喹喃克林凝胶对大鼠子宫腔堵塞后解剖及组织病理学观察

刘 静 杨 燕 于 玲 吴喜梅 许观照 李欣迎 宋 燕 胥玉梅 陶国振孙 林 高爱萍 张 艳 王鲁沂

山东省计划生育科研所，山东省优生技术重点实验室(济南，250002)

喹喃克林又称阿的平，是吖啶类诱导剂，能促使组织成纤维细胞增生，形成肉芽组织并纤维化。20世纪60年代末，Zipper［1］用喹喃克林悬液封堵大鼠输卵管成功并相继发明了喹喃克林药丸放入子宫腔，融化后液体流入输卵管，使输卵管管口或管腔封堵的女性非手术绝育法(QS)。近些年来国际上已有10万多妇女接受QS证明是安全与可靠的。10多年前美国食品与药物管理局批准QS开展临床试验，Ⅰ期临床研究表明女性肝功、肾功等实验室检查在正常范围内，宫颈细胞学涂片无有害的细胞变化，是安全有效的［2］。喹喃克林封堵输卵管的作用已经被公认，但绝育效果和成功率与手术方法、给药方式和药物载体等因素有着密切的关系。1997年陆为群等［3］曾开展过喹喃克林和植物多糖混悬液注入大鼠子宫的病理学研究。本所从1986年至今先后进行过多种药物和不同方法的输卵管绝育术临床研究和应用。通过观察对比认为，宫腔镜直视下导管插管注药手术方法安全简便、效果可靠。本研究旨在观察单独一次性使用喹喃克林几丁糖凝胶堵塞大鼠子宫腔的效果，以及喹喃克林几丁糖凝胶注入大鼠子宫后，药物附着部位黏膜组织的变化，子宫腔内组织纤维化和管腔梗阻状况，药物对局部和临近组织器官的影响，为宫腔镜下输卵管绝育术推注剂的研究提供动物观察依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物与材料

1.1.1 试剂与仪器 10%、20%、35%的喹喃克林几丁糖凝胶试剂由上海其胜生物有限公司提供复方苯酚糊(上海信谊药厂生产，山东省计划生育科学技术研究所提供);RM2135切片机、DM/LS显微镜(德国徕卡仪器有限公司生产);YB-6LF生物组织石蜡包埋机(湖北省孝感市亚光医用电子技术有限公司生产)。

1.1.2 实验动物及分组 80只SPF级Wistar雌性大鼠购自山东省鲁抗医药股份有限公司动物中心。体重0.18～0.22kg。大鼠按体重随机分为5个试验组:喹喃克林几丁糖凝胶35%组19只，20%组15只，10%组15只;阳性对照复方苯酚糊剂组15只，假手术组16只。

1.2 造模与给药

0.6 %戊巴比妥(0.03g/kg体重)腹腔注射麻醉。剪去下腹正中被毛，常规消毒，于下腹正中切口3cm打开腹腔，暴露两侧子宫和输卵管。用4号针头在一侧子宫靠近阴道端朝向输卵管方向进针并推注生理盐水，确定该侧子宫及输卵管充盈并通畅后，将药剂注满该侧子宫腔，每侧约0.4ml，同法注入对侧子宫［4］。假手术组下腹部正中切口仅暴露子宫，不做处理，即关闭腹腔。术后注射青霉素40 000U/kg体重，每日1次，连续3 d预防感染。手术成功后实际动物数为71只:其中喹喃克林几丁糖凝胶35%组16只，20%组14只，10%组13只，对照组13只，假手术组15只。

1.3 检测指标

1.3.1 一般症状观察 试验期间每天观察动物外观体征、行为活动、腺体分泌、粪便性状等一般情况，记录异常反应和中毒症状。

1.3.2 显微检查 每组在术后第2、4周各处死4只，解剖后暴露动物子宫及周围组织，肉眼观察器官形态，有无充血、水肿、渗出、粘连或坏死后，6号平头针头从阴道向子宫注稀释美兰液，检查管腔通畅情况。取出子宫，肉眼观察管腔横断面管腔阻塞情况，送组织病理学检查［5］。染色方法为苏木素伊红染色。余下动物继续观察至6周，观察方法及指标同前。

2 结果

2.1 实验动物情况

试验期间动物一般状态良好，活动自如，进食、饮水正常，未出现明显不良反应。

2.2 解剖观察

2.2.1 子宫盆腔观察 假手术组手术后2、4、6周子宫及邻近组织器官解剖学观察均正常，子宫壁结构完整，宫腔无堵塞，无脓性分泌物。对照组术后2周子宫与周围组织、肠管和腹后壁粘连严重，宫体充血水肿严重;术后4周子宫僵硬无弹性，盆腔粘连严重;术后6周子宫萎缩僵硬与周围组织、肠管和腹后壁粘连固定。喹喃克林几丁糖凝胶组术后2、4、6周子宫表面光滑，血运正常，肌壁弹性正常，盆腔无渗出及粘连。

2.2.2 管腔阻塞情况 假手术组术后2、4、6周管腔无阻塞和缩小;对照组术后2周管腔完全阻塞。35%糖凝胶组术后2周宫腔基本消失，术后4周管腔完全阻塞;20%和10%糖凝胶组术后2、4、6周管腔明显缩小并间断梗阻，部分输卵管局部积水。假手术组手术2、4、6周后通液顺畅，其余各组各周均显示不通。

2.3 病理切片

2.3.1 黏膜及管腔情况 术后2、4、6周假手术组子宫内膜无粘连，内膜上皮无变性坏死等病理改变(图1-A);对照组宫腔完全被肉芽组织堵塞，肉芽组织毛细血管、成纤维细胞数量多，基质疏松，子宫内膜上皮消失(图1-B)。35%糖凝胶组术后2周子宫壁结构完整，宫腔基本消失无粘连;内膜明显增厚，内膜上皮局部坏死、脱落;术后4周宫腔完全被空泡化的基质细胞和成纤维细胞堵塞，内膜明显增厚，内膜上皮消失(图1-C);术后6周宫腔完全被肉芽组织堵塞。20%喹喃克林几丁糖凝胶组术后2周宫腔缩小，内膜增厚，内膜上皮减少呈低柱状。2.3.2固有层及肌层情况 术后2、4、6周假手术组固有层基质细胞排列致密，腺体无扩张，腺腔内无炎细胞积聚;对照组固有层腺体萎缩数量明显减少。35%喹喃克林几丁糖凝胶组术后2周固有层基质疏松水肿，基质细胞排列稀疏，腺体明显减少，成纤维细胞增多;术后4周固有层基质细胞及成纤维细胞弥漫性空泡化，腺体消失;术后6周固有层肉芽组织中见大量新生毛细血管和成纤维细胞，腺体消失。20%喹喃克林几丁糖凝胶组术后2周，固有层基质疏松，腺体减少;手术后4、6周与术后2周比较，固有层成纤维细胞增多。10% 喹喃克林几丁糖凝胶组手术后2、4、6周组织学改变同20%喹喃克林几丁糖凝胶组。各组肌层外膜均未见明显异常。

2.4 子宫腔测量

对放大40倍病理切片宫腔最大直径进行测量，35%喹喃克林凝胶组和对照组梗阻完全，而假手术组术后2、4、6周的直径分别为1.18mm、1.24mm和1.26mm。

3 讨论

喹喃克林曾长期作为抗疟疾药物大量应用于临床，也用于治疗红斑性狼疮和控制胸、腹手术后的恶性渗出以及治疗贾第虫病、绦虫病等，而用于输卵管绝育术也已经有半个世纪的历史。刘光华等［6］曾对喹喃克林绝育术进行随访研究，结果该法避孕效果明显，避孕失败的主要原因是手术对象术后未按照要求保持臀高体位、复查并获得绝育成功结果前没有坚持避孕和第二次上药。我国自1970年开始在女性非手术绝育术中使用复方苯酚糊剂(由苯酚、喹喃克林和胆影酸各1/3组成)做为粘堵剂，在被动物试验和临床观察证明方法安全、有效、简便的同时深受群众欢迎。粘堵剂“复方苯酚糊”被列入药物学手册，获得上海市药物准字批号［7］。但由于20世纪90年代我国普遍使用输卵管导管盲插技术，插管和注药都不准确，加之该剂型中苯酚造成组织一过性化学性炎性刺激，使部分注药量多的受术者术后出现不同程度的输卵管周围组织炎性反应，甚至盆腔粘连等副反应和并发症。本研究也发现复方苯酚糊组子宫及邻近组织器官炎性反应明显，而喹喃克林几丁糖凝胶各组子宫及邻近组织器官无明显炎性反应。本研究所用天然生物材料医用几丁糖凝胶具有良好的粘附、缓释和载体性能，研究结果证明含35%的喹喃克林几丁糖凝胶完全梗阻所需时间虽较复方苯酚糊略长，但阻塞效果相同，且子宫及盆腔组织器官无明显化学性炎性反应，证明了大鼠宫腔内单独一次性使用喹喃克林阻塞效果是安全可靠的。单独一次性注入同等量的35%喹喃克林几丁糖凝胶(含喹喃克林10.5mg)即会使输卵管腔局部完全梗阻，达到绝育目的。

当前国际上女性绝育术的研究和应用已经进入可视微创历史时期，宫腔镜直视下通过导管向输卵管注入粘堵剂的方法具有可视可控、一次注药微量精确、成功率高、安全无创等优点，能够解决群众畏惧开刀和剖宫产率居高带来的腹部小切口绝育术风险问题，是最容易被广大群众接受也很适合在基层计划生育服务机构开展的绝育方法。喹喃克林几丁糖凝胶粘堵剂的研究将会推动宫腔镜下非手术绝育术的进展和应用。

1 斋泊，丘吉罗.25年来在智利开展喹喃克林绝育的实践:2592例回顾［J］，国际妇产学科杂志，2003，83(增刊2):823-829.

2 李普斯.FDA(美国食品与药品管理局)的QSI期临床研究［J］，国际妇产科学杂志，2003，83(增刊2):845-849.

3 陆卫群，潘钦瑞，朱江，等.大鼠子宫带控释法注入喹喃克林封堵输卵管的研究［J］.遵义医学院学报，1997，5(20):33-35.

4 孙丽珍，王联欢.妇康栓对大鼠输卵管炎性阻塞作用的实验研究［J］.中国中医药科技，1999，6(2):102-103.

5 王静，杨军，刘超.盆腔炎颗粒对大鼠慢性子宫内膜炎疗效的研究［J］.中国实验方剂学杂志，2006，1(12):56-58.

6 刘光华，骆程，王智慧，等.743例喹喃克林栓剂非手术女性绝育术(QS)可接受性、有效性和安全性的随访调查［J］，中国医疗前沿，2009，2(4):103.

7 陈新谦，金有豫，汤光，等.新编药物学［M］.北京:人民卫生出版社，2003:607.