大蒜素对ketr－3裸鼠肾癌移植瘤的抑制作用

莫金水，冯建华，乐有为，邝世航，莫 卒 (广东省深圳市龙岗区龙岗中心医院泌尿外科，广东 龙岗 518116)

肾细胞癌是最常见的泌尿生殖系统恶性肿瘤之一，其发病率位居泌尿生殖系肿瘤的第2位，仅次于膀胱癌。肾癌恶性度较高，且发病率呈现逐年上升的趋势。虽然近年来影像学技术发展迅速，诊断有较大进展，但RCC起病隐匿，早期诊断仍非常困难，约有30%的患者在确诊时已有远处转移。研究显示，大蒜主要是通过其有效成分大蒜素起到对肿瘤的防治作用，但目前大蒜素的抗肿瘤作用机制尚未完全明确。本试验通过建立ketr－3细胞Balb/c裸鼠移植瘤模型，了解大蒜素在动物水平上对肿瘤的抑制作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器:大蒜素注射液是由上海禾丰制药有限公司生产，人肾癌细胞株(ketr－3)由中科院上海细胞所提供，Balb/c裸鼠购自暨南大学医学院动物中心，大蒜素购自新疆华世丹药业有限公司。

1.2 方法

1.2.1 实验准备:ketr－3细胞培养:取 ketr－3细胞用含10%小牛血清RPMI1 640培养基于37℃含5%CO2培养箱培养，3～5 d传代1次。实验动物准备:Balb/c裸鼠24只，雄性，5周龄，SPF级，饲养于暨南大学医学院动物中心SPF级饲养房。

1.2.2 灌服大蒜素药物对裸鼠移植瘤生长的影响:收集指数生长期ketr－3细胞1 000 rpm离心10 min后，NaCl溶液洗涤2～3遍，调整细胞密度为5×107细胞/ml。每只Balb/c裸鼠接种0.2 ml肿瘤细胞悬液于左侧大腿背侧皮下。观察皮下移植瘤的生长状况。标本常规10%甲醛固定24 h后，石蜡包埋，HE染色后，光镜下观察结果。

1.3 统计学处理:统计分析应用SPSS 13.0版统计软件。瘤体体积均用均数±标准差(±s)表示;分析方法为方差分析、两两比较计算P值。检验水准:α=0.01。

2 结果

2.1 大蒜素局部注射对裸鼠移植瘤生长的影响:裸鼠皮下接种ketr－3细胞2周后均成瘤。将移植瘤组织剪碎接种于裸鼠皮下，约十天后成瘤，成瘤率100%，大蒜素治疗组处理后，肿瘤生长明显受到抑制，2周后，NS组与空白组比较，差异无统计学意义(P＞0.05，n=8);DSS组与空白组、NS组比较，差异有统计学意义(P＜0.01，n=8)。

表1 2周后各组裸鼠移植瘤体积(±s)

表1 2周后各组裸鼠移植瘤体积(±s)

注:与NS组比较，①P＜0.01

组别 瘤体体积(mm3)空白对照组1 378.3±118.2 NS对照组 1 365.2±105.4 DSS实验组 879.8±89.3①

2.2 裸鼠移植瘤组织病理学观察:灌服药物2周后，解剖肿瘤，进行HE染色。在HE染色的石蜡切片上可见:NS组细胞核内染色质松散，可见核仁，显示细胞增殖活跃，大蒜素治疗组可见到程度不同的细胞核深染，很少见核仁，显示肿瘤组织生长抑制，见图1。

图1 灌服药物2周后裸鼠肿瘤组织切片HE染色×400

3 讨论

大蒜为单子叶植物百合属植物蒜的鳞茎，含有一些特殊的具有生物活性的物质，如硫化合物(蒜氨酸、蒜油、蒜素、阿霍烯等)、微量元素(高含量的锗、硒、磷、镁等)、超氧化物歧化酶(SOD)等，使大蒜具有广泛的药效。大蒜素是指从植物大蒜中提取的有效成分的总称，他具备多种特别的生物学作用。研究人员通过流行病学资料的分析发现，大蒜能对胃癌、大肠癌、前列腺癌、乳腺癌等多种肿瘤产生预防或治疗作用［1］，显示出大蒜素具备良好的临床治疗效果，由于是植物提取物，他的不良反应很小。化疗药物治疗肾癌效果不佳，而且化疗所导致的不良反应非常大，长期治疗，部分患者难以接受。细胞因子治疗如白细胞介素－2和干扰素为对部分患者具有一定效果，但治疗费用较贵，且易带来较多不良反应。国内外的流行病学调查发现，大蒜素对多种恶性肿瘤如肺癌、前列腺癌等具有一定的抗肿瘤作用［2－3］。

大蒜素由于其独特的生物学特性在某种程度上可直接杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡;大蒜素还可通过激发患者自身免疫系统释放多种活性因子，通过自身机体的细胞免疫和体液免疫抑制肿瘤细胞生长，来达到大蒜素抑制肿瘤生长的作用。与传统肿瘤放疗化疗方案相比较，大蒜素在治疗恶性肿瘤的过程中，不但对机体不良反应轻微，而且还能激发机体自身免疫机制释放多种重要的细胞因子，从而提高了机体自身的免疫力。目前大家对大蒜素抑制癌的形成及生长的研究虽然较多，但对肾癌的研究仍属于起步阶段。肾癌除了早期用手术治疗以外，对中晚期及转移性肾癌尚无其他有效的治疗方法，中晚期肾癌对化疗、放疗均不敏感，而IFN和IL－2等生物治疗的效果目前不能让人满意，化疗总有效率十分低，仅为6%，且不良反应明显。

综上所述，大蒜素具有抑制ketr－3肾癌细胞的作用，具体作用机制有待于深入研究;由此提示，大蒜素在肾癌的临床治疗中具有潜在的应用前景，值得进一步临床研究。

［1］ LI S，Xu W.Effects of allicin on both telomerase activity and apotosis in gastric cancer SGC27901 cells［J］.World JGastroenterol，2003，9(9):1930.

［2］ Arditti FD，Kov AR，Miron T，et al.Apoptotic killing of B－chronic lymphocytic leukemia tumor cells by allicin generated in stiu using a rituximab2alliinase conjugate［J］.Molecular Cancer-Therapeutics，2007，4(2):325.

［3］ Elango EM，Asita H，Nidhi G，et al.Inhibition of cyclooxygenase22 by diallyl sulfides in HEK293 Tcells［J］.Appl Genet，2008，45(4):469.