星宿菜提取物对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

陆海鹏陆翠林付远清

（1广西民族医院药学部，广西南宁530001；2广西中医药大学附属瑞康医院，530011；3北海市卫生学校附属医院药剂科，广西北海536100）

星宿菜提取物对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

陆海鹏1陆翠林2付远清3

（1广西民族医院药学部，广西南宁530001；2广西中医药大学附属瑞康医院，530011；3北海市卫生学校附属医院药剂科，广西北海536100）

目的：观察星宿菜水提取物及醇提取物对小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法：105只小鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯组、星宿菜水提取物高剂量组、星宿菜水提取物低剂量组、星宿菜醇提取物高剂量组、星宿菜醇提取物低剂量组，每组15只。小鼠尾静脉注射卡介苗（BCG）联合脂多糖（LPS）建立免疫性肝损伤模型。连续给药12 d后，测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性及肝组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-Px）水平。结果：与模型组相比，星宿菜提取物可显著降低免疫性肝损伤模型小鼠血清中ALT、AST活性、肝组织MDA含量，升高肝组织SOD、GSH-Px活性（P＜0.05）；高剂量组效果优于低剂量组（P＜0.05）；星宿菜醇提取物效果最佳。结论：星宿菜提取物对小鼠免疫性肝损伤具有保护作用，其机制与抗脂质过氧化有关。

星宿菜；水提取物；乙醇提取物；免疫性肝损伤

星宿菜（Lysimachia fortuner Maxim.）为报春花科珍珠菜属植物，又名红根草、红丝毛根，假辣蓼等，以全株入药，可清热利湿、凉血活血、解毒消肿，富含黄酮类化合物[1-2]。作为广西民间常用药材，虽然相关文献报道较少，其抗炎作用在临床用药治疗的实践中已经得到证实，本研究采用给小鼠尾静脉注射卡介苗（BCG）联合脂多糖（LPS）建立小鼠免疫性肝损伤模型，观察星宿菜提取物对小鼠免疫性肝损伤相关性指标的干预调节作用。

1 材料

1.1 实验动物

清洁级昆明种小鼠，体质量（20±2）g，雌雄兼用，由广西医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：2010A036。

1.2 药品与试剂

星宿菜植物采自广西防城、桂林、百色、钦州、柳州、河池、南宁等地，经鉴定为报春花科珍珠菜属植物星宿菜，星宿菜水提取物和乙醇提取物的样品由我院实验室自行制备，水提取物稠膏浓度为2.16（g生药 /mL），醇提取物稠膏浓度为 3.32（g生药/mL），使用时用蒸馏水稀释成相应的浓度。BCG（中国生物技术集团公司上海生物制品研究所，批号：2010100101）；大肠杆菌 LPS（Sigma公司，批号：20110210）；联苯双酯（广州星群药业股份有限公司，批号：20101201）；丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品。

1.3 仪器

紫外-可见分光光度计UV-2550（日本岛津）；HD-F2600 plus全自动生化分析仪（泰诺科贸公司），JY92-2D超声波细胞粉碎机（宁波新芝科器研究院），TE214S型万分之一电子天平（德国Sartorius公司）。

2 方法

2.1 动物分组

清洁级昆明种小鼠105只，雌雄兼用，随机分为正常组、模型组、联苯双酯组（0.6 g/kg）、星宿菜水提取物高剂量组（20 g/kg）、星宿菜水提取物低剂量组（10 g/kg）、星宿菜醇提取物高剂量组（20 g/kg）、星宿菜醇提取物低剂量组（10 g/kg），共7组，每组动物15只。

2.2 免疫性肝损伤动物模型的建立及处理[3-4]

造模第1天除正常组外，其余各组小鼠在给药前均由尾静脉注射BCG溶液0.2 mL（用生理盐水配制BCG溶液，使每毫升约含108个活菌），各治疗组按0.2 mL/10 g的给药体积灌胃小鼠，正常组和模型组给予等体积蒸馏水，每天给药1次，连续给药12 d，给药期间动物正常饮食及饮水。12 d后除正常组给予等体积溶媒外，各组小鼠尾静脉注射LPS 7 μg/只（0.2 mL）。禁食不禁水12 h后，摘除眼球后经眼球后静脉丛取血，处死小鼠，取肝脏做相关检测。

2.4 检测指标及方法

离心分离小鼠血清，按试剂盒说明用HD-F2600 plus全自动生化分析仪测定ALT、AST。小鼠肝脏生理盐水漂洗后，称取0.4 g，用超声波细胞粉碎机匀浆，低温离心，制成10%的肝组织匀浆，按试剂盒说明测定肝匀浆中SOD、MDA、GSH-Px活性。

2.5 统计学处理

用SPSS 13.0统计软件分析数据，计量资料以x±s表示，组间的比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验，P＜0.05有统计学意义。

3 结果

3.1 星宿菜提取物对免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST的影响

与模型组相比，星宿菜水提取物高、低剂量组，醇提取物高、低剂量组均能降低免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性（P＜0.05）；在降低ALT水平方面，星宿菜醇提取物高剂量组的效果优于星宿菜水提取物高、低剂量组、星宿菜醇提取物低剂量组（P＜0.05），效果与联苯双酯组相当（P＞0.05），星宿菜水提取物高剂量组优于低剂量组（P＜0.05）。在降低AST水平方面，星宿菜醇提取物高剂量组的效果和星宿菜水提取物高剂量组、联苯双酯组相当（P＞0.05），均优于星宿菜水提取物低剂量组、星宿菜醇提取物低剂量组（P＜0.05）。结果见表1。

表1 星宿菜提取物对小鼠血清ALT、AST的影响（±s，n=15）

表1 星宿菜提取物对小鼠血清ALT、AST的影响（±s，n=15）

注：*与正常组比较，P＜0.05；#与模型组比较，P＜0.05；△与联苯双脂组比较，P＜0.05；◇与星宿菜水提取物高剂量组比较，P＜0.05；□与星宿菜醇提取物高剂量组比较，P＜0.05

组别 剂量（g/Kg） ALT（U/L） AST（U/L）正常组 - 23.55±7.42 32.94±7.19模型组 - 56.12±10.31*65.51±13.78*联苯双酯组 0.6 33.26±10.90*#42.29±9.18*#星宿菜水提取物高剂量组 20 40.08±6.53*#△□46.49±9.62*#低剂量组 10 46.01±11.57*#△◇□55.15±9.08*#△◇□星宿菜醇提取物高剂量组 20 32.93±11.55*#44.33±11.24*#低剂量组 10 42.16±13.03*#△□49.84±12.15*#△

3.2 星宿菜对小鼠肝组织匀浆SOD、MDA、GSH-Px的影响

模型组小鼠组肝组织匀浆MDA水平升高，同时SOD、GSH-Px水平降低，星宿菜提取物可以显著降低小鼠肝组织匀浆MDA的水平并提升SOD、GSH-Px水平（P＜0.05）。在提升SOD水平方面，星宿菜水提取物及醇提取物高剂量组均优于低剂量组（P＜0.05），两者效果相当（P＞0.05），与联苯双脂组效果相当（P＞0.05）。在降低MDA水平方面，星宿菜醇提取物高剂量组效果与联苯双脂组效果相当（P＞0.05），优于星宿菜水提取物高、低剂量组、星宿菜醇提取物低剂量组（P＜0.05），而星宿菜水提取物高剂量组效果优于星宿菜水提取物低剂量组及星宿菜醇提取物的低剂量组（P＜0.05）。在提升GSH-Px水平方面，星宿菜醇提取物高剂量组效果与联苯双脂组相当（P＞0.05），优于星宿菜水提取物低剂量组及星宿菜醇提取物低剂量组（P＜0.05），星宿菜水提取物高剂量组效果与联苯双脂组比较，差别没有统计学意义（P＞0.05），但效果优于星宿菜水提取物低剂量组及星宿菜醇提取物低剂量组（P＜0.05）。结果见表2。

表2 星宿菜提取物对小鼠肝组织匀浆SOD、MDA、GSH-Px的影响（±s，n=15）

表2 星宿菜提取物对小鼠肝组织匀浆SOD、MDA、GSH-Px的影响（±s，n=15）

注：*与正常组比较，P＜0.05；#与模型组比较，P＜0.05；△与联苯双脂组比较，P＜0.05；◇与星宿菜水提取物高剂量组比较，P＜0.05；□与星宿菜醇提取物高剂量组比较，P＜0.05

组别 剂量（g/Kg） SOD（U/mg） MDA（nmol/mg） GSH-Px（U/mg）正常组 - 166.73±19.20 9.22±2.20 234.23±24.91模型组 - 71.46±13.27*22.38±4.16*158.55±21.27*联苯双酯组 0.6 131.59±22.58*#12.80±2.71*#204.26±34.22*#星宿菜水提取物 高剂量组 20 126.36±21.96*#15.77±3.81*#△188.03±21.36*#低剂量组 10 91.82±21.24*#△◇□17.94±4.44*#△◇□178.49±35.51*#△◇□星宿菜醇提取物 高剂量组 20 129.44±25.25*#13.71±2.99*#◇196.37±24.13*#低剂量组 10 99.12±25.24*#△◇□16.25±3.15*#△◇□186.39±28.74*#◇△

4 讨论

星宿菜作为广西民间常用药材，其抗炎作用在临床实践中已经得到证实，亦常配伍用于各种肝炎的治疗，提示星宿菜具有抗肝损伤作用。本研究通过建立小鼠免疫性肝损伤模型，同时给予不同剂量星宿菜提取物预防治疗，分析星宿菜提取物对小鼠血清ALT、AST活性及肝组织匀浆SOD、MDA、GSH-Px水平的影响，旨在通过实验证实星宿菜抗免疫性肝损伤及抗过氧化脂质作用，为综合开发利用星宿菜资源提供数据支持。

本研究显示星宿菜水提取物及醇提取物高、低剂量均能降低免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST含量，降低肝脏MDA含量，提高SOD及GSH-Px含量，高剂量组效果总体优于低剂量组，星宿菜醇提取物效果最优，证实星宿菜提取物对小鼠免疫性肝损伤具有保护作用，其机制可能与抗脂质过氧化及清除自由基有关[5-6]。

山柰酚及槲皮素都是星宿菜的有效成分，具有抗菌、抗炎、抗病毒及镇痛等作用[7-9]，付远清等[10]建立了星宿菜中山柰酚及槲皮素含量的HPLC测定方法，本研究初步证实星宿菜提取物对免疫性肝损伤具有保护作用，在相关研究[11-14]基础上，可进一步研究星宿菜的急性毒性以及对四氯化碳、硫代乙酰胺等化学因素所致肝损伤动物模型的保护作用，深入揭示其保肝护肝、抗脂质过氧化、自由基清除模式、抗炎及免疫调节的机制。此外，由于星宿菜全株入药，有必要分部位筛选其治疗肝损伤效果最好的药用部位及最佳剂量。

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Protective Effects of Lysimachia Fortuner Maxim.Extract on Immunological Hepatic Injury in Mice

Lu Haipeng1，Lu Cuilin2，Fu Yuanqing3（1 Pharmacy Department of Guangxi National Hospital，Guangxi Nanning 530001，China；2 Pharmacy Department of the Affiliated Ruikang Hospital of Guangxi Traditional Chinese Medical University，530011；3 Pharmacy Department of the Affiliated Hospital of Beihai Health School，Guangxi Beihai 536100）

Objective：To study the protective effects of both aqueous and ethanol extracts of Lysimachia fortuner Maxim.on immunological hepatic injury in mice.Methods：About 105 mice were randomly divided into normal group，model group，bifendate group，high dose and low dose groups of Lysimachia fortuner Maxim.aqueous extracts，and high dose and low dose groups of Lysimachia fortuner Maxim.ethanol extracts.An immune liver injury model was established via mouse tail vein injection with BCG combined with LPS.The ALT and AST levels in mouse serum and MDA，SOD and GSH-Px activites in hepatic homogenate were determined.Results：Lysimachia fortuner Maxim.extracts significantly decreased the serum transaminase activities and the MDA content，and prevented the SOD and GSH-Px activities in hepatic homogenate. The effects of high dose groups were better than those of low dose groups and the ethanol extracts showed the best effects.Conclusion：Lysimachia fortuner Maxim.extracts showed significant protective effects on immunological hepatic injury in mice.

Lysimachia fortuner Maxim.；Aqueous Extract；Ethanol Extracts；Immunological Liver Injury

10.3969/j.issn.1672-5433.2013.02.007

2012-04-13）

陆海鹏，男，主管药师。研究方向：药事管理、药物制剂。通讯作者E-mail：luhaipeng.nanning@gmail.com