CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞；A：治疗前；B：治疗后）

图3 各年龄段患者治疗前后T细胞绝对计数的比较（A：CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞；B：CD4+T细胞）

本研究中治疗后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞和CD4+T细胞绝对计数是治疗前的3.09倍和1.93倍。各年龄段HIV患者HARRT治疗后CD4+/CD25hi/ CD127low调节性T细胞绝对计数与治疗前的差异均有统计学意义（均P＜0.01），治疗后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数分别是治疗前的4.28倍、3.00倍、2.00倍，提示年轻患者比年老患者的CD4+/CD25hi/ CD127low调节性T细胞绝对计数升高幅度更大、对外源性药物免疫应答更强。CD127信号对DN期胸腺细胞的幸存和增殖起着必不可少的作用。Buckley[8]发现在CD127基因敲除的小鼠中，胸腺细胞的数量明显减少，T细胞和B细胞功能严重缺陷，而在人类中由于CD127缺陷引起的严重联合免疫缺陷病则仅表现为T细胞功能缺陷。CD127作为IL-7的受体，在T淋巴细胞的发育、T细胞内环境稳态的维持及记忆性T细胞的分化及幸存等方面发挥重要的作用，在T细胞缺乏的条件下，CD127信号可以不依赖T细胞抗原受体（TCR）刺激T细胞增殖，促进T细胞数量的恢复。临床表明，抗病毒治疗可以有效地抑制HIV的复制，减轻HIV对免疫系统功能的损伤，并达到免疫重建的功效，减少患者机会性感染和肿瘤的发生，提高患者的生活质量[9]。笔者发现HIV病毒感染患者中调节性T细胞CD127表达减少，可能影响T淋巴细胞的存活及功能，在治疗方面，基于IL-7可以通过CD127刺激外周非同种异基因反应性T细胞的增殖，并通过抗凋亡作用保证T细胞的幸存，恢复外周T细胞数量，促进外周T淋巴细胞的重构，维持T细胞内环境稳态[10]。

综上所述，HIV患者外周血CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞的表达与病毒的感染、清除有关；外源性药物可升高调节性T细胞细胞的表达。

[1] Kinter A L,Horak R,Sion M,et al．CD25 regulatory T cells isolated from HIV-infected individuals suppress the cytolytic and nonlytic antiviral activity of HIV-specific CD8 T cells in vitro[J]．AIDS Res Hum Retroviruses,2007,23(3):438-450．

[2] 叶俏,王兆丰,吴华香．外周血CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞在强直性脊柱炎中的意义[J]．浙江医学,2012,34(2):143-145．

[3]邵一鸣．艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准WS 293-2008[M]．北京:人民卫生出版社,2008:9-10．

[4] 谢静,李太生．艾滋病抗病毒治疗新药的研究进展[J]．中国艾滋病性病杂志,2008,6(14):631．

[5] 张福杰．国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册[M]．2版．北京:人民卫生出版社,2008:109．

[6] 孙晨鸣,马海霞,刘伟光,等．CD127与淋巴细胞[J]．中国生物工程杂志,2007,27(5):113-119．

[7] Kondrack R M,Harbertson J,Tan J T,et al．Interleukin 7 regulates the survival and generation of memory CD4 cells[J]．J Exp Med,2003,198(12):1797-1806．

[8] Buckley R H．Molecular defects in human severe combined immuneodeficiency and approaches to immunereconstitution[J]．Annu Rev Immuno,2004,22(6):625-655．

[9] Wold Health Organization．WHO case definitions of HIV for surveillance and revised clinical staging and immunological classifiation of HIV-related disease in adults and children[M]．Geneva: World Health Organization,2006:8-11．

[10] Alpdogan O,Murilan S J,Eng J M,et al．IL-7 enhances peripheral T cell reconstitution after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation[J]．J Clin Invest,2003,112(7):1095-1107．

Peripheral CD4+/CD25hi/CD127lowTreg cell levels in HIV patients after antiviral therapy and its significance

Treg HIV infection Highly active antiretroviral therapy

2013-01-18）

（本文编辑：严玮雯）

314000 嘉兴学院医学院附属第二医院中心实验室（王兆丰、鲍轶、邵平扬、陈松劲、阮玲娟）；嘉兴市疾控中心检验科（葛志坚）

葛志坚,E-mail:phgzj@163.com