北疆地区3个规模化猪场猪O型口蹄疫抗体监测结果及免疫程序分析
2013-03-23齐向涛许丹丹齐亚银
齐向涛 戚 帅 许 追 欧 都 许丹丹 杨 莉 齐亚银
（新疆石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000)
北疆地区3个规模化猪场猪O型口蹄疫抗体监测结果及免疫程序分析
齐向涛 戚 帅 许 追 欧 都 许丹丹 杨 莉 齐亚银*
（新疆石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000)
为了查明北疆地区3个规模化猪场O型口蹄疫病毒的抗体阳性率及免疫合格率，并提出针对该病的最佳免疫程序，分别采集北疆地区3个规模化猪场的公猪、后备母猪、哺乳母猪、妊娠母猪、7日龄、14日龄、21日龄、30日龄、40日龄和55日龄仔猪等不同猪群的血液，分离血清，共计1 500份。采用间接ELISA方法检测其抗体。结果显示，3个规模化猪场不同猪群的口蹄疫抗体阳性率及免疫合格率之间差异显著 （≤0.05），口蹄疫总体抗体阳性率为86.4%。3个猪场口蹄疫抗体阳性率分别为90.3%、90.6%、78.4%，不同猪群的抗体阳性率分别为公猪100%、后备母猪100%、哺乳母猪100%、妊娠母猪100%、7日龄仔猪91.9%、14日龄仔猪92%、21日龄仔猪87.6%、30日龄仔猪83.4%、40日龄仔猪73.9%、55日龄仔猪58.2%。综合本研究结果及该猪场前期的免疫程序，建议仔猪的口蹄疫免疫程序为40日龄首次免疫，54日龄二次免疫。
口蹄疫抗体；间接ELISA；免疫程序
口蹄疫（Foot and Mouth Disease, FMD）是由口蹄疫病毒引起的以感染偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病，世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物传染病，我国规定为一类动物疫病。该病传播途径多，传播速度快，传染性强，病原变异大，危害严重，曾多次在世界上流行。FMD可侵害多种动物，以偶蹄兽最易感。口蹄疫病毒具有传播迅速和传播范围广的特点，其传播方式有蔓延式和跳跃式，一般呈流行性，但也可形成跨地区的大流行。在自然状态下，数个感染性病毒颗粒即可引起动物发病，由于该病的发生会造成严重的经济损失和政治影响，因此，其防治工作得到世界各国的高度重视[1]。
母源抗体既能保护幼畜免遭病原侵袭、抵抗感染，又会降低疫苗免疫的效果。若免疫时间过早，母源抗体可能会干扰疫苗的作用而导致免疫失败；若免疫时间过迟，母源抗体水平过低，易引起发病[2]。适时免疫接种，一方面要避开母源抗体的干扰，一方面又要维持抗体对猪群的免疫保护率。口蹄疫免疫抗体检测是预防和控制口蹄疫发生的重要手段。猪场尤其是规模化养猪场应增强预防意识，加强口蹄疫免疫监测，制定合理有效的免疫程序[3]。
为了解北疆地区3个规模化猪场猪O型口蹄疫免疫效果，给养殖户提供科学合理的口蹄疫免疫方案，本研究以北疆地区3个规模化猪场为研究对象，收集其背景资料，包括品种、饲养管理措施、免疫防治程序、药物保健方案等，并分别采集北疆地区3个规模化猪场的公猪、后备母猪、哺乳母猪、妊娠母猪、7日龄仔猪、14日龄仔猪、21日龄仔猪、30日龄仔猪、40日龄仔猪、55日龄仔猪等不同阶段猪群的血清，共计1 500份，对试验的3个规模化猪场进行猪O型口蹄疫抗体水平的血清学调查和仔猪O型口蹄疫母源抗体消长规律研究，依据监测结果，制定合理的猪O型口蹄疫免疫程序。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒（武汉科前动物生物制品公司）、酶标仪（美国BioTek公司），微量移液器（德国Eppendorf公司），恒温培养箱（北京市光明医疗仪器厂）。
1.2 试验样品
1.2.1 血清样品的准备
由北疆A、B、C 3个规模化猪场＞（种母猪 200头）中分别采集公猪血清60份、后备母猪血清120份、哺乳母猪血清120份、妊娠母猪血清120份、7日龄仔猪血清180份、14日龄仔猪血清180份、21日龄仔猪血清180份、30日龄仔猪血清180份、40日龄仔猪血清180份、55日龄仔猪血清180份。共计1 500份。
1.2.2 样品采集时间、方法及样品储存血清共分4次均等采集，分别为2012年7月、2012年10月、2013年1月、2013年4月；采血方式为前腔静脉采血（个别成年猪只采取耳缘静脉采血）；血液采集后用高速离心机提取-血清，置于 20℃冰箱储存备用。
1.3 试验方法与判定
1.3.1 试验方法
按照猪O型口蹄疫抗体检测ELISA试剂盒操作。
1.3.2 结果判定
在酶标仪上测各孔的OD630值。阳性对照孔的平均OD630值均≥0.8，阴性对照孔的平均OD630值均＜0.3时，试验有效。样品OD630值≥0.4时判定为阳性；样品OD630值＜0.4时判定为阴性。
1.4 数据处理与统计分析
用EXCEL软件进行原始数据处理，用SPSS 11.5对试验数据进行t检验。
2 结果与分析
2.1 规模化猪场口蹄疫抗体监测结果
统计4次血清检测结果并汇总，运用EXCEL软件进行原始数据处理，用SPSS 11.5对试验数据进行t检验。3个规模化猪场不同猪群O型口蹄疫抗体水平检测结果见表1。
2.2 不同猪场及猪群O型口蹄疫抗体检测结果比较
2.2.1 不同猪场猪O型口蹄疫抗体检测结果比较
3个规模化猪场猪O型口蹄疫抗体阳性率分别为：A场90.3%、B场90.6%、C场 78.4%；血清抗体的ELISA测定平均值为：A场1.232、B场1.182、C场1.388。由结果可以看出，A场总体免疫效果最好，B场免疫结果也比较好，特别是总体的抗体阳性率达到了90.6%，而C场的免疫效果最差，尤其是对仔猪的免疫保护率较低，而且抗体的均匀度不高。
表1 3个规模化猪场口蹄疫抗体的监测结果
2.2.2 不同猪群O型口蹄疫抗体检测结果比较
对各猪群抗体检测结果加以比较，公猪、后备母猪、妊娠母猪、哺乳母猪的抗体阳性率均为100%，7日龄仔猪为91.9%，14日龄仔猪为92%，21日龄仔猪为 87.6%，30日龄仔猪为83.4%，40日龄仔猪为73.9%，55日龄仔猪为58.2%。
不同猪群O型口蹄疫血清抗体的ELISA测定结果显示，公猪ELISA测定平均值为1.725，后备母猪为1.497，妊娠母猪为 1.438，哺乳母猪为1.523，7日龄仔猪为1.653，14日龄仔猪为 1.394，21日龄仔猪为1.312，30日龄仔猪为1.184，40日龄仔猪为0.819，55日龄仔猪为0.651。
综上所述，仔猪出生后抗体水平就开始下降，而在30日龄后下降速度加快。
2.3 检测结果分析
通过对3个规模化猪场不同猪群O型口蹄疫抗体检测结果的对比分析发现，3个猪场的猪群虽都经猪O型口蹄疫疫苗免疫，但抗体阳性率及免疫合格率之间差异显著（≤0.05），不同猪场及猪群间的抗体分布并不均匀。公猪和后备母猪抗体阳性率最高，仔猪抗体阳性率偏低，55日龄仔猪的免疫效果不理想，群体整体抗体水平较低，其原因可能为：仔猪免疫力较差，免疫效果不理想；免疫程序不科学，免疫时机不适宜，不能产生良好的免疫应答。如母源抗体消失后而疫苗免疫没有及时跟进，产生免疫保护空档。
表2 3个规模化猪场的口蹄疫免疫程序
3 讨论
3.1 加强口蹄疫免疫抗体监测
规模养殖户应重视口蹄疫免疫抗体监测。开展抗体监测的目的不仅仅是诊断，更主要的是评价猪群整体的免疫状况，并且根据监测结果对免疫方案进行适当的调整或提供一些预警机制。对于生产母猪，猪场应根据自身实际，严格实行全进全出制。对于一些生产流程相当规范的猪场，可以跟胎次免疫，但每年需合理地进行2～3次免疫抗体监测。对于仔猪，建议在首次免疫之前检测其体内的母源抗体水平，以确定最佳首次免疫日龄。免疫过早，母源抗体影响太大，容易造成免疫失败或群体抗体水平不均衡。免疫过迟，口蹄疫免疫空白期延长，染病危险增加。同时最好在二次免疫前检测口蹄疫病毒抗体水平，以确定合理的免疫程序。
3.2 3个规模化猪场的口蹄疫免疫程序
现在在我国受口蹄疫威胁的地区，一般采用28～35日龄首次免疫，首次免疫后1个月进行二次免疫的方案。但这种免疫方案存在很多不理想之处。在本试验过程中，笔者发现3个规模化猪场采用的免疫程序与一般的免疫程序不同。具体免疫程序如下：公猪、经产母猪每年春、秋各普免1次；经产母猪每次断奶前免疫1次；后备母猪配种前免疫2次；仔猪断奶前后，即30～35日龄首次免疫，50～70日龄二次免疫。在本研究中，仔猪口蹄疫免疫抗体水平参差不齐、波动较大，推测可能是仔猪的首次免疫及二次免疫日龄偏早造成的。30日龄仔猪体内的母源抗体水平依然较高，会造成免疫抑制，所以此阶段不能进行首次免疫，建议仔猪的首次免疫时间推迟到40日龄。这样在仔猪55日龄左右时，抗体水平不至于太低，可在此时进行第二次免疫。经调整后，3个规模化猪场的口蹄疫免疫程序如表2。
[1]裔群英.盐城地区生猪口蹄疫免疫抗体与疫情监测.南京:南京农业大学，2005.
[2]王峰.猪O型口蹄疫疫苗不同猪龄免疫抗体分析试验.广东农业科学，2011 (21）：118-119.
[3]Chenard G,Miedema K,Moonen P,et al.A solid-phase blocking ELISA for detection of type O foot-and-mouth disease virus antibodies suitable for mass serology.Journal of Virological Methods, 2003,107(1):89-98.
S851.35
B
1673-4645(2013)09-0045-03
2013-07-22
齐向涛（1987-），男，陕西人，硕士研究生
齐亚银（1980-），男，宁夏人，博士，副教授，主要从事动物传染病的诊断与防治工作
