老年淋巴瘤患者microRNA—21的表达及临床意义分析

王俊　宋奎

[摘要] 目的 研究microRNA-21（miR-21）在老年淋巴瘤细胞中的表达，探讨miR-21表达与老年淋巴瘤临床病理特征的关系及其在淋巴瘤发生发展中的临床意义。方法 选取在该院诊治的62例老年淋巴瘤患者为研究对象，通过健康体检老年人群60名外周血的正常对照组的比较，用FQ-PCR方法检测miR-21表达，并判断其表达与淋巴瘤细胞发生发展的相关性。结果 老年淋巴瘤患者外周血中循环miR-21的表达显著高于正常对照组。结论 外周血循环miR-21检测可能成为早期诊断老年淋巴瘤患者的新标志。

[关键词] 老年；淋巴瘤 microRNA-21；表达；临床意义

[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2013）01（a）-0056-02

淋巴瘤是相对少见的恶性肿瘤类型，老年淋巴瘤患者的预后要比年轻患者差，其心、肺、肝、肾和消化系统的功能明显衰退，对化疗的耐受性也较差，在进行抗肿瘤治疗中出现的不良反应会更为严重。因此，提高诊断的准确性，加强治疗的预后分析对老年淋巴瘤患者临床治疗获得成功具有重要的意义。研究表明，miR-21通过降解靶mRNA，或抑制其翻译对靶基因的表达进行调节，在细胞的分化、增殖和凋亡中发挥着重要的作用，肿瘤患者血清中miR-21的表达可能成为新的肿瘤标志物[1]。该研究通过检测该院2009年1月—2011年12月期间收治的肿瘤患者血清中miR-21的表达，探讨其在老年淋巴瘤患者临床诊治中的意义。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取在该院诊治的62例老年淋巴瘤患者为研究对象。男36例，女26例。患者平均年龄63岁。对患者的肿瘤活检组织和外周血进行收集。并以60名健康体检老年人群外周血作为正常对照组。

1.2 方法

采用miR-21提取试剂盒提取肿瘤组织和血清中的miRNA，用FQ-PCR检测miR-21的表达水平。首先，以15 μL反应体系为载体，混合3 μL逆转录酶与10 ng总RNA， 进行16 ℃30 min、42 ℃30 min、85 ℃5 min的逆转录，取得逆转录产物cDNA。然后，以20 μL反应体系为载体，进行150倍转录产物cDNA的稀释，混合2 μL稀释的cDNA与2 μLTaqMan引物，进行95 ℃10 min的变性，随后进行40个95 ℃15 s，60 ℃ 60 s的循环。最后，以U6snRNA作为内对照，通过2△△△Ct计算改变倍数检测miRNA的表达水平[2]。

2 结果

所有淋巴瘤细胞系中miR-21表达最高为234.86，最低为2.25。而正常对照淋巴细胞中miR-21的相对表达为（1.12±0.03）。与正常淋巴细胞相比，所有淋巴瘤细胞系中miR-21表达均高于正常淋巴细胞，见表1。

3 讨论

目前，从淋巴瘤WHO分类的亚型中可以看出，大约有一半的亚型其发病的中位年龄超过了50岁。可以预计，随着整个社会老龄化的发展，老年淋巴瘤患者将成为淋巴瘤诊疗工作中的重要群体。而老年患者随年龄增加，机体功能逐渐衰退，对化疗、放疗耐受能力下降，同时常伴有心脏病、糖尿病及呼吸道等系统的慢性疾病，易发生并发症，加强治疗的预后分析是老年淋巴瘤患者临床治疗的关键。miR-21是当前的研究热点和前沿之一，它含有22个核苷酸，从长度大约为3 400个核苷酸的前转录本体中分离出来，由单基因编码。miR-21参与细胞生命过程中早期发育、增殖、凋亡、死亡等一系列的重要进程，成为肿瘤诊断的新的分子标志[3]。这必将为进一步提高老年淋巴瘤患者治疗水平奠定基础。

3.1 淋巴瘤患者miR-21的表达分析

3.1.1 调控靶基因 miR-21作为单链非编码RNA，通过与靶基因mRNA互补位点的结合在转录后水平调控靶基因的表达。

3.1.2 预后估计 基因及其蛋白表达肿瘤的发生发在展中起着关键的作用，通过检测肿瘤患者血清中miR-21的表达，可成为预后判断的有利工具。

3.2 淋巴瘤患者miR-21表达的临床意义分析

①以miR-21为靶点设计基因药物，抑制淋巴瘤细胞生长，并诱导细胞凋亡。上述病例研究表明， miR-21在淋巴瘤中表达上调，淋巴瘤细胞miR-21表达量远远超过正常淋巴细胞miR-21表达量，据此可以推测miR-21通过复杂的调控参与了肿瘤的发生、发展[4]。利用这一原理，可从调节肿瘤基因表达水平的角度来实现治疗肿瘤的目的，即应用反义miR-21抑制miR-21的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞凋亡。临床上以miR-21为靶基因，当miR-21在肿瘤中高表达或作为癌基因时，导入与miR-21互补的反义寡聚核苷酸序列AMO，降低其表达水平，有效抑制淋巴瘤细胞生长和促进凋亡。②miR-21表达与化疗药物具有协同作用。目前，有研究证明，抑制miR-21表达能增强白血病细胞对化疗药物的敏感性。同时，研究表明，以miR-21为靶点设计基因药物，抑制淋巴瘤细胞生长，并诱导细胞凋后，临床治疗中可加入拓扑替康（一种DNA拓扑异构酶抑制剂）可以进一步对肿瘤细胞产生杀伤作用。因此，抑制miR-21可以增强肿瘤对化疗药物的敏感性。

[参考文献]

[1] 陈卫群，孔德勇，王卉，等.淋巴瘤患者循环microRNA-21的检测及其临床意义[J]. 重庆医学，2012（6）：21-22，25.

[2] 张继信，吕晓涛，李保玉.microRNA在淋巴细胞分化及淋巴瘤发生中作用的研究进展[J].临床与实验病理学杂志，2009（4）：92-96.

[3] 肖琳，王振宁，徐惠绵.microRNA-21在肿瘤中异常表达的意义[J]. 医学分子生物学杂志，2009，6（5）：463-467.

[4] 张继新，吕晓涛，高颖，等.microRNA-21在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志，2010，26（2）：43-47.

（收稿日期：2012-11-14）