银丹心脑通软胶囊对脑缺血再灌注大鼠神经功能及梗死体积的影响1）

徐忠祥，姚本海，徐 平，张 骏，范瑞明

中医药对脑缺血再灌注损伤有积极作用［1，2］，能够多环节、多靶点地预防和治疗脑缺血性损伤。银丹心脑通（YDXNT）对缺血性脑损伤具有明确的保护作用［3-5］。本研究以YDXNT对缺血性脑卒中的保护作用为切入点，观察YDXNT对脑缺血再灌注大鼠神经症状学评分及梗死体积的影响，以寻求YDXNT对缺血性脑卒中治疗作用的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD雄性大鼠（SPF级），由第三军医大学大坪

1.2 实验药物 YDXNT浸膏（贵州百灵医药集团提供），尼莫地平片（正大青春宝药业有限公司，批号：国药准字H33022285），10%水合氯醛溶液（遵义医学院附属医院药房提供）。

1.3 实验试剂 4%多聚甲醛、Poly-lysine、氯化-2，3，5-三苯基四氮唑（2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride，TTC）均购自昆明绿盟科技有限公司。

1.4 动物分组 40只健康雄性SD大鼠，体重200 g～240 g，随机分为4组，即假手术组、模型组、尼莫地平组、YDXNT组，每组共10只。尼莫地平组按12 mg／kg给药，银丹心脑通组按0.48 g／kg给药，药物试验前用蒸馏水配制，给药容积1 ml／100 g。预先连续灌胃给药7 d，每日1次，其中假手术组和模型组灌服相当量的蒸馏水，第8天施行造模手术。

1.5 脑缺血再灌注模型大鼠的制备 参照Longa等线栓改良法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。采用Longa等神经功能评分法对术后大鼠评分，分值在2分或2分以上则认为模型制作成功并纳入实验研究。

1.6 神经症状学评分 参照Zea Longa5分制神经功能缺损评分标准。0分，无神经功能缺失症状；1分，轻度局灶性神经功能缺失；2分，中度局灶性神经功能缺失（向左侧转圈）；3分，重度神经功能缺失（向左侧倾斜）；4分，不能自发行走，意识水平降低。

1.7 脑梗死体积测定 使用TTC染色法。将大鼠处死后立即断头取脑，于冰盘上自额极3 mm处向后作厚度为2 mm的冠状切片，置于37℃的2%TTC中避光温育30 min，染色后立即浸入4%多聚甲醛固定保存。滤纸吸去表面液体后用刀片小心刻取未着色部分，分别用电子天平称量着色部分和未着色部分脑组织重量，计算脑片中梗死部分的重量百分比，以此反映脑梗死体积比。

1.8 统计学处理 采用SPSS18.0软件分析。数值变量资料经正态性和方差齐性检验，正态分布资料采用方差分析，有差异者进一步做Bonferroni检验或Games-Howell检验。数值变量采用均数±标准差±s）表示。

2 结 果

2.1 脑缺血再灌注大鼠各组神经症状学评分比较 假手术组评分为0，不进行统计学比较，模型组、YDXNT组及尼莫地平组均能导致神经功能缺损，3组间无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 缺血再灌注大鼠神经症状学评分s） 分

表1 缺血再灌注大鼠神经症状学评分s） 分

组别 神经症状学评分假手术组0模型组 2.375±0.744尼莫地平组 2.250±0.463 YDXNT组 2.125±0.354注：模型组、尼莫地平组及YDXNT组间比较，P＞0.05。

2.2 脑缺血再灌注大鼠各组脑梗死体积比较 脑缺血再灌注大鼠各组脑梗死灶肉眼观察，假手术组无梗死灶，而模型组、尼莫地平组及YDXNT组均有明显梗死灶。

2.3 脑缺血再灌注大鼠各组脑梗死体积测定 与模型组比较，YDXNT组和尼莫地平组均有统计学意义（P＜0.05），提示YDXNT和尼莫地平均能减小脑梗死体积，而YDXNT组和尼莫地平组比较无统计学意义（P＞0.05）。详见表2。

表2 脑缺血再灌注大鼠各组脑梗死体积测定（±s） %

表2 脑缺血再灌注大鼠各组脑梗死体积测定（±s） %

组别 脑梗死体积（梗死重量百分比）模型组11.954±6.024尼莫地平组 3.237±1.9371）YDXNT组 3.625±2.3741）与模型组比较，1）P＜0.05

3 讨 论

银丹心脑通立足于苗族医学“两病两纲”理论，糅合了传统中医的辨证施治思想，精选银杏叶、丹参、灯盏细辛、三七、绞股蓝、大蒜、山楂、天然冰片等八味治疗脑血管病安全有效的草药科学配伍组方而成。银丹心脑通能够改善脑血流量，增加脑供血，抑制血小板聚集，延长血栓形成时间，加速血栓溶解，修复损伤血管，恢复血管弹性，降低血液黏稠度，保持血流通畅，明显降血脂及防止动脉脂质增加，减轻脑缺血组织的炎症反应，调节血压［3-8］。银丹心脑通可以多途径、多靶点的治疗缺血性脑卒中。

本研究通过采用线栓改良法制备大鼠MCAO模型，观察到银丹心脑通及尼莫地平均可以明显减少脑缺血再灌注大鼠的梗死体积（与模型组比较，P＜0.05），但两者之间比较无统计学意义（P＞0.05），银丹心脑通以及尼莫地平对脑缺血再灌注损伤均有一定的保护作用，可以明显减少脑梗死的体积。另外还观察到假手术组大鼠无神经系统缺损的表现，进一步除外造模时手术操作对神经症状学评分造成的影响。银丹心脑通组、尼莫地平组、模型组均有明显神经系统缺损的表现，但3组神经功能评分无统计学意义（P＞0.05）。银丹心脑通能够明显改善脑梗死患者的神经功能缺损以及生活能力［9］。张硕峰等［4］通过采用三氯化铁致大鼠大脑中动脉血栓形成（MCAT）模型，观察到银丹心脑通对缺血性脑损伤具有保护作用，能够明显改善MCAT大鼠术后6 h、24 h神经症状学评分，明显降低脑梗死范围，抑制血小板聚集，改善大鼠的血液流变性。在脑缺血再灌注损伤时，脑梗死体积的测定可以用来作为判断所用药物对脑缺血再灌注损伤是否有保护作用的重要指标之一［10］。本研究结果明确银丹心脑通能够明显减少脑缺血再灌注大鼠脑梗死的体积，虽然与模型组相比银丹心脑通不能明显改善大鼠神经功能，但是仍然认为银丹心脑通对脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。而针对3组MCAO模型大鼠神经症状学评分无统计学意义，考虑可能的原因有以下几点：造模时将入围标准定得过高，可能把药物干预有效但评分达不到纳入标准的大鼠排除在外，这可能是造成3组神经功能评分无差异的主要原因。每组实验大鼠数量偏少，不能充分反映神经功能评分的实际情况。因个体差异的原因，在造模时所插入的线栓不能保证所有的模型均能完全阻断血流。本研究在缺血2 h再灌注后短期内即对MCAO模型大鼠进行神经症状学评分，药物治疗作用时间短暂，这可能也是造成3组神经症状学评分无显著性差异的原因之一。

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［4］ 张硕峰，吴金英，贾占红.银丹心脑通软胶囊对局灶性脑缺血大鼠的保护作用［J］.中西医结合心脑血管病杂志，2009，7（9）：1069-1071.

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［9］ 程爱旭，代景惠.银丹心脑通软胶囊治疗中度急性缺血性脑卒中临床研究［J］.现代中西医结合杂志，2008，17（5）：681-682.

［10］ Culmsee C，Zhu C，Landshamer S，et al.Apoptosis-inducing factor triggered by poly（ADP-ribose）polymerase and Bid mediates neuronal cell oxygen-glucose deprivation and focal cerebral ischemia［J］.J Neurosci，2005，25（44）：1062-1072.