Smad4蛋白在胃癌中的表达及意义

刘海旺，李春辉，程 玉(承德医学院附属医院病理科，河北承德 067000)

Smad4蛋白在胃癌中的表达及意义

刘海旺，李春辉△，程 玉
(承德医学院附属医院病理科，河北承德 067000)

目的:观察胃癌Smad4蛋白的表达情况及与胃癌临床病理特征的关系。方法:应用免疫组织化学染色SP法检测25例正常胃黏膜、60例胃癌组织Smad4蛋白的表达情况。结果:胃癌组织Smad4蛋白的阳性表达率(70.00%)明显低于正常胃黏膜(92.00%，P＜0.05)。胃癌组织Smad4蛋白的表达与胃癌分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关(P＜0.01，P＜0.05)。结论:胃癌组织Smad4蛋白表达降低可能是胃癌发生发展的重要因素。

胃癌;Smad4蛋白;免疫组化

胃癌在我国发病率较高，在我国其发病率和死亡率居各类肿瘤的首位，严重威胁人们的健康。但胃癌的发病机制目前尚未完全明确，随着分子生物学的发展，胃癌发病机制的研究成为了目前的研究重点。Smad4作为一种肿瘤抑制基因，是TGF-β1信号转导通路必须的中介分子，对维持细胞的正常生长发育具有重要作用。Smad4功能失活或下调会使信号转导中断，胃腺上皮细胞失去TGF-β1/Smads信号通路的正常抑制性调节作用，细胞增殖和分化异常进而导致肿瘤的发生发展。本研究通过免疫组化法，观察Smad4蛋白在胃癌组织的表达情况，探讨Smad4在胃癌进展中的作用及其与胃癌临床病理特征的关系，为临床判断胃癌预后提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源承德医学院附属医院2010年9月-2012年2月手术切除经病理证实为胃癌的标本60例，以及25例胃癌远端的正常黏膜。所有患者术前未经放疗、化疗。组织常规取材后固定于中性甲醛，常规石蜡包埋，连续切片，厚4μm。由2名有经验的病理医师进行双盲独立阅片，镜检胃癌组织学类型、分化程度及淋巴结转移情况。

1.2 患者一般情况60例胃癌患者中，男48例、女12例，年龄45-77岁，平均年龄(58.5±10.0)岁;高中分化24例、低分化者36例，无淋巴结转移者25例、有淋巴结转移者35例，Ⅰ+Ⅱ期28例、Ⅲ+Ⅳ者32例。25例正常胃黏膜，男16例、女9例，年龄46-72岁，平均年龄(60.0±6)岁。

1.3 免疫组化染色检测Smad4蛋白的表达及结果判定

小鼠抗Smad4单克隆抗体，购自福州迈新生物技术开发有限公司，采用SP免疫组化法，Smad4单克隆抗体稀释倍数为1:200。实验步骤按说明书进行，DAB显色，苏木素复染细胞核。以PBS代替一抗作为阴性对照，用已知正常胃黏膜组织的标准阳性切片作为阳性对照。以胞浆中出现棕色或棕褐色颗粒为Smad4阳性反应。每例标本随机选取5个高倍镜视野(×400)，每个视野计数200个细胞，以＞50%的细胞出现棕色或者棕褐色，作为Smad4蛋白阳性表达，＜50%判定为阴性[1]。

1.4 统计处理采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，行卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Smad4蛋白在不同胃组织中的表达正常胃黏膜可见Smad4蛋白阳性表达，以腺体颈部和底部较多，在胞浆内可见棕色颗粒，着色深浅不一。25例胃正常黏膜Smad4蛋白阳性表达率为92.00%(23/25)，60例胃癌组织Smad4蛋白阳性表达率为70.00%(42/60);胃癌组织Smad4蛋白阳性表达率明显低于胃正常黏膜(P＜0.05)。见附表。

2.2 Smad4蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系胃癌组织Smad4蛋白的表达与胃癌分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关(P＜0.01，P＜0.05):高中分化明显高于低分化，无淋巴结转移高于有淋巴结转移，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期高于Ⅲ+Ⅳ期。见附表。

附表 胃癌组织Smad4蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

3 讨论

Smad4基因定位于染色体18q21，所编码的Smad4蛋白是TGF-β1信号转导通路所必须的中介分子，对维持细胞的正常生长发育起重要作用，使TGF-β1能在不同的环境下发挥多种功能产生各种效应，并可能与肿瘤的发生发展密切相关。有研究发现，多数胰腺癌存在Smad4基因的缺失或突变[2]，而Smad4的失活也可见于胃癌[3]、结直肠癌[4]等。

Smad4被认为是通用调节因子，它几乎能与所有活化的受体调节型Smads蛋白结合形成低聚体复合物。Smad4基因通过TGF-β1信号通路抑制上皮细胞的生长，Smad4蛋白的缺乏或下调可能是胃癌细胞逃逸TGF-β系统生长抑制的原因之一[2-4]。目前认为，胃癌是正常胃黏膜细胞在各种致癌因素的作用下，通过肠上皮化生、不典型增生等癌前病变，逐渐演变而来。Smad4作为一种肿瘤抑制基因，突变后的Smad4蛋白构象发生改变，不能与磷酸化的Smad2和Smad3结合，从而不能发挥调控转录的作用[5]。

Leng等[6]报道，胃癌组织Smad4蛋白的表达明显低于癌旁组织，并且Smad4蛋白表达与胃癌组织分化程度有关，分化程度低的胃癌组织Smad4的表达明显低于分化程度高的胃癌组织，这与本研究结果一致。李强等[7]的研究表明，贲门癌Smad4表达与分化程度和年龄有关，而发生于胃其它部位的肿瘤Smad4表达与分化程度和年龄无关，因此表明Smad4蛋白表达下降是胃腺上皮细胞癌变过程中频发的分子事件，并且与细胞恶变的进展程度和分化程度密切相关。

本研究发现，胃癌组织Smad4的表达明显低于正常胃黏膜，并且胃癌组织Smad4蛋白的表达与胃癌分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关:低分化明显低于高、中分化，有淋巴结转移明显低于无淋巴结转移，TNMⅢ+Ⅳ期明显低于Ⅰ+Ⅱ期。因此表明，Smad4蛋白表达降低在胃癌的发生发展过程中具有重要作用。

[1]徐岩，陈亚男，王振宁.胃癌癌变过程中Smad4表达的变化及其与临床病理特征的关系[J].世界华人消化杂志，2007，15(13):1510-1515.

[2]刘成敏，张成仁，王秀梅.Smads介导的TGF-β信号通路与肿瘤关系的研究进展[J].中华肿瘤防治杂志，2010,17(8): 631-634.

[3]Kim JY, Park DY, Kim GH, et al. Smad4 expression in gastric adenoma and adenocarcinoma:frequent loss of expression in diffuse type of gastric gastric adenoma[J]. Histol Histopathol,2005, 20(2):543-549.

[4]IjichiH, IkenoueT, KatoN, et al. Systematic analysis of the TGF-bete-smad signaling pathway in gastrointestinal cancer cell [J]. Biochem Biophys Res Commun, 2001,289(2):350-357.

[5]顾红兵，李继坤.TGF-β/Smads信号通路与胃癌关系的研究进展[J].现代生物医学进展，2010，10(3):574-577.

[6]Leng A, Liu T, He Y, et al. Smad4/Smad7 balance: a role of tumorigenesis in gastric cancer [J]. Exp Mol Pathol, 2009, 87(1):48-53.

[7]李强，周永宁，张志镒.Smad4在贲门及非贲门癌中的表达及其与生存的关系[J].第四军医大学学报，2009，30(15):1413-1416.

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF SMAD4 PROTEIN EXPRESSION IN GASTRIC CARCINOMA

LIU Hai-wang, LI Chun-hui, CHENG Yu
(Pathology Department, the Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To observe the expression of smad4 protein in gastric carcinoma and investigate the relationships between Smad4 protein expression and clinical pathological features of gastric carcinoma.Methods:SP immunohistochemical staining was used to detect the expression of Smad4 protein in 25 cases normal gastric mucous membrane and 60 cases gastric carcinoma.Results:The positive rate of Smad4 in gastric carcinoma was 70.00%, which was obviously lower than that in normal gastric mucous membrane (92.00%, P＜0.05). The Smad4 protein expression in gastric carcinoma had relations with differentiated degree of gastric carcinoma, lymph node metastasis and TNM stage (P＜0.01, P＜0.05). Conclusions: The low expression of Smad4 protein may play an important role in development of gastric carcinoma.

Gastric carcinoma; Smad4 protein; Immunohistochemistry

R735.1

A

1004-6879(2013)04-0279-03

2012-12-31)